D实验四蛙心灌流

实验四离子及强心甙对离体蛙心的影响

EffctsofseveraldrugsandextracellularionsonisolatedToadheart

实验中心机能实验室周迎春

【实验目的】【实验原理】【实验器材】※【实验方法】【本卷须知】【实验目的】(Objectives)

1．学会离体蛙心制作方法，掌握蛙心插管方法2．观察离子、递质、酸碱及强心甙对心脏活动的影响离子及强心甙对离体蛙心的影响【实验原理】(Principle)心脏受体液和神经的调节和影响节律性活动心脏的泵血功能和正常稳定的理化环境心脏受植物神经的双重支配神经递质受体受体激动剂效应交感神经去甲肾上腺素

β肾上腺素去甲肾上腺素心肌收缩力心率迷走神经乙酰胆碱M乙酰胆碱心肌收缩力心率【实验器材】(Materials)手术县的照片蟾蜍toad探针metalprobe蛙板Frogboard蛙钉Frognailscissorsforceps手术线蛙心插管Froghearttube试管夹

Tubeholder插管头固定钩吸管pipette蛙心夹Frogheartclip张力换能器tensiontransducer万能支架台Medlab生物信号采集系统任氏液0.65％NaCl溶液2％CaCl2溶液1％KCl溶液肾上腺素溶液3%乳酸2.5%NaHCO3低钙任氏液去乙酰毛花甙注射液试剂及药品Reagentanddrug※【实验方法】〔methods〕※一、毁中枢※二、暴露心脏※三、制备离体心脏进行蛙心插管四、连接装置五、微机操作六、观察工程※【实验方法】一、毁中枢

1、捉拿方法2、确定枕骨大孔位置3、破坏脑和脊髓4、脑和脊髓破坏的标志【实验步骤】二、暴露心脏

1、固定

2、开胸并充分暴露出心脏剪口位置、心包膜3、蛙心腹反面观,识别蛙心各局部

二、暴露心脏1、仰卧位固定在蛙板上2、夹起胸部皮肤，用中剪刀将皮肤剪出一个以两侧锁骨中点连线为底边的倒置的等边三角形3、用镊子提起剑突，剪去同样大小的一块肌肉组织4、剪断锁骨5、剪去胸骨6、去尽心包膜，充分暴露出心脏7、蛙心腹反面观,识别蛙心各局部｝大剪刀左主动脉右心房右主动脉蛙心腹面观蛙心背面观三、制备离体心脏进行蛙心插管插管前准备:手术线、蛙心插管、任氏液、眼科剪、眼科镊

两根线、一个口、一次退

三、制备离体心脏进行蛙心插管

1、在主动脉干下穿一手术线，结一松结留作固定插管用2、剪去左右主动脉间膜组织3、在左主动脉下穿一手术线，在左主动脉远端结扎，线头留用。三、制备离体心脏进行蛙心插管4、根据蛙心插管前端的长短确定剪口位置,用眼科剪在左主动脉适当位置剪一向心斜切口〔要剪破血管内膜，心室收缩时有血液从切口涌出证明已剪破内膜，但不要剪断血管〕5、右手持盛有少量任氏液的蛙心插管由此切口插入主动脉，插至动脉圆锥时,将插管稍后退,在心室收缩时插入心室内，可见插管内液体喷入血液并随心室的舒缩而上下波动。三、制备离体心脏进行蛙心插管6、用线将动脉结扎固定于插管上，并将结扎线固定于插管的侧面突起上,以防插管滑出心室7、立即吸去插管内的血液，换取任氏液，以免凝血。三、制备离体心脏进行蛙心插管8、提起插管，剪去与心脏相连的其它组织，不要损伤静脉窦9、用新鲜任氏液换取蛙心插管内含血的任氏液数次，直至插管内任氏液完全清澈。10、插入心室内的标志是插管内的液体随心搏而上下搏动

四、连接装置

(connectequipment)

连接示意图用试管夹将蛙心插管固定在万能支架上，在心舒期用连有线的蛙心夹夹住心尖约1毫米，注意勿过度牵拉心脏五、微机操作

启动微机进入MedLab系统，调节仪器参数，开始实验。五、观察工程(observeitem)

疏密心跳的频率规律性心跳的节律幅度心室收缩的强弱

顶点心室收缩程度基线心室舒张程度2、离子的影响

〔1〕吸出插管内全部任氏液，换入0.65％NaCl，观察曲线的变化。待效应明显后，新鲜任氏液换洗三次，直至曲线恢复正常〔2〕加2％CaCl21-2滴于新换入的任氏液中，观察曲线变化。出现效应后用新鲜任氏液换洗，直至曲线恢复正常〔3〕加1％KCl1-2滴于新换入的任氏液中，观察曲线变化。出现效应后用新鲜任氏液换洗，直至曲线恢复正常3、递质的作用加10-4肾上腺素1-2滴于新换入的任氏液中，观察曲线的变化。待效应明显后，用新鲜任氏液换洗，直至曲线恢复正常4、酸碱的影响

加3％乳酸1-2滴于新换入的任氏中，观察曲线变化。待效应明显后，加2.5％NaHCO31-2滴,观察曲线变化。待效应明显后，换洗，直至曲线恢复正常５、强心甙的作用

〔1〕蛙心插管内换入低钙任氏液，观察心脏活动曲线变化〔制作心功能不全模型〕。〔2〕留神脏收缩明显减弱时，向蛙心插管内任氏液中参加去乙酰毛花甙注射液，观察心脏活动曲线变化。

【本卷须知】

静脉窦不可伤蛙心插管的尖端实验前要检查，不可过于锋利锋利，否那么易损伤血管及心脏组织

【本卷须知】

换能器向下倾斜【本卷须知】

CaCl2KCl肾上腺素乳酸NaHCO3滴加【本卷须知】

出现明显效应后，应立即以新鲜任氏液换洗3-4次，待心跳恢复正常后，再进行下一步【本卷须