化学品 丽斑麻蜥急性经口毒性试验 征求意见稿

1化学品丽斑麻蜥急性经口毒性试验本文件规定了化学品对丽斑麻蜥急性经口毒性试验的测定方法，包括试验的材料、条件、操作、质量控制、数据处理、试验报告等的基本要求。2术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2.1半数致死剂量medianlethaldose在急性经口毒性试验中，引起50%的供试生物死亡时的供试物剂量，用LD50（mg/kg体重）表示。2.2急性毒性acutetoxicity是指生物体短时间（天）暴露于某种化学物质中产生的明显不良反应。在本试验中，丽斑麻蜥急性经口毒性用半数致死剂量(LD50)来表示，即在特定时间内（7d）导致50%数量的供试蜥蜴死亡的供试物浓度。2.3供试物testsubstances试验中需要测试的物质。2.4化学品chemicals化学品是指各种元素组成的纯净物和混合物，无论是天然的还是人造的。3方法原理将不同浓度的供试物以一次经口灌注的方法暴露给丽斑麻蜥，以7d为一试验周期，记录丽斑麻蜥的死亡情况，确定50%试验丽斑麻蜥死亡时的供试物剂量，用LD50（mg/kg体重）表示。4试剂和材料4.1供试生物试验应选择同一种群、体长、体重和年龄相似的丽斑麻蜥（Eremiasargus）成年蜥蜴。试验用丽斑麻蜥体重变异系数不超过平均体重的20%。试验前至少需要驯养7d，驯养条件和照明条件与试验时的条件一致。驯养期间死亡率小于5%，且生长状态符合物种生长规律2配置不同浓度供试物溶液过程中的溶剂一般选择水(GB/T6682-2008规定的实验室一级用水)或者食用油(例如玉米油)。试验用水的pH值应为6.5-8.5。试验期间水质保持恒醇，二甲基亚砜等，其中有机溶剂用量一般不得超过0.1mL/L(0.1%),选择合适的容器进行试验，每个容器应容纳10只蜥蜴，可选择在30cm×30cm×20可使用超声波分散混匀，也可使用少量有机助溶剂(助溶剂用量一般不超过0.1mL/L)。贮备液的配制推荐使用机械方式(如搅拌或超声),使供试物在溶剂中进行简单的混合或搅动。试验温度控制在26℃—30℃,湿度控制在50%—70%,光暗比为14h:10h的环境中进3饲养：试验开始24h前停止喂食，仅供清水，实验开始后正常饲喂面包虫。7.2预试验正式试验前先进行预实验，按正式试验的条件，以较大的间距设置4～5个浓度组，求根据预试验确定的浓度范围按一定间距设置5～7个剂量组，使死亡率分布在0%-100%之间。每剂量组10只蜥蜴(雌雄各半),并设空白对照组，使用助溶剂的还需增设溶剂对照组。对照组和各剂量组均不设重复，各浓度组间的浓度级差不得超过2倍。试验用蜥蜴以记录各处理组供试蜥蜴的死亡数，对试验数据进行数理统计，求出LD值及95%置信限。7.4限度试验也可应用有关毒性数据计算软件进行分析和计算(如SPSS、USEPA—ProbitAnalysis等)。9.1试验结束时，对照组死亡率不得超过10%。9.2试验期间，温度控制在26℃-30℃,湿度控制在50%-70%,光暗比为14h:10h。4——供试生物名称、来源、大小及驯养条件等。10.3试验条件 贮备液的制备方法，如果供试物难溶于水，则记录配制贮备液的方法，参见附录C——试验设计(如试验容器数量、试验浓度等); 试验条件：室温、湿度、光周期等。 如果进行了限度试验，报告结果： 在试验期间，蜥蜴的中毒症状，行为反应异常状况的以及死亡数； 式验开始后7d的LDsa值和95%的置信限；——试验过程中死亡率为0的最大试验浓度(LDo);试验过程中死亡率为100%的最小——对丽斑麻蜥毒性等级划分参见附录B。5(资料性)丽斑麻蜥体型较小，体长(吻端至肛门)50mm±10mm,体重3.5g±1.0g。顶鳞后缘齐平，略成方形；颊鳞2枚，前小后大；有两枚大的眶上鳞食百余种动物，包括昆虫纲、蛛形纲、甲壳纲、多足纲等，其中以昆虫月是丽斑麻蜥的繁殖期。每次产卵6～8枚在11月份进入冬眠状态。使用5m×1.2m×0.4m室内玻璃缸进行丽斑麻蜥的饲养，缸内铺盖10cm的软土。温度和相对湿度控制在26℃—30℃,使用六盏100W的白炽灯提供光照并维持光照时较高的温度，光暗比控制在14h:10h。每天分两次饲喂黄粉虫幼虫(TenebriomolitorL.),每两天在丽斑麻蜥繁殖季节定期触摸判断雌体的怀卵状态，怀卵雌体单独养在有潮湿沙质基质的产卵缸(30cm×30cm×20cm)内。所有产出的卵均可在产后2h内被收集。转移入设置为干蛭石(vermiculite):水=1:2的孵化基质的塑料盆中，卵的1/3埋于基质中。孵化度保持在26℃—30℃,孵化期一般为2个月左右。6(资料性)根据化学品对丽斑麻蜥急性经口半数致死剂量LDso,将化学品对丽斑麻蜥的急性急性经口LDo(mg/kg体重)高毒中毒7附录C纯度：准确称量(移取)样品g(mL),置于烧杯中，用蒸馏水或助溶剂溶解稀释，定容至mL容量瓶中，充分摇匀，得贮备液浓度为mg/L,编号为溶液体积(mL)定容体积(mL)浓度(mg/L)溶液编号组别空白对照溶剂对照试验1浓度(mg/L)死亡数(只)中毒症状8[1]Suski,J.G.,Salice,C.,Houpt,J.T.,Bazar,M.A.,Talent,L[2]Weir,S.M.,Yu,S.,Talent,L.G.,Maul,J.D2015.Improvingreptileecologicalriskassessment:Opesticidestoacommonlizardspecie[3]UsEnvironmentalProtectionAgency,2006.Reregistradecisionforpropyleneglycolanddipropyleneglycol.EPA739/R-06/002.Washi[4]USEnvironmentalProtection