1-2发 酵 工 程 的 无 菌技术 教学课件-高二生物苏教版选择性必修三

第一章

发酵工程第2节发酵工程的无菌技术生物（苏教版）高中生物选择性必修31.概述平板划线法分离和纯化微生物的过程。2.概述稀释涂布平板法分离和纯化微生物的过程。3.进行土壤中分解尿素的细菌的分离和计数。学习目标1.科学思维：能通过平板划线法和稀释涂布平板法的操

作，掌握微生物分离和纯化的基本方法。2.科学探究：学会配制选择培养基，以分离出能分解尿

素的细菌，并对实验结果进行分析和评价。素养要求一、平板划线法分离和纯化微生物平板划线法:

通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面，从而获得单个菌落的方法。菌落：分散的微生物在适宜的固体培养基表面

或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定

形态结构的子细胞群体，这就是菌落。单菌落：一般由一个细胞繁殖而来的肉眼可见

的纯种菌落,即单菌落。微生物群分散或稀释单个细胞单个菌落繁殖通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落倒平板的具体操作1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可。2.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？最好不要用这个平板培养微生物。

防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。将所倒平板放入37℃的恒温箱中培养12h～24h，观察是否有菌落存在以确定是否被污染或灭菌是否彻底。4.怎么确定所倒平板未被杂菌污染？3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。1、将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红。2、在火焰旁冷却接种环，并拔出装有酵母菌的棉塞3、将试管口通过火焰.4、将已冷却的接种环伸入菌液中，蘸取一环菌液5、将试管通过火焰，并塞上棉塞6、左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基7、灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连8、将平板倒置放入28℃恒温培养箱中培养24～48h。划3个平板（重复实验）1个不划线（空白对照）1）一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；2）存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。平板划线法的具体操作第1区划线接种环灭菌第2区划线接种环灭菌第3区划线接种环灭菌接种环灭菌分区划线法12345①接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次.②划线首尾不能相接③每次划线前接种环进行灭菌④划线后,培养皿倒置培养平板划线法注意事项:素养提升(1)平板划线法的原理是什么？提示：平板划线法的原理是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到单个菌落。(2)灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？提示：避免接种环温度太高，杀死菌种。(3)在做第二次划线以及其后的操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？提示：划线末端含有的细菌数目较少，每次从上一次划线的末端开始划线能够使细菌的数目随划线次数的增加而逐渐减少，最终分散成单个的细菌。平板划线操作中三种灼烧的目的不同项目目的挑取菌体前灼烧避免接种环上可能存在的微生物污染菌种每次划线前灼烧杀死上一次划线结束后接种环上残留的菌种，使下一次划线时接种环上的菌种直接来源于上一次划线的末端划线操作结束后灼烧及时杀死接种环上残留的菌种，避免菌种污染环境和感染操作者(4)为何最后一次划线不能与第一次划线相连？提示：最后一次划线已经将细菌稀释成单个的细胞，如果与第一次划线相连则增加了细菌的数目，得不到纯化的效果。(5)平板划线法接种菌种时，哪些操作可防止杂菌污染？提示：①接种前将接种环放在酒精灯火焰上灼烧。②划完一个区域后，将接种环灼烧，冷却后再划下一区域。③接种环蘸取菌液时，要将试管口、棉塞等通过火焰。④划线时将培养皿的皿盖打开一条缝隙，将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划线后及时盖上皿盖。(6)接种操作完成后，需将平板倒置放入培养箱中培养，此时倒置的目的是什么？提示防止水分过快挥发，防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。(7)若在培养基上观察到不同形态的菌落，原因是什么？提示原因可能是菌种不纯，混入其他杂菌，或在实验操作过程中被杂菌污染。将未接种的培养基在恒温箱中保温1～2天，若无菌落生长，说明培养基的配制成功；否则制备失败，需重新配制。(8)如何检查培养基制备是否合格？典题应用1.下列关于倒平板的叙述，错误的是A.待培养基冷却至50℃左右时倒平板B.倒平板整个过程应在酒精灯火焰旁进行C.完全打开培养皿皿盖，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立

即盖上培养皿的皿盖D.为避免水滴滴入培养基，平板应倒过来放置及时反馈知识落实√2.(2021·江苏苏州月考)微生物接种的方法很多，平板划线法是常用的一种。如图是平板划线示意图，划线的顺序为①②③④。下列相关叙述错误的是A.划线操作时，将挑有菌体的接种环插入培养基B.平板划线后培养微生物时要倒置培养C.不能将第④次的划线与第①次的划线相连D.在第②～④次划线前都要对接种环进行灭菌√二、稀释涂布平板法分离和纯化微生物1.稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，使其中的微生物充分分散，培养后在平板培养基表面形成多个单菌落。应用：既可用于菌种的分离和纯化，也可以用于微生物的计数。①铲取土样，将样品装入纸袋中②将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀，制成菌液。1mL1ⅹ1090mL无菌水1ⅹ1071ⅹ1051ⅹ1061ⅹ1031ⅹ1021ⅹ1041mL1mL1mL1mL9mL无菌水1mL②取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌稀释涂布平板法的操作过程③取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。④将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。⑤将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。⑥用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，培养核心归纳1.分离尿素分解菌操作中的注意事项(1)在实验操作中，每个步骤都要注意无菌操作，以防培养基被污染，影响实验效果。(2)样品稀释液的最佳浓度为培养后每个平板上有30～300个菌落的浓度。(3)每一稀释倍数的菌液都至少要涂布3个平板，作为重复实验，求其平均值，若其中有菌落数与其他平板差别很大的，则需要重新实验。2.试比较两种分离和纯化方法项目操作特点结果稀释涂布平板法取一定稀释度的样品涂布平板↓用无菌玻璃涂布器将样品涂布均匀先制作平板后加入菌液细菌菌落通常仅在平板表面生长混合平板法取稀释的少量菌悬液与50℃左右的培养基混合均匀↓将与样品混合后的培养基倒入无菌培养皿中菌液与培养基混合，共同倒平板细菌菌落出现在平板表面和内部核心探讨甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。1.甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230，该同学的统计结果

(填“可靠”或“不可靠”)，若不可靠，应如何改进？突破重难强化素养提示为增加实验的说服力与准确性，应设置重复实验，在同一稀释度下至少涂布3个平板，统计结果后计算平均值。不可靠2.乙同学在该浓度下涂布了3个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学将21舍去，然后取平均值。该同学对实验结果的处理

(填“合理”或“不合理”)。微生物计数时，如果实验中出现重复实验的结果差别很大的情况，应

，找出差异的原因，而不能简单地将结果舍弃后进行计数。不合理分析实验过程中可能的影响因素3.某同学在三种稀释度下吸取0.1mL的菌液涂布平板，统计菌落数，得到以下的数据，试计算1g样品的活菌数。平板菌落数稀释度平板1平板2平板3104320360356105212234287106212318提示105的稀释度下取0.1mL的菌液涂布的三个平板上的菌落数在30～300之间，计算其平均值为(212＋234＋287)/3≈244。进一步可以换算出1g样品中活菌数为244×105÷0.1＝2.44×108(个)。4.为什么统计的菌落数往往比活菌的实际数目低？提示当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。典题应用3.用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中得到以下几种统计结果，其中正确的是A.涂布了1个平板，统计的菌落数是230B.涂布了2个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238C.涂布了3个