植病研究法思考题

柯赫氏法则的内容有哪些？某种病害经常与特定的微生物有关，通过对感病组织的镜检往往可看到这种微生物的存在；

从病组织上可以分离得到这种微生物并获得纯培养；用分离所得的纯菌种接在健康的寄主植物上，能引致相同的病害；从接种后发病的植株上，能再分离到原来的微生物。简述植物病原真菌组织分离法和稀释（抱子）分离法的适用材料及优缺点。组织分离法材料：斑点病病原真菌的分离、维管束组织内病原真菌的分离、根腐的分离、肉质组织中病

菌的分离、种子内病菌的分离。优点：简便，后代不易变异，能保持原菌种优良特性缺点：如果菌丝含量少，则往往用此方法不成功稀释分离法材料：主要用于分离细菌和酵母菌，或有些产生大量弛子的病原真菌优点：生活力强，容易取得缺点：个体小，数量大，计数不方便，容易产生变异当你在田间发现--种你不熟悉的病害时，将根据田间观察到的那些情况初步判断它可能

是生理性病害、真菌性病害、细菌性病害或者是病毒病？看症状类型：通常我们把生病植物变化分为五大类型，即腐烂、坏死、变色、萎篇、畸形。

由于真菌的种类很多，不同真菌能够造成以上五类病害，其中最常见的是坏死和腐烂，如玉

米大小斑病、小麦叶枯病等各种形状的叶斑病，坏死发生在根部或茎秆上就形成枯萎病、根

腐病，真菌造成的腐烂有的较干有的湿润且没有臭味，有衣服发霉或发酵的香味，常常长出

各种颜色的霉层或小黑点、小黑粒；细菌通常破坏细胞壁，让细胞内的物质外渗或阻塞水和营养物质在植物体内运输，所以主要

造成腐烂、萎蒿症状，腐烂后往往出水很多，烂成一滩泥旦发出臭味，病斑很像水浸或油浸

状，边缘有点透明湿润条件下，能够在发病部位看到亮黄色小珠子的菌脓，细菌病害的分布

常与流水、淹水、雨滴飞溅有关；而病毒病害常和传毒昆虫的活动有关，观察病害田间分布情况，也可间接推测植物病毒对寄

主的危害，病毒侵入植物一般不会立刻杀死植物，主要改变生长发育过程，引起植株颜色或

形状的改变，我们叫它变色或畸形；生理病害由于管理不当和不良环境影响而使植物生长不正常，表现出来的症状称为生理病害,

是非生物病害，不具有侵染性，生理病害共同特征是病株表面或内部没有任何病征。这类病

害明显特点是一般在田间大面积同时发生，同一时间、植株相同部位和器官出现基本相同症

状，常见有低温障碍、缺素症、激素中毒、肥害及药害所造成的生理性障碍。在田间应如何区分植物病毒病与其他侵染性病害？怎样判断植物病毒病和非侵染性病

害？侵染：（1）病毒病害在植物表面绝对没有病征，而区别于线虫虫体、细菌菌脓、真菌的子实

体等病征的出现（2）系统侵染病毒病的症状在新展幼叶上更重，而其他病害则大多在老叶

上症状更明显。非侵染：（1）病毒病有发病中心或中心病株，病情有轻有重，早期病株点片分布，而非侵染

性病害大多同时大面积发生，病情较一致；（2）发生病毒病的植株多为系统感染，症状分布

不均一，新叶新梢上症状最明显，而生理性病害大多比较均一，老叶、老枝更为明显（3）

病毒病有传染性，非传染性病害没有传染扩散的过程；（4）病毒病害症状往往表现为花叶、

黄化、矮缩、丛生等，少数有脉带、环斑、耳突、斑驳等特征性症状。此外，随着气温的变

化，特别是在高温条件下，植物病毒病时常发生隐症现象；（5）生理性病害不具全株性、再

现性，环境改善。可以康复；病毒病害分枝发病，全株相同，新芽、新叶再现病症，环境改

善不可再恢复。某地稻田发生大面积黄化，有人说病毒引起，有人说是生理现象，你应根据哪些原则加

以判断？（见书）可以根据“五性”原则加以判断a.分散性有一定的涌中心.时有.有一定的涌中心.时有.b・系统性牛!•b・系统性牛!•不具全株住、再现性

・外W可以―病鸯病•分枝发肩.全株相同

•斯芽、iwt再现瓠

•环唳善不可再恢覆C.传染性病4痛病4痛从房点发生有明康的扩JK莫盆近程4WR15株分布均匀.刿房时间一致d.鲜明性卷枝、卷枝、e.特征性rm病％病e.特征性rm病％病花叶、斑驳、耳突、环垃、条纹等现有黄瓜花叶病毒和烟草花叶病毒两种病毒同时侵染的烟草叶片，请设计一个实验方案，

将这两种病毒分离，分别获得单一的黄瓜花叶病毒和烟草花叶病毒。原理:病毒有一定的寄主范围，寄主范围广的病毒可侵染许多分类上相近或极不相近的植物。

通过寄主范围测定，可发现对待测病毒有特殊反应的寄主。利用这些寄主反应可以将待测病

毒区分开来。黄瓜花叶病毒侵染心叶烟可得到系统花叶，侵染普通烟可得到系统花叶：烟草

花叶病毒侵染心叶烟可得到局部枯斑，侵染普通烟可得到系统花叶。从复合侵染烟草花叶病毒、黄瓜花叶病毒的烟草病株上，通过下列步骤分离获得单的黄瓜花

叶病毒和烟草花叶病毒毒源。①取复合感染烟草花叶病毒和黄瓜花叶病毒的烟草叶片少许，

加人10倍量（m/V）的0.01mol/L、pH7.0的磷酸缓冲液，在研钵内研碎，病汁液供接种用。②采用常规摩擦接种法，接种两株心叶烟，每株接2~4片叶，接种叶用手掌托住，用无菌棉

签蘸取病毒汁液，在接种叶面单向轻轻涂抹2-3次，置于有防虫网的温室内培养观察。③取

1片表现枯斑症状的心叶烟（3~5d后），用剪刀将单-枯斑取下，置毛玻璃片上，滴1~2滴缓

冲液，用玻棒研磨匀浆，供接种用。分离4~5个单斑，用同样的方法获得匀浆供接种用。④

取1片表现系统症状的心叶烟上部叶片，在研钵内研磨，供接种用。⑤将上述③、④步所得

的毒源分别接种心叶烟，其中枯斑分离的每-单斑接种1株。⑥待心叶烟出现枯斑症状或系

统症状后，重复接种3~5次。⑦最后将心叶烟上的枯斑（烟草花叶病毒）和系统花叶叶片（黄瓜

花叶病毒）分别接种它们的系统寄主普通烟，则分别得到烟草花叶病毒和黄瓜花叶病毒的纯

毒株，可以用于下一步的保存和扩大繁殖。有些真菌和细菌病害的人工接种发病，需要在寄主上创造伤口才容易接种成功；为什么

病毒病的汁液摩擦接种，一般要强调创造微伤口才有利于接种成功？病毒侵入植物时，必须从植物表面轻微的伤口侵入.这种伤口既能造成细胞壁的破坏，为病毒

的侵入打开门户，又不导致细胞死亡，这样病毒侵入时才能在细胞中繁殖。接种环采用酒精灯火焰灭菌的方法，按照无菌操作的方法，用接种环从纯培养的试管中

转接了9支斜面试管，结果其中3支不长任何菌，3支污染了杂菌，3支长纯菌，试分析造

成这些差异的原因。不长菌的可能接种环灭菌后未等其冷却就挑取菌种导致菌种死亡.污染杂菌的可能是接种环

灭菌不彻底，如伸入试管中的部分未烧灼等.长纯菌的就是所有操作都规范.枯斑寄主、指示寄主、鉴别寄主的主要区别是什么？枯斑寄主:有些病毒侵染寄主植物后，会诱导寄主产生过敏反应，出现局部枯斑而不扩展成

系统侵染。指示寄主:指的是对那些潜育期特长，症状出现很慢的病毒（如果树中的病毒），为了及时做出

诊断，将其转移（接种）到症状出现很快的寄主上，这种寄主就成指示植物，故其性质与鉴别

寄主不同，主要是用来检测病原生物的存在。鉴别寄主:指用来鉴定对某一病毒或株系具有特定反应的植物。凡是病毒侵染后能产生快而

稳定、并具有特征性症状等的植物都可以作为鉴别寄主。鉴别寄主包括单一鉴别寄主和鉴别

寄主谱。高温高压蒸汽灭菌培养基到达时间后，排放蒸汽时需要缓慢排放，为什么？缓慢放出蒸汽，应注意不要使压力降低太快，以致引起激烈的减压沸腾，使容器中的液体四

溢。（灭菌完毕，应缓慢减压，若减压过猛，瓶（袋）内外压力差增大，会使棉塞冲出瓶口，

塑料袋胀袋液体培养基会突然沸腾从容器内喷出或喷湿棉塞，导致杂菌污染。）培养基经过过滤灭菌后，怎样检测已经符合灭菌要求？一般灭完菌后将培养基放在30-37度的环境中培养一天，看其有没有长菌（液体看是否变浑

浊，固体看是否长菌落），即可知是否灭菌后为无菌。对于一个可能的细菌性病害，你如何去判断并进而确诊它？（1） 首先根据症状来看，细菌性病害症状包括坏死，萎篇，腐烂和畸形，湿度较高时多数

细菌病害有菌脓溢出，或切取一块病组织，观察有无喷菌现象。此外细菌性病害引起的腐烂

气味比较臭。（2） 分离培养：从病组织上可以分离得到这种微生物并获得纯培养（3） 接种证病：用分离所得的纯菌种接在健康的寄主植物上，能引致相同的病害（4） 采用血清学：细菌血清学鉴定是指利用免疫学试验的方法和原理，用LA知菌抗体检测

未知菌抗原，或用已知菌抗原检测未知菌抗体的方法。采用组织块法分离病原真菌，往往在消毒并洗涤干净后的病组织块上滴入少许3%乳酸,

这有什么作用？一般细菌生长的最适PH是6.5-7.5,真菌生长的最适PH是5.0-6.0,加入少量乳酸，适当降

低PH,从而抑制细菌的生长，减少细菌污染。在病害接种试验中，设置空白对照有什么作用？确保实验结果的差异由实验因素引起，排除无关变量对实验结果的干扰，增强实验的说服力菌种保存常用哪几种保存方法？真菌（63.64页）：1.室温保存2.低温保存3.石蜡油保存4.灭菌蒸馆水保存5.土壤中保存6.

干燥保存细菌（91页）：1.植物材料保存2.斜面保存3.灭菌蒸馅水中保存4.加甘油保存5.冻干保存6.

干燥保存你知道有哪些真菌性植物病原物不同进行人工培养？举例说明真菌类在合成培养基上无法培养时，大体上可把这种真菌视为专性寄生菌。白粉菌：大豆白粉菌（近豆白粉病）、锈菌：单抱锈菌（为害皿豆）、根肿菌：芸苔根肿菌侵

染十字花科植物、白锈菌：十字花科白锈菌（十字花科植物）你知道的国内和国外有关植物病理学方面的期刊有哪些？我国有关植物病理学方面的期刊有哪些？植物病理学报，植物保护学报，微生物学报，真菌学报，病毒学报，线虫学报，植物生理学

报，真菌学报，农药学学报、农药、中国农业科学。国外有关植物病理学方面的期刊有哪些？（1） 美国：植物病理学Phytopathology：植物病害PlantDisease；分子植物病理学Molecular

Plant-MicrobeInteractiono（2） 英国：应用生物学记录AnnalsofAppliedBiology：生理植物病理学PhysiologicalPlant

pathology；植物病理学Plantpathology（3） 法国：植物病理学记录AnnalsdePhytopathologie（4） 日本:日本植物病理学会记录AnnalsofthePhytopathologicalSocietyofJapan（5） 印度： 印度植物病理学IndianPhytopathology（6） 加拿大:植物病理学杂志CanadianJournalofPlantpathology

问：哪些因素会影响番茄植株发病？答：植株品种、高温高湿的环境、土壤肥力和酸度及种植、轮作方式。问1:使用未经加热处理的病毒汁液分别接种普通烟和心叶烟，各自的作用是什么？答：普通烟：对比判断植株在病毒侵染下的受害程度。心叶烟：判断该病状产生与哪种病毒有关。问2：为何要用缓冲液作为空白对照接种健康植株？答：与A、B处理作对比，判断病状产生是否为除病毒外的其他因素导致的，控制变量。1、 怎样检验超净工作台的效果己达到洁净无菌状态？答：将平板放入工作台并打开平板盖，暴露一段时间或用专门的采样器采样后再用培养基进

行培养，观察是否有菌落生长。2、 铺制培养基平板时需要注意哪些实验细节，以保证无菌操作。答：倒培养基前不能过早打开培养皿盖，防止杂菌进入：倒培养基前需对三角瓶瓶口进行灼

烧。向：对某种病原菌进行分离培养时，可能出现杂菌污染或培养基上不长菌的情况，试分析其

原因。答：1.杂菌污染：灭菌不彻底：制备培养基时培养基己被污染。2.不长菌：实验操作过程中操作不当导致菌种被杀死，如接种环未完全冷却就使用；该培养

基成分或PH不适宜该菌落生长；培养基表面未接种上菌。问：简述免疫胶体金快速检测方法的原理答：样品中的烟草花叶病毒在吸水材料的牵引下，在试条上向上走，先与胶体金标记的特异

性抗体结合，再与NC膜检测线的特异性抗体结合，在检测线处形成抗体-待测抗原-金标抗

体复合物，在对照线处形成抗金标抗体-金标抗体复合物。测试条上面的质控线不管有无病

毒都显红色，而当样品中的病毒含量超过试剂条上的检测下线时，则检测线呈红色，结果为

阳性，待测样品中含有目标病毒；反之，检测线不呈红色，结果为阴性，待测样品中无目标

病毒。问：为什么分离病原细菌不采用如同真菌那样的组织块直接分离？答：因为在病组织中病原细菌数量巨大，直接分离组织块不能使病原细菌与杂菌分开，杂菌

生长迅速会移植病原细菌的生长，对菌落进行分离培养较为困难，不易于观察。问：怎样知道保存的菌种