DB4401T 85 -2020 红掌组培种苗生产技术规程

ICS65.020.20B05

DB4401广 州 市 地 方 标 准DB4401/T85—2020DB440100/T169—2014红掌组培种苗生产技术规程Theproductionregulationofinplantletvitro20202020-06-08发布2020-07-01广州市市场监督管理局发布DB4401/T85DB4401/T85—2020DB4401/T85DB4401/T85—2020目    次前言 Ⅲ范围 1规范性引用文件 1术语和定义 1设备设施及化学药剂 1设备设施 1化学药剂 2消毒灭菌 3洗涤室消毒灭菌 3接种室消毒灭菌 3培养室消毒灭菌 3超净工作台消毒灭菌 3培养基的消毒灭菌 3接种器具消毒灭菌 3污染瓶苗消毒灭菌 3培养室环境条件控制 4温度 4湿度 4光照 4组培快繁技术 4培养基配制 4外植体选择 4外植体消毒灭菌 4接种 5愈伤组织诱导培养 5愈伤组织增殖培养 5芽分化培养 5不定芽的继代增殖培养 5生根培养 5组培苗炼苗 6出瓶移栽技术 6组培苗清洗消毒 6移植基质 6I移植容器选择 6种植 6日常管理 7病虫害防治 9包装 9包装材料 10包装方法 10附录A（资料性附录）红掌组培快繁培养基基本配方 11附录B（资料性附录）红掌组培快繁常用植物生长调节物质 12IIII前  言本标准按GB/T1.1—2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》进行编写。本标准由DB440100/T169—2014DB440100/T169—2014《红掌组培种苗生产技术规程》。本标准与DB440100/T169—2014相比，除编辑性修改外主要技术变化如下：——修改了设备设施；——修改了光照；——修改了培养基配制；——修改了愈伤组织增殖培养、芽分化培养、生根培养；——修改了组培苗清洗消毒；——修改了基质要求；——删除了线克熏蒸消毒法；——修改了移植容器选择；——修改了肥分管理；——修改了病虫害防治。本标准由广州市农业农村局提出。本标准起草单位：广州花卉研究中心。本标准主要起草人：周晓云、宿庆连、黄明翅、曾伟达、陈一新、李莲。DB440100/T169—2014于2014年4月30日首次发布。IIIDB4401/T85DB4401/T85—2020DB4401/T85DB4401/T85—2020红掌组培种苗生产技术规程范围本标准规定了红掌组培种苗生产技术的术语和定义、设备设施及化学药剂、消毒灭菌、培养室环境条件控制、组培快繁技术、出瓶移栽技术和包装。本标准适用于红掌组培种苗生产。DB4401规范性引用文件DB4401LY/T1589花卉术语术语和定义3.1红掌组培种苗plantletvitroofAnthurium以组织培养方法克隆的应用于生产的红掌苗称为红掌组培种苗。3.1红掌组培种苗plantletvitroofAnthurium以组织培养方法克隆的应用于生产的红掌苗称为红掌组培种苗。3.2培养材料culturematerial在无菌培养容器内培养基上生长的植物组织材料称为培养材料。3.3增殖proliferation培养材料产生出新的具有特定结构和功能的组织、器官或小苗的过程。3.4继代（转接）subculture培养过程中将培养材料周期性地分株、分割、剪切后转接于新鲜培养基上进行增殖的过程。4设备设施及化学药剂设备设施组培室生产设备1洗涤设备灭菌设备高压蒸汽灭菌锅（大中型卧式、立式及小型手提式）、器械消毒器、紫外灯、烘干箱、微滤孔器等。接种设备及工具超净工作台、镊子、剪刀、解剖刀、接种针、钢丝架、酒精灯等。培养设备（实验设备（、计量器皿（量筒、容量瓶、移液管等）以及其它实验室常用器具等。生产设施度等环境条件的功能。降温系统宜采用空调、水帘风机降温系统、雾化降温系统或内循环通风扇等。加温系统遮光系统宜采用双层活动式遮光系统，光照控制在3000Lx～20000Lx。栽培床架宜采用滚动式栽培床架，确保种苗与地面的隔离。灌溉系统宜采用喷灌设备、高压动力施肥机等。化学药剂洗涤剂2选用无污染洗衣粉、洗洁精、去污粉等。消毒灭菌剂选用酒精、氯化汞、次氯酸钠、高锰酸钾、甲醛、过氧乙酸、灭菌净等。无机盐类和有机物类常用培养基如MSNitsch植物生长调节物质细胞分裂素类：6-苄基氨基嘌呤（6-BA）、激动素（KT）、玉米素（ZT）、2-异戊烯腺嘌呤（2ip）DB4401等。DB4401生长素类：吲哚丁酸（IBA）、萘乙酸（NAA）、吲哚乙酸（IAA）、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)等。碳水化合物蔗糖。固化剂可选用以下任何一种：卡拉胶、琼脂粉或其他组培专用培养基固化剂。5消毒灭菌5消毒灭菌洗涤室消毒灭菌每天用灭菌净、过氧乙酸等喷洒清洁地面，保持室内干净。接种室消毒灭菌接种前用紫外灯照射20min～30min，并定期用高锰酸钾及甲醛混合薰蒸。培养室消毒灭菌定期用高锰酸钾及甲醛混合薰蒸，或用75%酒精喷雾消毒，也可选用广谱性杀菌烟雾剂薰蒸。超净工作台消毒灭菌接种前用紫外灯照射20min～3075培养基的消毒灭菌1.1kg/m12120min即可。接种器具消毒灭菌使用前进行蒸气消毒；接种过程中采用小型干热灭菌器或用酒精灯灼烧消毒。污染瓶苗消毒灭菌3用消毒锅高温高压消毒，然后再清洗培养容器。培养室环境条件控制温度控制在25℃±2℃。湿度空气相对湿度宜保持在50%左右。光照根据培养材料的需光特性调整光照强度；一般培养室光照强度宜控制在1500Lx~3000Lx，工厂化生产，为降低成本可考虑利用自然光照。组培快繁技术培养基配制培养基选择根据不同红掌品种的生长发育特性选择合适的基本培养基种类和激素配比，常用的有MS、改良MS（铵态氮的水平降低1/2）或Nt培养基，pH值在5.8至6.2之间。母液的配制和保存母液的配制mg/mL～1.0mg/mL，激素的配制方法参见附录B。母液的保存母液配制好后，存放于4℃的冰箱中。培养基配制流程（一般采用经过反渗透或过滤处理的自来水）+母液+糖+固化剂+有机附加物→混合→pH5.8→分装→封口→灭菌→冷却凝固。外植体选择1次须用75%外植体消毒灭菌4先用自来水冲洗外植体，再用2%的灭菌净溶液加1滴吐温对外植体进行表面消毒12min～15min，其间不断摇动溶液。取出外植体，用纯净水进行冲洗。经表面消毒后的外植体在超净工作台上用0.1%HgC8min～10min次～610min～12min，后用无菌水冲洗外植体3～5次。接种1.0cm1.0cm或NtBA2mg/L2,4D0.2mg/L30g/L4g/L～7g/L等。每瓶接种1～4块（瓶容积为250mL，下同）。接种时叶背要平放于培养基表面。DB4401愈伤组织诱导培养DB4401接种完成后将其移到培养室进行愈伤组织诱导培养，培养温度为252Lx～500Lx左右的弱光条件下培养。愈伤组织增殖培养愈伤组织长大至米粒大小时，选取致密的愈伤组织块转接到增殖培养基进行愈伤组织的增殖培养。继代时，每30d转接1次，每瓶放3块～4块。愈伤组织增殖培养基宜选用：MS6BA1.0mg/LNAA0.05mg/L3g/L4g/L～7g/L等，培养条件：温度252℃、光强1500Lx～2000Lx、光照时间5h/d。芽分化培养35d转接13块～4块。芽分化培养基宜选用：MS6BA0.3mg/L～0.7mg/LNAA0.05mg/L30g/L+卡拉胶4g/L～7g/L2521500Lx～2000Lx5h/d。不定芽的继代增殖培养选择出叶正常、茎直、芽健壮、基部愈伤组织长势旺盛的材料进行继代增殖培养。每40d～50d继代增殖14～5个芽为1（5～6块0.5cm1.0cm次数的登记，便于质量跟踪。继代次数宜控制在20代以内。继代增殖培养基宜选用：MS6–BA0.3mg/L～0.7mg/LKT0.2mg/LNAA0.03mg/L30g/L4g/L～7g/L等。随着继代次数的增加，6BA的用量应逐渐降低，最后16BA，而改为添加适量的NAA，以利2522000Lx～4000Lx8h/d。生根培养～42cmMSNAA0.3mg/L～0.4mg/L1g/L～2g/L20g/L4g/L～75.82522000Lx～6000Lx，光照时间10h/d。培养约50d～60d，当长出3～5条根，根长为1cm～2cm时即可出瓶移栽。5组培苗炼苗组培苗在移栽前须在与移栽环境条件相对一致的条件下进行炼苗，温度控制在252d～10d，然后移栽。出瓶移栽技术组培苗清洗消毒组培苗出瓶时宜用水温为22～2550%多菌灵、75%百菌清或70%甲基托布津800～1000倍液浸泡3min～5min，稍沥干水后覆盖保湿，等待移植。移植基质基质要求要求具有较好的保水、保肥性能，具有良好的排水透气性，不含有害物质，其EC值≤0.5ms/cm，pH值在5.5至6.5之间。粒径≤20mm的泥炭是红掌组培苗较理想的移栽基质。基质消毒甲醛熏蒸消毒法用40（福尔马林稀释505d后揭开薄膜摊开基质，每日翻动1～2次，让有毒的甲醛气体充分挥发7d后使用。高温蒸汽消毒法～8020min～60min即可。移植容器选择根据种苗的大小、季节选择移植筛盘或穴盘，常用的移植筛72孔穴盘、128孔穴盘、200孔穴盘等。种植种植种植后恢复期管理移栽后10d为恢复期，须采取保湿遮光处理。前5d每天向叶面喷雾3次～5次，后5d每天向叶面喷雾2～322～28200Lx～2000Lx85%至9015d中苗种植6当小苗长至8cm高以上时可移入8.0cm8.0cm的营养杯或胶杯，每杯种植大小一致的双株苗。日常管理环境条件恢复期过后，组培苗生长适温为日温25℃～2819℃～2185%至90%，光照强度为5000Lx～12000Lx。温度低于1533水分管理DB4401宜采用EC0.1ms/cm20d～30d基质要用清水淋透1DB4401水分调控（出瓶移植60d内和低温季节（一般指冬季、初春）对水分要求不多，每次淋水不要过多。生长中、后期和高温期（一般指夏天）、（（基质含水量低至50%左右颜色开始偏白时，可以进行浇水）。肥料选择肥料宜选择含有中微量元素20-10-20、20-20-20、15-10-30水溶性肥料。施用红掌种苗施肥以淋施为主，出瓶苗移植1肥料选择肥料宜选择含有中微量元素20-10-20、20-20-20、15-10-30水溶性肥料。施用红掌种苗施肥以淋施为主，出瓶苗移植15d后开始施肥，前3次～4次施肥宜施用N-O-O为20-0-22000N-P-K为20-0-2和15-0-3使用浓度要根据生长状态而定，一般前2个月浓度为1500倍～2000倍，以后可以将浓度增加至800～1200倍，施用频率为5d～7d1次，施用时间一般安排在上午，施用后及时向叶面喷水，防止叶片受到肥料伤害。8.5.4光照调节1）而定，当温室内光照强度低于光照要求时，收起活动遮阳网，提高温室内光照强度；当光照强度高于光照要求时，可展开活动遮阳网遮荫降低光照，避免强光照射对红掌幼苗产生灼伤。表1红掌种苗不同阶段对光照的要求8.5.5温度调控7生长时期移栽15d内移栽16d～60d移栽61d～120d移栽121d至小苗出售最大光照强度3000Lx8000Lx12000Lx14000Lx红掌种苗的生长适宜日温为25～2819～21（见表2）。表2红掌种苗生产温室在不同温度下宜采取的处理措施温度建议采取的措施低于15℃启动保温设施，和加温设备进行加温，夜间保持叶片干爽16℃～19℃密闭温室，适当保温20℃～27℃开启天窗，卷起周边薄膜通风28℃～30℃关闭活动遮阳网遮荫，适当启动降温设备进行降温高于30℃尽可能开启所有降温设备进行降温8.5.6环境湿度调节红掌种苗的生长适宜空气相对湿度为70%至80%。当空气相对湿度低于50%时可通过水帘风机降温系90%（见表80表3红掌种苗在不同温度情况下的湿度要求及生理作用温度范围湿度要求生理作用16℃～19℃40%～60%较低湿度有利于保温御寒20℃～27℃60%～75%最适生长温度和湿度28℃～30℃75%～85%高温伴随高湿也有利于植株生长其他管理措施其他管理措施pHEC每月宜进行一次栽培基质的pH值和EC值控制在5.5至6.0值控制在0.6ms/cm～0.8ms/cmpH0.05%的碳酸钾浇灌基质提高基质的pH的EC值偏高时应降低肥水浓度或者停止施肥只进行浇水，浇水时尽可能淋透基质以冲洗掉过多积累的盐分，当基质的EC值偏低时，可加强施肥。养分检测11次营养检测，以调整肥料中各元素的比例，制定出最适合植株生长发育需要的肥料配方。清洗温室温室屋面玻璃或薄膜的透光率低于75%时，应对其进行清洗。清洁温室8病虫害防治主要病害防治根腐病、茎腐病DB4401d用药1次，同一种药剂连续使用不超过3次。DB4401叶斑病13～42炭疽病防治措施：药剂防治和加强栽培管理，加强通风，及时摘除病叶。在发病初期，每周喷药1次，连续喷药2次～3次，每2周轮换不同药剂。适宜药剂有：世高，百菌清，炭疽净等。主要虫害防治蓟马防治措施：有虫为害时连续喷药3次。适宜药剂有：吡虫啉，阿维菌素，蓟落，啶虫脒。红蜘蛛为害症状：主要为害嫩叶和叶芽，使嫩叶和芽枯萎，老叶变黄。防治措施：为害初期及时用药喷杀，发现有虫为害时连续喷药3次，喷药时注意叶背、叶面、叶基都应喷有药液。适宜药剂有：虫螨杀，除螨灵，中保杀螨乳油，阿维菌素。斜纹夜蛾为害症状：主要为害叶片，以嫩叶为主，造成叶片缺刻状损伤，多夜间为害。30d喷12包装9包装材料包装材料应能保护红掌种苗不受低温危害、高温灼伤和机械损伤，包装箱规格应便于装车和运输，（65.0cm38.0cm30.0和泡沫箱(59.0cm44.5cm×29.5cm)等。包装方法（含水量在60%左右20～50株为11010附录A（资料性附录）红掌组培快繁培养基基本配方红掌组培快繁培养基基本配方参见表A.1。表A.1红掌组培快繁培养基基本配方培养基成分M培养基成分Mrsie&Sog（M（16）Nitsch（Nt）（1969）NH4NO3KNO3CaCl2·2H2OCaCl2MgSO4·7H2OKH2PO4Na2-EDTAFeSO4·7H2OMnS