DB2312T 087-2023胚培养灭活疫苗用种鸡蛋检验技术操作规程

CCSB41DB2312绥化市市场监督管理局发布DB2312/T087—2023本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由绥化市农业农村局归口。本文件起草单位：黑龙江省百洲生物工程有限公司、明水县农业综合行政执法大队。本文件主要起草人：李山峰、张洪楠、张越、王丹、王海楠、王东升。1DB2312/T087—2023本文件规定了胚培养灭活疫苗的种鸡蛋的蛋重、蛋形、孵化率、蛋壳表面细菌含量、蛋内容物细菌含量、卵黄抗体、病原7项检验方法。本文件适用于兽用生物制品生产企业对胚培养灭活疫苗用种鸡蛋检测及质量考察。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T16550鸡新城疫诊断技术GB/T19167传染性法氏囊病诊断技术GB/T23197鸡传染性支气管炎诊断技术NY/T551鸡产蛋下降综合征诊断技术NY/T772禽流感病毒RT-PCR检测方法SN/T4053鸡传染性贫血检疫技术规范《中华人民共和国兽药典》2020年版（三部）3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4主要技术内容4.1蛋重使用电子天平称重（精度为0.1g），应控制在50g～70g之间，且整齐度不大于10g。4.2蛋形肉眼观察应为卵圆形，表面光泽无裂纹、沙皮、畸形。4.3孵化率将种蛋洗净、消毒后入孵化器孵化，温度控制在38℃~38.5℃之间，湿度控制在65%～70%之间，每60min翻蛋一次，孵化5d～6d，用照蛋灯逐个照检，胚胎及血管发育正常为合格，孵化率应大于90%。4.4蛋壳表面细菌含量检测每批抽检10枚种鸡蛋，分别用无菌棉拭子在蛋壳表面擦拭1cm2面积后马上折断棉拭子头放入准备好的含10ml生理盐水的无菌瓶内，将无菌瓶放在振荡器上200r/min振荡10min，在超净工作台内分别吸取0.1ml生理盐水，涂布于TSA培养基平板上，37℃培养48h，统计菌落数，为消毒效果提供数据指导。4.5蛋内容物细菌含量检测每批抽检10枚种鸡蛋，打开蛋壳倒出蛋清和蛋黄，按1：2加入无菌生理盐水用无菌组织捣碎机匀2DB2312/T087—2023浆，在超净工作台内分别吸取0.1ml生理盐水，涂布于TSA培养基平板上，37℃培养48h，统计菌落数，为产品生产过程控制以及追溯提供数据支撑。4.6卵黄抗体每批抽检10枚种鸡蛋，卵黄直接稀释测定法检测：在样品管中加入0.5ml0.9%生理盐水，再吸取0.5ml卵黄做1:1稀释，混匀后即为待检卵黄样品，依照《中华人民共和国兽药典》2020版三部附录血凝抑制试验方法测定，判定结果时以完全抑制4HA单位抗原的最高稀释度作为判定终点，卵黄中鸡新城疫、禽流感（H9亚型）或传染性支气管炎（M41株)的抗体效价均应小于1：4。在卵黄直接稀释测定法检测出现跳孔或测不出抗体时，采用卵黄氯仿萃取法检测，取上述1:1稀释过的卵黄稀释液0.5ml，在通风橱中加入0.5ml氯仿，震荡混匀，室温静置30min，3000r/min离心5min，作为待检卵黄样品，进行HI抗体检测，判定结果时以完全抑制4HA单位抗原的最高稀释度作为判定终点，读数加1，卵黄中鸡新城疫、禽流感（H9亚型）或鸡传染性支气管炎（M41株)的抗体效价均应小于1：4。4.7外源病毒检测每批抽检10枚种鸡蛋，打开蛋壳倒出蛋清和蛋黄，用无菌组织捣碎机匀浆，重点检测经胚垂直传播的病原体。按照NY/T772的规定检测禽流感，应为阴性；按照GB/T16550的规定检测鸡新城疫，应为阴性；按照GB/T23197的规定检测鸡传染性支气管炎，应为阴性；按照《中华人民共和国兽药典》2020版三部附录3302ELISA方法检测禽白血病，应为阴性；按照《中华人民共和国兽药典》2020版三部附录3304间接免疫荧光试验（IFA)方法检测禽网状内皮增生症，应为阴性；按照GB/T按照SN/T按照NY/T19167的规定检测鸡传染性法氏囊病，应为阴性；4053的规定检测鸡传染性贫血，应为阴性；551的规定检测产蛋下降综合征，应为阴性。5检验记