DB33-T 2465-2022 蓝莓组培苗生产技术规程

ICS

CCS

B

3133 DB33/T

2465—2022蓝莓组培苗生产技术规程Technical

tissue

culture

plantlets

blueberry 浙江省市场监督管理局发

布DB33/T

— 本标准按照GB/T

—《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本标准的某些内容可能涉及专利。本标准的发布机构不承担识别专利的责任。本标准由浙江省农业农村厅提出并组织实施。本标准由浙江省种植业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：浙江省农业科学院、诸暨市经济特产站。DB33/T

—1 范围本标准规定了蓝莓组培苗生产的设施设备、外植体选取、培养基配制、外植体接种、组培苗培养、包装、标志、运输等内容。本标准适用于兔眼类、高丛类蓝莓的组培苗生产。2 规范性引用文件(包括所有的修改单)适用于本标准。GB/T

农药合理使用准则(十)GB

15569 农业植物调运检疫规程DB33/T

179.2 林业育苗技术规程 第2部分：林业容器育苗DB33/T

752 植物种苗组培快繁技术规程3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1外植体 用于无菌培养的植物活体，包括完整植株、胚胎或从植物上切取的器官、组织等一切材料。3.2初代培养 primary

将灭菌后的外植体接种在无菌培养基中进行的第一代培养。3.3继代培养 subculture初代培养获得的材料在继代培养基中不断长出新的芽或新的组培苗的培养过程。3.4组培穴盘苗 tissue

hole

dish

plantlets移栽在穴盘中经过一段时间培育后的组培生根苗。3.5组培容器苗 tissue

container

plantlets从穴盘移栽至容器进一步培育的苗。4 设施设备要求DB33/T

—培养室等；生产所需的生产设备，主要包括高压蒸汽灭菌器、超净工作台、电子天平、解剖镜、空调、栽大棚。组培苗生产所需基本设施设备要求见附录A。5外植体的选取5.1时间取材宜选择蓝莓两次生长高峰时期，在温暖、晴朗的天气取材，避免在冬季低温阴雨天气取材。5.2 取材从具有品种典型性状的健康植株上选择长势旺盛、健壮的半木质化枝条，取带芽茎段作为外植体，未能及时接种的茎段可保湿贮藏在4

℃冰箱中，所取的茎段应在3天内完成接种。6 培养基的配制6.1 母液的配制6.1.1 基本培养基

WPM

的母液配制采用木本植物用培养基（woody

plant

medium，）作为基本培养基，将其中所含的化学成份按1∶、1∶10、1∶1

、1∶、1∶的母液，装入广口瓶后置于4

℃冰箱保存。6.1.2 生长激素的配制将生产所需的玉米素(zeatin，、萘乙酸(1-naphtahaleneacetin

acid，NAA)、吲哚丁酸(indole-3-butyric，IBA)用1摩尔/升盐酸或95

%酒精溶解，再用蒸馏水稀释后分别配制成毫克/升的母液，装入广口瓶中，置于4

℃冰箱保存。以上所用药品均为分析纯级别。6.2 培养基的配制6.2.1 琼脂融化按所需容量的70

%加去离子水，再加入

%的琼脂，加热搅拌融化琼脂。6.2.2 糖溶解琼脂融化后，加入3

%蔗糖或食用蔗糖，稍加热使其溶解。6.2.3 加母液糖溶解后，按培养基的配方及所需数量，依次加入基本培养基的大量元素、钙盐、微量元素、铁盐、有机物及生长激素母液，并充分搅拌。6.2.4 定容搅拌均匀后，加去离子水至所需体积。6.2.5 pH

值测定DB33/T

—充分搅拌后，用pH计或pH试纸测值，用0.1摩尔/升的盐酸或摩尔/升的氢氧化钠调节pH至±0.1。6.2.6 分装根据不同需要定量分装，如250毫升的培养瓶，每升分装25瓶～30瓶，每瓶分装33毫升～40毫升。分装时勿将培养基沾到瓶口。6.2.7 封口盖好瓶盖，或用封口膜封口，扎绳需紧。6.2.8 灭菌灭菌操作按DB33/T

规定执行。6.2.9 贮存灭菌后培养基贮存按

752规定执行。7 外植体的接种7.1 预处理将外植体去除所有叶片，自来水冲洗干净，切取第3～10节茎段，在流水下冲洗30分钟～60分钟。7.2 灭菌在超净工作台上将外植体置于70

%乙醇中秒，再用

%新洁尔灭消毒分钟，后放于0.1

%升汞中处理6分钟～8分钟，轻摇，灭菌结束后倒出灭菌液，用无菌水冲洗3次～5次后备用。7.3 接种厘米～1.0厘米带腋芽茎段，接种于准备好的诱导培养基中。基部切口插入培养基内。8 培养8.1 初代培养8.1.1 培养基配方WPM＋/升～/升玉米素＋克/升蔗糖＋7克/升琼脂，pH值为±。8.1.2培养方法培养温度25

2

℃，光照时间小时/天～16小时/天，光照强度1

500勒克斯～2

勒克斯，培养2030天，诱导出幼芽。8.2 继代培养8.2.1 培养基配方DB33/T

—WPM＋1.0毫克/升～1.5毫克/升玉米素＋0.01毫克/升～0.03毫克/升萘乙酸＋30克/升蔗糖＋7克/升琼脂，pH值为5.2±0.1。8.2.2 培养方法培养温度25

2

℃，光照时间小时/天～16小时/天，光照强度3

000勒克斯～4

勒克斯。剪取丛生苗，剪成1.0厘米～1.5厘米茎段，插入继代培养基内。每20天～天继代增殖1次。继代次数宜控制在10代以内，不超过代。8.2.3 无根瓶苗培养WPM＋0.01/升萘乙酸＋30克/升蔗糖＋7克/升琼脂，pH值为±。剪取丛生苗，插入培养基内。在相同条件下培养天～天，培养成株高3厘米～5厘米的无根壮苗，其质量指标见表B.1。8.3穴盘苗培育8.3.1 生根培养将无根壮苗蘸取0.5毫克/升吲哚丁酸＋毫克/升萘乙酸的生根剂后插入穴盘基质中，基质为苔藓，或泥炭土、珍珠岩和蛭石等体积混合基质。30天～40天长出完整根系。培养温度为15

℃～28

前10天相对湿度控制在80%～90%3勒克斯～500060%～80%、光照强度5

000勒克斯～

000勒克斯。8.3.2 管理3021015天叶面喷施1次%经常检查新叶的生长情况，保持通风。农药品种、使用次数和安全间隔期应按GB/T

8321.108.3.3 质量指标见表。8.4 容器苗培育8.4.1 栽培管理将生长健壮的穴盘苗移入到直径为10厘米～12为5∶3∶2的混合基质。其他管理参照DB33/T

179.2。8.4.2 出圃符合出圃规格的苗于9月至次年3月期间均可出圃，出圃规格见表B.3。9 包装、标志、检疫、运输9.1 包装9.1.1 瓶苗包装瓶苗放入泡沫箱或周转箱，箱外再用纸箱包装。9.1.2 穴盘苗包装DB33/T

—穴盆装在相应规格的纸板箱内。9.1.3 容器苗包装将容器苗按数量装入相应规格的纸板箱内。9.2 标志每箱应贴上标签，注明品种、等级、数量、产地、出苗日期等。9.3 检疫参照GB

15569要求执行。9.4 运输选择冷藏车，运输途中温度保持20

℃～

60

%～80

%的相对湿度，5天内到达目的地。10 生产档案2年。11 模式图蓝莓组培苗标准化生产技术模式图参见附录C。1.11.21.3清洁、干燥、通风，能终年保持相对较低的温度，避免阳光直照；放置天平的实1.4通风、干燥，配备大容量用电专用线路，上下水道畅通。1.5地面与墙壁应能够忍受高湿状态，地面防滑、白瓷砖墙面，配备大容量用电线路1.61.71.8

25

75

1.9

25

70

75

%)置、日光设备1.10控温、干净、通风、光线好，内墙白色光滑，上下水道畅通。1.115.1办公桌、电话、传真机、电脑、打印机等办公设备。5.25.3DB33/T

—附

录 A（资料性）蓝莓组培苗生产所需设施及仪器设备表A.1～表给出了蓝莓组培苗生产所需设施及仪器设备。表A.1给出了蓝莓组培苗生产所需基本配套设施。表

A.1 基本配套设施101112131415161718192021DB33/T

—表A.2给出了组培苗生产所需仪器设备。表

A.2 所需的仪器设备具有完整而发达的根系，形成根团。苗健壮、挺拔和新鲜，形态完整、叶片大小协调，叶色具原品种特苗壮实，高度

90

以上的苗达到上述要求。

≥40

≥30

a)b)生长健壮，芽饱满；c)d)

个～

苗有活力、粗壮、挺直，叶大小协调、色泽正常，具原品种特性，无玻化；培养基无污具有适宜和正常的叶片数，≥5

90

以上的苗达到上述要求。DB33/T

—附

录 B（资料性）育苗质量指标B.1 无根瓶苗质量指标无根瓶苗质量指标见表。表

B.1 无根瓶苗质量指标B.2 穴盘苗质量指标穴盘苗质量指标见表B.2。表

B.2 穴盘苗质量指标B.3 容器苗出圃规格容器苗出圃规格见表B.3。表

B.3 容器苗出圃规格生根后穴盘苗相对湿度控制在

80

、光照强度

勒克斯～

勒克斯。天后可用喷淋浇水。抽生1015-15-15GB/T

WPM30pH

25

12

天，光

MgSO429.25

KH2PO44.25

(NH42SO410

2422.5

苗健壮、挺拔和新鲜，形态完整、叶片大小协调，叶色具原品种特性、有光泽。具有完整而发达的根系，形成

WPM0.0130

25

12

天，光

(100

MnSO422.25

ZnSO420.86

330.62

Na242

WPM

毫克升萘乙酸＋

25

12

天，光

CuSO42

10

DB33/T

CaCl224.84

Ca(NO32227.8

(1

FeSO422.78

15

28

8090Na23.73

30

(100

10

从具有品种典型性状的健康植株上选择长势旺盛、健壮的半木质化枝条，取带芽茎基本培养基

WPM、生长激素按配方配制成母液，置于

℃冰存；方配外植体经流水冲洗后在超净工作台上经乙醇，升汞灭菌处理，切成带腋芽茎段，接在无菌条件下将外植