家畜繁殖学 第六章 人工授精

第六章人工授精Chapter6ArtificialInsemination本章内容第一节

概述

Section1Introduction第二节

采精

Section2Semencollection第三节

精液品质检查

Section3Semenqualityexamination第四节

精液的稀释

Section4Semenextendandextenders第五节

精液保存

Section5Semenstorage第六节

输精

Section6Insemination第一节概述

一、概念二、意义三、AI开展概况

一、AI概念

利用器械采集公畜的精液，经检查和处理后，再用器械将精液输入到母畜生殖道的适当部位，使之妊娠，以此来代替公母畜自然交配一种科学配种方法。二、人工授精的优越性提高了优良种公畜的配种效能和种用价值，降低了饲养管理费用；加速家畜品种改进，促进育种工作；防止各种疾病，特别是生殖道传染病的传播；有利于提高母畜的受胎率；克服地域限制和杂交改进的大小悬殊困难；优越性为开展胚胎移植、同期发情等繁殖技术研究提供了有效手段。三、人工授精的局限性通过人工授精可能使不良公畜的影响范围更大；必须投入一定资金，进行房舍建设和设备购置；必须进行人员的技术培训，不良的操作会造成更严重的问题。四、AI的开展简况

实用阶段

冷冻精液阶段试验阶段1780年，意大利生理学家Spallanzani，第一次成功地用狗进行了人工授精试验；上世纪40-60年代，人工授精的应用蓬勃发展成为繁殖改良家畜的重要手段。以乳牛的普及率最高，发展最快，技术水平较高；50年代英国的Smith和Polge研究牛精液的冷冻保存方法，人工授精技术进入了一个新的发展阶段。我国人工授精技术开展史1935年60-70年代70-80年代初在江苏句容马场试验成功；在北方开展马、绵羊人工授精，推动马、细毛羊品种育种；60年代开展牛人工授精，70年代冷冻精液；猪人工授精，尤江苏好，并建立良种推广站。50年代第二节采精

一、采精前的准备Preparations二、采精方法Collectingmethods三、采精频率Frequencyofsemencollection第三节精液品质检查

检查的目的检查精液品质的优劣，判定种公畜的配种能力检查公畜的繁殖问题确定精液可稀释的倍数检查精液的处理方法是否正确采精时精液是否受到污染和采精技术好坏程度的工作。内容：外观检查显微镜检查〔精子活率、密度、形态〕微生物检查精子代谢能力检查其他检查〔受胎效果〕一、精液外观性状检查法〔一〕精液量(ml)奶牛：5-10；肉牛：4-8；绵羊：0.8-1.2；猪：150-300；山羊：；马：30-100

〔二〕颜色与气味一般为乳白色或灰白色。气味略有腥味。

正常精液特征依从浓到稀：乳黄-乳白-白色-灰白淡红（鲜红）生殖道下段出血或龟头出血淡红（暗红）副性腺或生殖道出血绿副性腺或尿生殖道化脓黄混有尿液(三)云雾状浓份精液因精子密度大、活力强，使精液翻腾呈现旋涡云雾状。〔四〕pH值牛、羊精液pH值为6.5-6.9,猪、马为7.4-7.5。一般同种精液pH值较低的品质较好。〔五〕杂质如被毛、脱落上皮、炎性分泌物、灰尘、纤丝。二、精子活率检查精子活率：在显微镜下观察，在一个视野内向直线前进运动的精子占全部精子总数的百分率。

一般在37-38°C温度下进行评定，牛、羊精液尚需用生理盐水作稀释后才能评定。

活力一般用0-1.0的10级评分，一般新鲜采精液活率应该为0.7~0.8左右。三、精子密度的检查精子密度：是指单位体积〔ml〕精液内所含有的精子数。畜种牛羊猪马鸡密度亿/ml8-1220-302-31.5-330-50(一〕目测法：在低倍显微镜下根据精子之间的距离来定，分为密、中和稀三等。〔二〕血细胞计数法：精子数量/ml=5×5×10×1000×稀释倍数〔三〕光电比色法：是根据精子的透光性而测定精子数的方法。透光性越高，那么精子数越少，透光性越差，那么精子数越多。现在甚至可与计算机联接，立即知道被测精液的活率和密度。

〔四〕流式细胞仪四、精子的形态检查1、精子畸形率：头部、颈部、尾部，观察200个精子，求出比例。用于输精的精子畸形率不得超过20%。头部：巨大，细小，缺失，双头，轮廓不明显，皱缩颈部：臌大，纤细，弯曲，不全，原生质滴尾部：屈折，带原生质滴，双尾，折断，纤细畸形精子类型图双头和双尾精子

顶体与精子受精能力直接有关，牛超过14%，猪超过4.3%时会直接影响受胎率。

2、精子顶体异常率

精子顶体异常图五、精子代谢能力检查〔一〕精子生存时间和生存指数精子生存时间：指精子在体外一定条件下〔稀释液、稀释倍数、保存温度和方法等〕的总生存时间。具体算法：所有间隔时间累加后减去最后两次间隔时间的一半即为精子的存活时间。精子生存指数：相邻两次检查的间隔时间与平均活力的积之和。是精子存活时间与精子活率下降变化的一项综合指标。精子生存时间越长，那么生存指数越大，说明精子生活力越强，品质越好。

检查时间间隔时间(h)活率2次检查平均活率h×平均活率日/月时间6/4600.8—1480.60.75.62280.50.554.47/4680.30.43.21480.20.252.02280.10.151.28/468摆动0.050.4∑=48∑=16.8生存时间：48-8/2=44h生存指数：h×平均活率=16.8〔二〕美蓝褪色试验美蓝是氧化复原剂，氧化呈蓝色，复原呈无色，精子在美蓝溶液中，呼吸时氧化脱氢，美蓝获得H+后便使蓝色复原为无色。因此，根据美蓝褪色时间可测知精液中存活精子数量多少，判定精子的活率和密度上下。〔三〕精液果糖分解测定精液果糖分解能力与精子活力密切相关，因此测定一亿精子每小时消耗果糖的mg数来表示精子的果糖分解能力，甚至反映精子活率和密度的上下。

第四节精液的稀释

Section4Semendilution一、精液稀释的目的

Aimsofsemendilution二、稀释液的成分及作用

Compositionofextenders(diluents)三、稀释液的种类和配制

Typesandmake-upofextenders(diluents)四、精液稀释方法和稀释倍数

Methodsandmultipleofsemendilution一、精液稀释目的1、精液稀释定义：往精液中参加适宜于精子体外存活，保持其受精能力的溶液。2、精液稀释目的〔1〕扩大精液量—增加可配母畜头数；〔2〕延长存活时间；〔3〕便于运输和保存。二、精液稀释液的成分及作用扩大容量用。如生理盐水、等渗葡萄糖等。提供精子营养、能量。如糖类、卵黄、奶类。有激素类、酶类、维生素类。营养物质其它添加剂稀释剂保护剂保护精子免受外界影响。如甘油、抗菌剂。三、稀释液的种类和配置〔一〕稀释液的种类1、现用稀释液奶类和等渗糖类为主。2、常温保存稀释液用于常温保存精液，pH较低。3、低温保存稀释液用于低温保存精液，含有卵黄和奶类等抗冷休克物质。4、冷冻保存稀释液用于冷冻保存精液，含抗冻物质如甘油DMSO。〔二〕稀释液的配制方法用具先清洗、消毒、枯燥先配制根底液水浴消毒准确称取药品、量取定量的蒸馏水冷却后按比例参加抗生素、卵黄、甘油溶解过滤冷却四、稀释方法和稀释倍数

立即稀释精液经检查合格后应立即进行稀释，越快越好等温稀释稀释时，稀释液的温度和精液的温度必须调整一致，以30-35℃为宜；缓慢稀释稀释时，将稀释液沿精液瓶或玻璃棒缓慢倒入，同时摇动精液瓶稀释；分次稀释假设作高倍稀释，应先低倍后高倍，分次进行稀释；稀释后立即镜检，活力应和稀释前一样；稀释后精液立即进行分装〔一般按一头母畜的输精量〕保存。〔一〕稀释方法〔二〕稀释倍数确定精液稀释倍数应依据精液的密度、活率及有效精子数。家畜精液的稀释倍数稀释倍数的计算原精液的有效精子数密度×使用前精液活力稀释后要到达的有效精子数每剂量要求的有效精子数÷剂量计算稀释倍数原精液的有效精子数÷稀释后要到达的有效精子数精液分装数的计算原精液量×稀释倍数÷剂量现行的精液保存方式有三种：常温保存〔15-25℃〕低温保存〔0-5℃〕冷冻保存〔-79℃或-196℃〕

第五节精液的保存

Section5SemenStorage液态保存固态保存一、常温保存〔15-25℃〕，变温保存1、原理：是利用一定范围的酸性环境，抑制精子的活动，使精子保持可逆的静止状态而不丧失受精力。2、稀释液：〔1〕能量物：如葡萄糖；〔2〕缓冲体系：如柠檬酸钠、碳酸氢钠；〔3〕抗生素：如青、链霉素等。3、方法：隔水降温。天热时，尽可能降低保存温度如放入水井、水缸；天冷时，放在有暖气的室内。适合猪精液保存〔15～17℃〕二、低温保存〔0-5℃〕1、原理：利用较低的温度来减弱精子的活动和代谢，从而延长精子的生命。2、低温保存稀释液：除室温保存液应具有的成分外〔不充CO2〕，在牛用的稀释液还需用加卵黄或牛奶。

为何要添加？

3、保存前的处理〔1〕稀释分装：低温保存的精液通常用玻璃或塑料瓶分装，瓶内尽量不留空气，然后封口;〔2〕降温处理：通常按0.2℃/min降至保存温度;〔3〕保存方法：牛羊精液置于0~5℃，猪精液须特殊改造的冰箱或用泡沫盒内放冰块，精液用一块泡沫垫在上面；〔看后图〕〔4〕低温保存精液的利用：低温保存的精液在使用前应该用水浴升温至30℃。4、液态精液的运输〔1〕包装好、做好标记〔种类、品种、畜号、时间〕；〔2〕运输中避光、防震并保持温度。三、精液冷冻保存(-79℃或-196℃)

定义：是利用液态氮〔-196℃〕或干冰〔-79℃〕，作为冷源，将精子和精液冷冻成固体，并在液态氮或干冰中作超低温永久保存。意义：〔１〕提高优良种公畜的配种效能；〔２〕便于冷冻精液的自动化生产；〔３〕便于引种；〔４〕加快改进和育种；〔５〕推进繁殖新技术的应用；〔６〕建立动物基因库。

〔一〕精液冷冻保存原理目前关于精液冷冻的原理普遍倾向于玻璃化学说。原理：利用超低温使精液和精子快速冷冻，快速越过形成冰晶的温度范围〔0~-60℃〕、精液或精子中的水分不形成冰晶，而是形成玻璃化。同时在抗冻剂的存在下使精子免受冻伤，在温度上升至体温精液解冻后精子能够保持完整的形态结构、功能和受精能力。液态→固态结晶态：缓慢降温形成。水分子有序形成冰晶对精子有害：机械和渗透压损伤。玻璃态：快速降温形成。水分子无序形成玻璃样的超微粒结晶，对精子无害。〔0～-60℃〕〔-15～-25℃〕〔-60～-250℃〕1、冷冻时细胞的损伤冰晶：在0～-60℃低温区，缓慢降温条件下形成的，降温越慢，冰晶越大，-15～-25℃对精子危害最大。冰晶的形成对精子造成的机械损伤和渗透压损伤是引起精子死亡的主要物理因素。玻璃化：在-60～-250℃超低温区，从冰晶化区域内开始，就快速降温，迅速越过冰晶化进入玻璃化阶段，此阶段对精子无害。2、添加冷冻保护剂〔甘油，DMSO等〕作用：增强精子抗冻能力，并对防止冰晶发生起到重要作用。〔二〕精液冷冻保存稀释液除与精液低温保存液相同外，尚需用加抗冻剂。1、牛用：主要有卵黄-柠檬酸钠-甘油液，卵黄-糖类-甘油液，奶类-甘油液等3种。甘油浓度以5%-7%为宜。2、猪用：一般采用以葡萄糖、乳糖、蔗糖、甘油为主要成分的稀释液，甘油浓度以1%-3%为宜。〔三〕冷冻精液的生产程序采精品质检查稀释前处理（猪要浓缩）稀释

分装（细管或颗粒冻精）0-4℃平衡2-4h冷冻解冻、品质检查-80--110℃平衡4-5min装袋、管保存一、输精前的准备Preparations二、输精的根本要求Requirements三、输精方法Methods四、影响人工授精受胎率的因素FactorsinfluencingthefertilitybyAI第六节输精

Section6Insemination一、输精前的准备输精器械的准备1

精液的准备

2母畜的准备

输精人员准备234二、输精要求

三、输精技术直肠把握子宫颈深部或子宫体输精法输精方法阴道开膣器输精法〔一〕牛的输精方法牛的输精的本卷须知输精器插入阴道时，应向前上方，防止插入尿道。当遇到阻力时，切忌用蛮力。握输精管的手应靠住母牛阴户,使母牛骚动时能一起移动,防止折断输精管或损伤生殖道.输精器插入子宫颈管时，推进力量要适当，以免损伤子宫颈、子宫体粘膜。如果输精器后端为胶头，将精液压子宫内后，不要松开胶头，以免精液流回输精器内。牛的输精的本卷须知输精器插入阴道时，应向前上方，防止插入尿道。当遇到阻力时，切忌用蛮力。握输精管的手应靠住母牛阴户,使母牛骚动时能一起移动,防止折断输精管或损伤生殖道.输精器插入子宫颈管时，推进力量要适当，以免损伤子宫颈、子宫体粘膜。如果输精器后端为胶头，将精液压子宫内后，不要松开胶头，以免精液流回输精器内。〔二〕猪的输精技术用种公猪试情的--后备母猪发现发情〔有压背反响〕，24h后作第一次输精，间隔12h第二次输精；--经产母猪发现发情12h后第一次输精，12h后第二次输精。地方品种均推迟6h；无种公猪试情的--后备猪压背反响后6-12h，经产猪立即输精，地方品种均推迟6h。母猪的适时配种作好配种准备：母猪后臀部用温水冲洗干净，然后用1%新洁而灭溶液消毒一遍。配种所用公猪尿道出口部也要进行消毒，防止阴道炎与子宫炎的发生。在检查到母猪稳定发情〔接受压背测试〕后12～18h开始配种，间隔12h再配一次。后备母猪与经产母猪发情到排卵的时间有所不同，后备母猪为24～38h，经产母猪36～48h，稳定发情时间长短也不一样，后备母猪为1～2d，经产母猪为2～3d，因此两者适时配种时间也有所不同。另外经母猪断奶后，早期发情〔断奶后3～4d〕和迟发情〔断奶后5d以上〕，其发情与排卵持续时间也不同，相应的其最适配种时间也应有所不同。母猪的输精准备好输精导管，最好用一次性输精管；精液存储在16-20℃的恒温箱中；

每天一次进行母猪发情鉴定，出现静立发情的当天进行第一次输精；输精时清洗双手，清洁母猪阴户、润洗输精导管，将输精导管向上、向前插入阴道并按逆时针方向旋转直到锁定。母猪的输精〔续〕摇动输精瓶几次，充分混合精液，剪掉输精瓶的顶端慢慢地向输精瓶加压；输精将要持续5-10min，精液流出阴户时，要重新锁定输精导管；

输精后立即用清水和去离子水清洗输精导管；记录公母猪耳号；

间隔12-24h后重复输精。

猪的输精方法润滑输精管前端输精管先朝上再朝前插入，避开尿道口分开阴门，插入输精管前端逆时针旋转输精管以锁住子宫颈缓慢输入精液母猪自然交配与输精母猪输精示意图母猪发情检查输精操作—擦拭外阴部输精器上涂润滑剂输精操作—分开外阴将输精器前端向下呈45度角向左旋转插入母猪阴道内输精过程猪的输精一次输精屡次输精----用同一头公猪精液；重复输精与双重交配----用不同公猪精液。输精方式输精本卷须知精液的正确保存；发情不等于输精；假发情的鉴定；发情不明显母畜的治疗；季节与受胎率；输精部位与受胎率；严格消毒。〔三〕羊的输精技术用试情公羊进行发情鉴定，对接受爬跨的进行标记；母羊允许公羊爬跨后的6-12h第一次配种；母羊保定在保定架内或两将其倒提，前肢着地；消毒外阴部，开膣器上涂以石蜡油。羊输精操作开膣器侧扁方向与阴道呈同一方向，插入母羊阴道内，向下转动开膣器，并保持翻开状态；准备好的输精器前端对准子宫颈外口，伸入1cm或更深。将精液缓慢注入后抽出；注意：开膣器应保持开张状态，以免夹伤阴道粘膜。如果无法找到子宫颈口，应拨动粘液，使子宫颈口暴露。如果仍无法确认，可将精液注入颜色较深的区域。羊的输精〔四〕家禽的人工授精家禽精子结构家禽精子由很长的头部〔长1.25µm〕，头的前端有尖形的顶体〔1.75µm〕，有一短的中段〔4µm〕连接着一个很长的尾部〔80µm〕。家禽精子特性受精部位在漏斗部。由于睾丸的环境温度及母禽生殖道的特殊构造，精子存活时间比家畜长得多，如公鸡精子最长存活35d，火鸡达70d。鸡交配后3-5d受精率有所下降，一周内尚可，人工授精后那么较长，可以10-14d。一般种鸡放入母鸡群后要经10-14d才能获得较高的受精率。按摩采精法一般由二人操作，保定员保定公鸡的腿和翅膀，使公鸡尾部朝向采精员，呈自然交配姿势。

采精员用手从鸡翼根沿体躯两侧滑动按摩，引起公鸡性欲。

采精员右手中指和无名指之间夹着集精管。

按摩数次后，立即以左手掌将尾羽拨向背部，同时右手掌紧贴公鸡腹部柔软处，拇指与食指分开，于耻骨下缘抖动触摩数次，当泄殖腔外翻露出退化交配器时，左手拇指与食指立刻捏住泄殖腔上缘，轻轻压挤，公鸡立刻射精，右手迅速用集精杯接取精液。

采集到的精液置于水温20-30℃的保温瓶内以备输精鸡的输精输精时间：每天大局部母禽产完蛋后，鸡、火鸡下午16时；鹅鸭上午10时进行。输精部位：母鸡、火鸡浅部阴道1-2cm处输精〔或3-4cm〕，鸭鹅深部阴道4-6cm处输精，由2-3人操作。输精量与次数：鸡每周一次，原精〔含精子0.5-1亿〕；火鸡原精〔含1-2亿〕，间隔10-12d；鹅、鸭0.8-1亿，间隔5-7d。鸡的输精方法输精方法：助手左手握住双翅，提起母鸡，令鸡头朝上，肛门朝下，右手掌置于母鸡耻骨下，在腹部柔软处施以一定的压力使泄殖腔开张，输卵管口翻出。此时母鸡如有粪便即排出，然后将母鸡泄殖腔朝向输精员。母鸡输卵管开口于泄殖腔内左侧上方。输精员将输精管插入输卵管1cm左右处，注入精液后，输精器向后拉，同时解除对母鸡腹部的压力。

1、精液品质2、母畜体况和繁殖机能3、适时输精4、技术水平四、影响人工授精受胎率的因素采精前的准备场地准备

公畜调教与准备

台畜的准备器械及假阴道准备人员准备采精场地

采精要有固定的场地，以便雄性动物建立起稳固的条件反射。采精场地应该宽敞、平坦、安静、清洁，场内设有采精架以保定台畜，或设立假台畜，供公畜爬跨进行采精。采精场应与精液处理室相连,和公畜舍相近。室内采精场的面积一般为10×10米，并附设喷洒消毒和紫外线照射杀菌设备。CompanyLogo公猪采精室马采精横木架及母马保定牛用采精架台畜的准备

台畜有真、假台畜之分真台畜指使用与公畜同种的母畜、阉畜或另一头种公畜作台畜。真台畜应健康、体壮、大小适中、性情温顺。选发情的母畜比较理想，经过训练的公畜也可作台畜。假台畜即采精台，是模仿母畜体型上下大小，选用金属材料或木料做成的一个具有一定支撑力的支架。台畜采精前应清洗、消毒，防止污染精液。台畜的准备猪用假台畜器械及假阴道的准备

采精所需要的器械要事先准备好，力求清洁、枯燥、无菌，在使用之前要严格消毒，每次使用后必须洗刷干净。种公畜的调教和准备利用假台畜采精，要事先对种公畜进行调教，使其建立条件反射。调教的方法有如下几种：外激素法：在假台畜上涂抹发情母畜的阴道粘液或尿液；诱情法：诱使公畜进行爬跨发情母畜，但不让交配而把其拉下，待公畜性冲动到达顶峰时，令其爬跨假台畜采精；旁观法：让其目睹另一头已调教好的公畜爬跨假台畜，然后再诱其爬跨。采精前种公畜的准备

包括体表的清洁消毒和诱情〔性准备〕两个方面。采精前应擦拭公畜下腹部，用0.1%高锰酸钾溶液等洗净其包皮外并抹干，用生理盐水清洗包皮腔内积尿和其他残留物并抹干。在采精前，需以不同诱情方法使公畜有充分的性兴奋和性欲，一般采取让公畜在台畜附近停留片刻，进行2-3次假爬跨。人员的准备采精员应具有熟练的技术，采精时注意人畜的平安；应有固定的工作服与鞋，并保持整洁；采精前应剪短指甲，并戴上一次性手套。采精方法假阴道法

手握法

按摩法电剌激法适用于各种家畜和局部小动物是当前公猪采精普遍应用的方法主要用于禽类和犬类主要用于野生动物的采精假阴道法原理模拟母畜阴道环境条件的人工阴道，诱导公畜射精而采集精液的方法。结构由外胎、内胎、气嘴、集精瓶等组成；准备包括调试温度、压力、润滑度。４０～４５度温水固定胶圈外壳漏斗集精瓶羊用假阴道牛用假阴道牛用假阴道假阴道的准备无破损漏洞：假阴道不得漏水或漏气。无菌：凡接触精液的局部均须经消毒。适宜温度：假阴道内腔温度38-40℃，集精杯也应保持34-35℃。适当压力：借助注入水和空气来调节假阴道的压力。适当润滑度：假阴道前段1/3-1/2处到外口周围涂抹润滑剂。应具备五个条件CompanyLogo注温水充气不太理想的状态〔但可以用〕牛羊假阴道安装充气后理想的状态牛假阴道采精法公牛假阴道采精公马假阴道采精法手握法

适用于猪的采精。采精员要戴上灭菌胶手套，蹲在假台畜左侧，待公猪爬跨台畜后，当阴茎从包皮内开始伸出时，立即紧握龟头，待其抽送片刻后，锁定公猪的龟头。待阴茎充分勃起时，顺势牵引向前，就能导致公猪射精另一只手持带有一次过滤网的的集精杯收集精子浓厚局部的精液，其它稀薄精液及颗粒状胶冻分泌物排出时可随时弃掉。猪手握法采精集精杯处理与集精筒握法采精：

用普通的假阴道，但前端末装集精瓶，当公猪阴茎插入假阴道后，在假阴道漏斗部握住公猪龟头采精的方法。电刺激采精法

通过电极隔直肠壁选择一定的频率通电，刺激输精管壶腹，使公畜阴茎勃起并射出精液。一般在麻醉状态下进行。

这一方法一般用于未经采精训练或胆小不易控制的动物，如各种野生动物和丧失交配能力但种用价值高的公畜。

电刺激采精装置采精员用手经直肠壁找到公畜的精囊腺和输精管壶腹部，轻柔按摩。可到达使公畜阴茎局部勃起而射精。该法适用于牛、犬和家禽。按摩法采精公牛精囊腺按摩采精公牛输精管壶腹部按摩采精法定义：指在一定时间内〔通常为次／周〕采精的次数。公牛：每周2-3/次周猪、马：因为射精量大，隔日一次.绵、山羊：配种季节内，每天可采精屡次，并连续数周一般在观察到精子尾部有未脱落的原生质小滴，说明采精频率过高，此时应减少或停止采精。采精频率采精频率是以雄性生产精子的能力来决定。例如：每克睾丸组织每天产生2500万精子1头公猪的1对睾丸重1000克1次射精量为250ml每ml精子数为2亿那么2500万×1000克×7日＝1750亿精子/周每次射精精子数为250ml×２＝500亿每周采精次数为1750亿÷500亿＝2.5次采精频率过低那么经济上不划算，过高那么阻碍公畜的生长发育和缩短其使用寿命。正常成年公畜采精频率及其精液特征项目每周适宜采精次数（次）每次射精量（ml）每次射出精子总数（亿）每周射出精子总数（亿）奶牛2~65~1050~150150~400水牛2~63~636~8980~300马2~630~10050~150150~400驴2~620~8030~100100~300保证精液适宜pH值，利于精子的存活。如柠檬酸盐、Tris、磷酸氢二钾延长精子在体外存活时间。如糖类、氨基乙酸抗冷物质中卵磷脂和乳脂的双向亲和性对保护精子不受或减弱冷打击。如卵黄、奶类抗冻剂有提高精液冰点，少量渗入精子可降低冷冻损伤〔减少冰晶形成〕，从而到达抗冻作用。如甘油、乙二醇抑制精液中和操作中带入的微生物的繁殖。如青、链霉素缓冲物质非电解质和弱电解质

防冷休克物质抗冻物质抗菌物质稀释液的保护剂

1、酶类：H2O2酶，分解精子代谢过程中产生的H2O2，消除其危害，利于维持精子活率。β-淀粉酶能促进精子获能，提高受胎率。2、激素：OT、PG等，促进母畜生殖道的蠕动。

3、维生素：VB1、VB2、VC，利于精子存活。4、其他：CO2、乙酸、植物汁等，可降低稀释液的pH值，有助于精子保存。

其他添加剂颗粒冻精优点设备简单，生产容易，适合小规模生产体积小、易污染、不易标记、损耗多要用解冻液解冻主要在肉牛、羊中应用牛细管精液细管冻精的优点无污染：保存、输精时不与外界接触，平安卫生；便于标记：外表可印上各种标记；剂量准确：使用方便：解冻时直接投入水浴中解冻，输精时剪去一端后用输精枪输精。冷冻精液的稀释分一次与屡次稀释法。一次稀释：牛羊精液屡次稀释〔猪精液〕第一次稀释：根据计算的稀释倍数用不含抗冻剂的稀释液在室温下进行等温稀释，再放在500毫升的烧杯中与第二液一起缓慢降温至5-8℃；第二次稀释：在5-8℃平衡后进行等温稀释。降温和平衡〔1〕降温：指精液采出稀释后由30℃温度经1~2h缓慢降至5℃，以防低温打击。〔2〕平衡：指加含甘油稀释液对精子作用的时间。平衡目的：使精子有一段适应低温的时间，使甘油充分渗透进入精子体内，到达渗透的活性物质平衡，产生抗冻作用。一般将降温至5℃的精液于这一温度下平衡1-2h或3-5h。精液平衡细管分装低温分装：在第二次稀释后进行分装标记、平衡，最后冷冻；或在平衡结束后分装。

优点：对精子损伤小，解冻后活力好；缺点：对设备要求高。常温分装：一次稀释后即进行分装标记，然后进行精液降温与平衡。

优点：不需要低温操作台；缺点：对精子损害较大。细管上要对供精者的种畜站、品种、公畜号、生产日期进行标记；

精液的冷冻冷源干冰〔-79℃〕、液氮〔-196℃〕冷冻用品冷冻面：氟板〔聚四氟乙烯〕、铜纱网、铝板；冷冻槽：程序冷冻仪、液氮槽、广口保温瓶；冷冻方法干冰埋藏法；液氮熏蒸法；颗粒冻的冷冻铜纱网或氟板浸入液氮预冷；将预冷后冷冻面固定在离液氮面1-3cm高处进行冷冻；每个冻精颗粒0.1ml。收集颗粒精液细管冻精的冷冻程序冷冻仪冷冻

将平衡后的细管冻精放细管架上，置冷冻仪中降温冷冻。没条件的，可将平衡后的细管用毛巾擦干，放入铜纱网上；

将铜纱网降至距液氮面1-2cm的高度平衡4-5分钟后沉入液氮中。冷冻精液的解冻颗粒冻精的解冻；细管冻精的解冻；颗粒冻精的解冻湿解冻：用于牛羊冻精解冻。方法：用解冻管装0.5-1ml解冻液，37-40℃水浴后，放入一颗冻精，待2/3溶解即可取出，检查合格的用于输精。干解冻：用于猪冻精解冻。方法：用一铝盒，50-60℃水浴，均匀倒入一个剂量冻精，待其大局部溶解后取出铝盒，参加20-30ml的解冻液，检查合格的用于输精。颗粒冻精解冻液一般采用2.9%的柠檬酸钠作解冻液。牛羊颗粒冻精也可用VB12注射液作解冻液。如解冻后要保存那么用柠檬酸钠0.3%，葡萄糖5.0%，EDTA0.1%配方。猪的冻精解冻液用常温保存稀释液BTS。如果解冻液中参加2mmol的咖啡因有利于提高受胎率。细管冻精的解冻将水温调整到38-40℃；将提漏提至罐口下3-5cm处，用镊子夹住细管的超声波封口端，迅速移入温水中水浴；迅速摇动细管，冻精由乳白色变透明后即可取出，用手甩动使之全部溶解。检查〔1〕颗粒精液解冻后取一小滴检查活力；〔2〕细管精液可推出一点检查活力，如平时都按常规操作亦可不检。我国规定牛冻精解后的活率在0.4，水牛在0.3以上才能用于AI。 解冻后的精液处理应尽快用于输精，不能长时间保存，更不能再次冷冻。解冻中要注意的事项解冻时动作要迅速而准确；存放冻精的提筒离开液氮面太久，不能提出液氮罐颈口；夹取冻精的镊子要先预冷。冷冻精液品质要求活力以上、顶体完整率