细菌的生化反应

细菌的生化反应细菌的生化反应

不同细菌具有各自独特的酶系统，因而对底物的分解能力各异，其代谢的产物也不相同。这些代谢产物又各具有不同的生物化学特性，为此，可利用生物化学的方法测定这些代谢产物以鉴定细菌蛋白质和氨基酸的代谢实验B各种酶类实验D碳源和氮源利用实验C碳水化合物的代谢实验A

抑菌实验E

（一）糖类发酵试验

(1)原理：细菌含有发酵不同糖类的酶，故分解糖的能力不同，终末产物亦不一致。多糖－→单糖－→丙酮酸－→酸性产物(或产酸产气)－→pH↓－→指示剂呈酸性变色(若产气者有气泡出现)一、碳水化合物代谢试验细菌的生化反应(2)培养基：在培养基中加入0.5％-1％的糖类(单糖、双糖或多糖)、醇类(甘露醇、肌醇等)、苷类(水杨苷、菊糖等)糖发酵管、半固体发酵管、微量发酵管试剂：酚红、溴甲酚紫等(3)方法：将细菌接种到糖发酵培养基中，培养数小时至2w后，观察结果

（一）糖类发酵试验糖发酵试验结果判断反应现象结果描述酸性变色、有气泡+

分解糖、产酸、产气酸性变色、无气泡+分解糖、产酸、不产气培养基不变色-不分解糖、无任何变化

(4)结果：(5)应用：是鉴定细菌最主要的试验，特别对肠杆菌科细菌的鉴定尤为重要葡萄糖HCOOH甲酸脱氢酶

CO2+H2

（二）葡萄糖氧化/发酵（O/F）试验(1)原理：细菌分解葡萄糖过程中，根据对O2需求的不同，分为氧化型（只在有氧环境中分解葡萄糖）发酵型（有氧、无氧都能分解葡萄糖）产碱型（不能分解葡萄糖）(2)方法：将待检菌同时接种两支HL培养基，一支滴加无菌液体石蜡，高度不少于1cm。将培养基于35℃培养48h或更长。(3)结果：两支培养基均无变化为产碱型；两支培养基均产酸（黄色）为发酵型；若仅不加石蜡的培养基产酸为氧化型。(4)应用：主要用于肠杆菌科细菌与非发酵菌的鉴别。也用于葡萄球菌与微球菌间的鉴别－但配方不同。（二）葡萄糖氧化/发酵（O/F）试验（三）β-半乳糖苷酶（ONPG）试验(1)原理：某些细菌产生β-半乳糖苷酶，分解邻-硝基酚β-D-半乳糖苷ONPG，产生黄色邻-硝基酚细菌分解乳糖需要2种酶：半乳糖苷渗透酶（将乳糖送入细胞内）β-半乳糖苷酶（将乳糖分解为葡萄糖、半乳糖）仅有β－半乳糖苷酶，则分解乳糖慢ONPG结构与乳糖相似，但分子小，不需渗透酶可进入细胞(2)方法：从克氏双糖铁培养基上取菌，于0.25ml无菌生理盐水中制成菌悬液，加入甲苯并充分振摇，使酶释放。将试管置37℃水浴5min，加入0.25mlONPG试剂，水浴20min左右观察结果。（三）β-半乳糖苷酶（ONPG）试验(3)结果：菌悬液呈现黄色为阳性反应，一般在20～30min内显色。(4)应用：迅速及迟缓分解乳糖的细菌ONPG试验为阳性，而不发酵乳糖的细菌为阴性。本试验主要用于迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定。（三）β-半乳糖苷酶（ONPG）试验（四）七叶苷水解试验(1)原理：有的细菌可将七叶苷分解成葡萄糖和七叶素，七叶素与培养基中枸橼酸的二价铁离子反应，生成黑色化合物。(2)培养基：七叶苷培养基、胆汁七叶苷培养基。(3)方法：将待检菌接种于七叶苷培养基中，培养后观察结果。(4)结果：培养基变为黑色为阳性，不变色者为阴性。(5)应用：主要用于D群链球菌与其它链球菌的鉴别，前者阳性，后者阴性。（四）七叶苷水解试验葡萄糖丙酮酸大量混合酸pH在5.4以上甲基红试剂培养基变红（五）甲基红试验(1)原理：产生少量酸pH降至4.4以下甲基红试剂培养基呈黄色(2)培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基。(3)方法：将待检菌接种于上述培养基中，培养2~4d，于培养基内加入甲基红试剂，立即观察结果。(4)结果：呈现红色为阳性；橘红色为弱阳性；黄色为阴性。(5)应用：鉴别肠杆菌科细菌，尤其大肠埃希菌与产气肠杆菌，前者为阳性，后者为阴性。（五）甲基红试验产气肠杆菌葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇

PH＞5.4甲基红

-大肠埃希菌葡萄糖→丙酮酸

PH≤4.4甲基红

+（五）甲基红试验阳性阴性对照大肠杆菌：+产气杆菌：—葡萄糖丙酮酸乙酰甲基甲醇二乙酰V-P试剂培养基变红脱羧

（六）V-P（伏－普）试验(2)培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基。(3)方法：将待检菌接种于上述培养基中，于35℃培养48h后加入甲液(6％α·萘酚酒精溶液)和乙液(40％KOH溶液)，振摇。(4)结果：在数分钟内出现红色为阳性；如无红色出现且于35℃4h后仍不变色即为阴性。(5)应用：鉴别肠杆菌科细菌，常与甲基红试验一起使用，因为前者阳性的细菌，后者通常为阴性。

（六）V-P（伏－普）试验阳性阴性产气肠杆菌葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇→二乙酰→红色化合物（+）