DB34-T 4205-2022 禽蛋中9种禁用药物的残留量检测 高效液相色谱-串联质谱法

ICS

67.120.20CCS

X

1834 DB34/T

4205—2022禽蛋中

9

种禁用药物的残留量检测高效液相色谱-串联质谱法Determination

of

9

banned

drugs

in

poultry

high

performance

chromatography-tandem

发布

实施安徽省市场监督管理局 发

布DB34/T

4205—2022 本文件按照GB/T

1.1—2020《标准化工作导则

第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由安徽省兽药饲料监察所提出。本文件由安徽省农业农村厅归口。安全中心。昊、许世富、詹凯、吴敏、李佳庆、操军、吴蕾、刘红云、宋亚伟、刘舜舜、冯成、郝金华、宋祥军、赵瑞宏、刘发全。DB34/T

4205—2022

1 范围本文件规定了禽蛋中甲硝唑、金刚烷胺、诺氟沙星、氧氟沙星、培氟沙星、恩诺沙星、强力霉素、氟苯尼考、氯霉素残留量的高效液相色谱-串联质谱法检测方法。本文件适用于禽蛋中甲硝唑、金刚烷胺、诺氟沙星、氧氟沙星、培氟沙星、恩诺沙星、强力霉素、氟苯尼考、氯霉素残留量的检测。2 规范性引用文件文件。GB/T

6682分析实验室用水规格和试验方法3 术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4 原理试样经

80%

-定量。5 试剂和材料试剂除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为符合

GB/T

6682

规定的一级水的要求。甲醇，色谱纯。乙腈，色谱纯。乙酸铵，色谱纯。溶液配制如下：——10%

甲醇溶液：取甲醇

mL，加水定容至

1000

，混匀；——80%

mL，加水定容至

1000

，混匀；——流动相由

A、B

两种溶液按比例随时间梯度混合而成：5• A：

mmol/L

0.385

g

1000

mL5• B：乙腈。标准物质如下：——甲硝唑标准品（CAS

号：

≥

；——金刚烷胺标准品（

768-94-5），纯度

≥

97.5%；DB34/T

4205—2022——诺氟沙星标准品（

70458-96-7

≥

97.2%；——氧氟沙星标准品（

82419-36-1

≥

95.7%；——培氟沙星标准品（

70458-96-6

≥

92.1%；——恩诺沙星标准品（

93106-60-6

≥

99.9%；——强力霉素标准品（

24390-14-5

≥

98.7%；——氟苯尼考标准品（

73231-34-2

≥

99.9%；——氯霉素标准品（CAS

号：56-75-7），纯度

≥

99.2%。标准储备液：准确称取

25

mg

甲硝唑、金刚烷胺、强力霉素、诺氟沙星、氧氟沙星、培氟沙星、恩诺沙星、氟苯尼考、氯霉素标准品，分别置于

25

mL

容量瓶中，用甲醇溶解并定容，充分摇匀，制得

1

的标准储备溶液，密封，

-18℃保存，有效期

6

个月。混合标准液（

μg/mL）：精确量取

9

种标准储备液，各

0.1

mL

于

10

mL

容量瓶中，用甲醇定容，制得

10

μg/mL

的混合标准溶液，密封，

℃保存，有效期

3

个月。混合标准工作液：取混合标准储备液（

μ）适量，用

为

1

ng/mL、

5

ng/mL、

ng/mL、

20

ng/mL、

ng/mL、

ng/mL

的系列混合标准工作液，

4℃保存，有效期

1

6 仪器和设备如下：——高效液相色谱-串联质谱仪（配电喷雾离子源）；——高速冷冻离心机：≥

16000

r/min；——氮吹仪；——涡旋混合仪；——PRiME

HLB

固相萃取柱：

60

mg，

3

mL——分析天平：感量

0.1

g、

0.1

mg、

0.01

mg；——微孔滤膜：

0.22

μm

无机滤膜。7 试样的制备将禽蛋去壳后混合均匀，℃

保存备用，

3

个月内进行分析测试。8 测定步骤提取称取试料

2

g（精确至

0.1

g

50

乙腈水溶液

mL

1

，高速振荡提取

5

，

10000

r/min

10

min，取上清液用于固相萃取柱净化。取

mL上清液到PRiME

固相萃取柱中，保持一秒一滴的流速，收集全部流出液。于

45℃

水浴中用氮气吹干，用10%

甲醇水溶液

溶解，涡旋混匀，经

0.22

μm微孔滤膜过滤后供高效液相色谱-串联质谱仪测定。色谱条件如下：定性、定量离子对（m/zE/V碰撞能量（E/V172.2/127.9*+ESI38020172.2/8237152.1/135*+ESI38025152.1/9338320.1/276.1*+ESI38026320.1/233.135362.2/318.1*+ESI38026362.2/261.138334.1/316.1*+ESI38027334.1/290.225360.1/316.1*+ESI38025360.1/245.135时间（min）流动相

A（%）流动相

B（%）0901029010830708.019010109010DB34/T

4205—2022——色谱柱：C18色谱柱（

2.1

mm

×

50

mm，1.8

μm），或相当者；——流动相：A（

5

mmol/L

乙酸铵溶液）、B（乙腈），采用梯度洗脱见表

1；——流速：

；——进样量：

5

μL；——柱温：

30℃。表1表1

梯度洗脱程序如下：——离子源：电喷雾离子源（）；——电喷雾电压（IS）：

5500

V；——扫描模式：ESI+和

ESI-同时扫描；——检测模式：多反应监测（）；——雾化气温度（

Temp

300℃；——雾化气流量（

Flow

17

L/min

；——鞘气温度（Shealth

Gas

Temp

——鞘气气流量（

Flow）：

11

L/min；——定性离子对、定量离子对、裂解电压（Fragmentor

potential）和碰撞气能量（CE）见表2。表2

定性、定量离子对及其他参数条件445.1/428.1*+ESI38024445.1/154.135356.1/119*-ESI38023356.1/184.912321/152.1*-ESI38024321/256.917

DB34/T

4205—2022𝑚×𝑉2𝑚×𝑉2×1000

(1)8.4.1 保留时间待测样品中化合物色谱峰的保留时间与标准溶液相比变化范围应在

±

2.5%

之内。8.4.2 定量离子、定性离子及离子丰度比过表

3

规定的范围。表3表3

定性时相当离子丰度的最大允许偏差

9

种药物标准溶液的MRM色谱图见附录A。结果的计算与表述8.6.1 结果计算试样中

9

种药物的含量利用数据处理系统计算或按式（1）计算：𝑋𝑖

=

𝐶𝑖×𝑉1×𝑉3×1000式中：X——试样中药物含量，单位为微克每千克（μg/kgC——试样色谱峰对应的药物浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；M——试样质量，单位为克（gV——提取液体积，单位为毫升（mL）。V——过柱上清液体积，单位为毫升（mL）；V——溶解液体积，单位为毫升（mL）。8.6.2 结果表示/%88.9%

88.6%

85.6%

81.5%

80.3%

81.9%

77.2%

89.6%

79.5%

DB34/T

4205—2022测定结果保留至小数点后

1

位有效数字。9 灵敏度、准确度和精密度灵敏度本方法

9

种药物的检测限均为

μg/kg，9种药物的定量限均为

μg/kg。准确度本方法在禽蛋中

2.0

μ添加浓度水平上，9

种药物的回收率结果见表

4。表4表4

9

种药物的回收率结果本方法的批内、批间相对标准偏差均

≤

。DB34/T

4205—2022附 录 A（资料性）9

种药物标准溶液的

MRM

色谱图9

种药物标准溶液的MRM色谱图见图。图A.1

甲硝唑定性离子对标准溶液（20

ng/mL

色谱图图A.2

甲硝唑定量离子对标准溶液（20

ng/mL

色谱图图A.3

强力霉素定性离子对标准溶液（20

ng/mL

MRM

色谱图DB34/T

4205—2022图A.4

强力霉素定量离子对标准溶液（20

ng/mL

MRM

色谱图图A.5

氧氟沙星定性离子对标准溶液（20

ng/mL

MRM

色谱图图A.6

氧氟沙星定量离子对标准溶液（20

ng/mL

MRM

色谱图DB34/T

4205—2022图A.7

恩诺沙星定性离子对标准溶液（20

ng/mL

MRM

色谱图图A.8

恩诺沙星定量离子对标准溶液（20

ng/mL

MRM

色谱图图A.9

培氟沙星定性离子对标准溶液（20

ng/mL

MRM

色谱图DB34/T

4205—2022图A.10

培氟沙星定量离子对标准溶液（20

ng/mL

MRM

色谱图图A.11

诺氟沙星定性离子对标准溶液（20

ng/mL

MRM

色谱图图A.12

诺氟沙星定量离子对标准溶液（20

ng/mL

MRM

色谱图DB34/T

4205—2022图A.13

金刚烷胺定性离子对标准溶液（20

ng/mL

MR