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文档简介

冠心病基因治疗主要内容1目的基因的选取2导入载体的选择3基因导入的方式4其他问题2导入载体的选择3基因导入的方式4其他问题1目的基因的选取通过增加内源的抗氧化储备达到减少氧化应激对缺血心肌损伤的目的抗氧化应激抗炎症反应导入炎症抑制基因可以在炎症发生前对心肌梗死生抑制作用纠正脂代谢异常家族性高胆固醇血症是一种由LDL受体功能或表达异常引起的常染色体性遗传病,导入正常基因可有效抑制脂代谢异常抗内皮增殖血管的重塑、平滑肌细胞增殖迁移和细胞外基质的积聚而导致内膜的增生,是影响远期疗效的重要原因植入抗内皮增殖基因可有效防止在狭窄。1目的基因的选取2导入载体的选择3基因导入的方式4其他问题研究发现,外源性给予某些多肤类生长因子能促进动物缺血组织的新生血管形成和侧支循环建立,改善组织缺血。其中血管内皮生长因子(VEGF)是目前公认的最具特异性和强大的生长因子。1目的基因的选取2导入载体的选择3基因导入的方式4其他问题一类特异作用于血管内皮细胞的糖蛋白,具有促进内皮细胞分裂、增值,以及诱导血管生成的作用VEGF促进血管内皮细胞增殖的作用具有相对特异性,对血管壁的平滑肌细胞和成纤维细胞没有影响,因此可以避免在发挥促血管生成作用时引起血管内膜异常增生等副作用。VEGF为分泌性蛋白,有信号肽序列,合成后分泌到细胞外,以旁分泌或自分泌方式作用于靶细胞的VEGF受体血管生成素(Angiopoietin)

主要为Ang-1成纤维生长因子(bFGF)基因另外两种生长因子VEGF

VS

Ang-1

虽然VEGF165和Ang1都是促血管生成因子,但两者的功能并不相同。VEGF特异性促进血管内皮细胞分裂和生长,是新生血管形成的始动因素,但能促进血管通透性而Ang-1有助于新生血管的成熟和稳定,可防止由VEGF引起的血管渗漏和组织水肿

bFGF基因是非特异性血管内皮细胞的生长因子,它主要在新生血管外膜延伸和生长中发挥作用因此血管梗塞性病的基因治疗,最好应该联合用药!VEGF&

bFGF虽然可能更快地促进新生血管的生成,但是由于bFGF促进VSMC和成纤维细胞的增殖和迁移,促进血管内膜的增生,引起血管的重塑和再狭窄的发生。VEGF和Ang-1基因联合可能效果更好!92导入载体的选择1目的基因的选取3基因导入的方式4其他问题(l)能在宿主细胞内进行独立和稳定的自我复制(2)易于从宿主细胞中分离并进行纯化(3)在其序列中具有适当的限制性内切酶位点,在这些位点上插入外源基因不影响载体自身复制10

腺病毒载体逆转录病毒载体

裸质粒载体2导入载体的选择1目的基因的选取3基因导入的方式4其他问题腺病毒原理

主要优点

缺点和改进方向1目的基因的选取3基因导入的方式4其他问题腺病毒是一种无包膜的DNA双链病毒,该载体多是在2型或5型腺病毒的基础上构建而来。

腺病毒载体腺病毒原理主要优点

缺点和改进方向1目的基因的选取3基因导入的方式4其他问题

腺病毒载体基因容量大,外源基因表达水平高病毒滴度高,转移效率高可感染分裂和未分裂细胞不整合至细胞染色体,对人类相对比较安全2课题总结3实验方案4实验进度

缺点

改进方向缺乏持久的表达,易激活免疫系统,重复使用转导效率明显降低

腺相关病毒载体(adenoviral一associatedvirus,AAV)AAV是一种单链DNA微小病毒,也是一种缺陷病毒。它也可以感染分裂期和非分裂期的细胞,无致病性,安全性高,基因表达稳定。

腺病毒载体逆转录病毒载体原理

主要优点

缺点和改进方向1目的基因的选取3基因导入的方式4其他问题逆转录病毒是一种经修饰的RNA缺陷病毒,其复制所需要的基因被除去而代之为治疗性基因和选择性标记物逆转录病毒载体腺病毒原理主要优点

缺点和改进方向1目的基因的选取3基因导入的方式4其他问题载体构建简单,宿主范围广病毒转染效率高,表达持久逆转录病毒载体2课题总结3实验方案4实验进度

改进方向

缺点逆转录病毒难以纯化和浓缩,病毒制备滴度低只能转染增殖期的靶细胞易被血液中成分中和且不稳定,有插人性基因突变的危险中国医学遗传学国家重点实验室夏家辉院士在细胞遗传学研究的基础上发现人的双随体小染色体具有遗传稳定、无免疫原性、携带外源基因容量足够大等特点,并利用该小染色体研制出人D、G组染色体短臂导向的基因治疗新载体一人源基因载体裸质粒载体

主要优点

缺点和改进方向1目的基因的选取3基因导入的方式4其他问题将含有外源基因的纯化闭环质粒DNA直接转导心脏并在心肌中表达蛋白。

裸质粒载体腺病毒原理主要优点

缺点和改进方向1目的基因的选取3基因导入的方式4其他问题简便、几乎无抗原性,在心肌中能较好表达

裸质粒载体

腺病毒原理

主要优点缺点和改进方向1目的基因的选取3基因导入的方式4其他问题

裸质粒载体表达时间短暂,持续3周左右,表达效率亦相对有限冠心病基因治疗多采用可产生生物活性蛋白的基因,研究显示,仅少量被转染细胞分泌的蛋白就可以获得理想的治疗效应,因此弥补了裸质粒载体基因转移效率低的不足20基因转移途径的选择是心脏基因治疗的研究重点之一,也是其不同于其它疾病基因治疗的一个独特方面。心脏基因转移的主要途径可以分为心肌内途径和血管内途径两大类,心包内基因转移也有少数报道。心肌内途径在治疗性血管生成的研究中应用较多。1目的基因的选取2导入载体的选择4其他问题3基因导入的方式21

心肌内注射法

血管途径

心包转移法3基因导入的方式1目的基因的选取2导入载体的选择4其他问题1目的基因的选取2导入载体的选择4其他问题3基因导入的方式心肌内注射法冠心病基因治疗的动物实验多采用开胸心肌内注射的方式导入基因制剂,这种方法能够实现基因的定位转移,且被证实能获得理想的效果。但手术风险、创伤性和高额费用限制了临床应用开胸?!1目的基因的选取2导入载体的选择4其他问题3基因导入的方式近年来研制出一种新的心电标测定位注射系统(NOGA),能够通过介入途径从心室腔内标测缺血心肌并实现经心内膜的心肌内注射。心肌内注射法需要特殊的介入器械,外源基因与血管壁接触的时间、面积都受到很大限制,而冠脉内直接基因注射转染率低,

基因转染不局限,

易有系统转染扩散的危险。1目的基因的选取2导入载体的选择4其他问题3基因导入的方式血管途径包括:

血管壁局部转移

冠状动脉内注射

血管途径1目的基因的选取2导入载体的选择4其他问题3基因导入的方式心包腔是由壁层和脏层心包构成的封闭腔隙,将携基因载体导人这一腔隙可以提高特异性,能延长外基因与心包及心包脏层下心肌的接触时间,提高转染心肌的效率。

心包转移法4其他问题3基因导入的方式2导入载体的选择1目的基因的选取

新的研究方向——基因、细胞联合治疗KenSuzuki等用HVJ-VEGF165转染大鼠的骨骼肌成肌细胞,并将这些细胞移植至同种系大鼠心肌梗塞模型的坏死心肌组织中,在限制心肌梗塞面积、改善心功能的方

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