多指标分析方法在活血化瘀中药复方制剂质控方面的应用研究

多指标分析方法在活血化瘀中药复方制剂质控方面的应用研究活血化瘀是中医的一个重要理论和治疗原则，《内经》记载的“疏其气血、令其调达”，已成为后世活血化瘀治疗原则的基础。随着对活血化瘀中药的深入研究，发现其具有改善血流动力学异常、改善血液流变学异常、改善微循环障碍、抗血栓形成、抗动脉粥样硬化及心肌缺血、抑制组织异常增生等药理作用，被广泛应用于临床各科，涉及心脑血管疾病、糖尿病、肝硬化、肿瘤等数十种疾病，临床疗效显著，展现出良好的应用前景。正是由于中药制剂在临床上的广泛应用，中药制剂难免良莠不齐，为了保证中药复方制剂的安全性与有效性，对其质量控制的方法与手段成为中药现代化的最重要研究课题之一。现行的中药质量控制模式是借鉴国外化学药品质量控制模式建立的，化学药品具有明确的分子结构，清晰的构效关系，因此鉴别、检查、含量测定都可以直接作为质量评价的指标，但是对于在中医理论指导下的中药，尤其是复方制剂，检测其中任何一种成分均不能体现其整体质量。因此，需要重新审视和明确中药质量控制和评价的目标、策略、模式与方法，建立一套既能保证稳定可控，又能直接体现安全有效的新型中药质量控制管理方法体系。《中国药典》2010年版收载的中药部分对其质控含量测定的成分，一种是活性有效成分，一种是指标成分，即既可能是活性成分，也可能是非活性成分，上世纪七十年代以来，高效液相色谱法（HPLC）以其在含量测定方面的独特优势：分离效能高、分析速度快、重现性好、流动相选择性广、色谱柱可反复使用等，被大量地应用于有效成分及指标成分的质量控制，在中药制剂质量控制中占有非常重要的地位。随着HPLC方法的普及应用，2010年版《中国药典》所载中药部分的含量测定方法已达到709种采用的是高效液相色谱法。为了使活血化瘀中药复方制剂得到安全、广泛的应用，对其指标成分的质量控制就成为我们研究的主要对象。药品质量的可控性是药品的基本属性，是药品的安全性和有效性的基础。质量标准是控制药品质量的重要手段，能有效的控制药品的质量，确保用药的安全，是质量可控性的具体体现。本课题选用唐山工人医院内常用活血化瘀中药：参芍口服液（医院制剂）、芪龙胶囊、益心舒胶囊、消栓通络胶囊（等3种市售品种）中的丹参素、原儿茶醛、芍药苷、阿魏酸、丹酚酸B等多种成分作为研究对象，采用多波长反相高效液相色谱法对复方制剂中有效成分的质量控制进行较为系统的方法学研究，所建立的方法专属性强、精密度和稳定性良好，实验结果准确可靠，可为活血化瘀中药复方制剂的质量控制提供科学、有效的试验方法与依据。第一部分：参芍口服液中的丹参素、原儿茶醛、芍药苷、阿魏酸、丹酚酸B的多波长RP-HPLC法测定目的：建立参芍口服液的五种有效成分（丹参素、原儿茶醛、芍药苷、阿魏酸、丹酚酸B）的RP-HPLC定量分析方法，为参芍口服液质量控制提供依据。方法：采用EclipseXDB-C18(4.6mm×150mm，5μm，安捷伦公司）色谱柱，流动相为0.5%磷酸水溶液（A）-甲醇（B）-乙腈（C）进行梯度洗脱；流速：1.0mL/min；检测波长：280nm、230nm、320nm；柱温：30℃；进样量为10μL。结果：在此色谱条件下，5种成分可完全分离，丹参素、原儿茶醛、芍药苷、阿魏酸、丹酚酸B的线性范围分别为：24~384μg/mL（r2=1）,1.25~20μg/mL（r2=0.9998），40.5~648μg/mL（r2=0.9996），1.5~24μg/mL（r2=0.9999），145~2320μg/mL（r2=0.9999），平均回收率为丹参素100.8%（RSD=1.29%），原儿茶醛100.2%（RSD=2.27%），芍药苷99.6%（RSD=0.93%），阿魏酸100.2%（RSD=1.18%），丹酚酸B99.3%（RSD=2.46%）。结论：采用多波长RP-HPLC法建立了参芍口服液中五种有效成分（丹参素、原儿茶醛、芍药苷、阿魏酸、丹酚酸B）的含量测定方法。所建立方法专属性强，精密度、准确度好，为参芍口服液综合质量控制提供了质控依据。第二部分：多波长反相高效液相色谱法测定芪龙胶囊中丹参素、原儿茶醛、芍药苷、阿魏酸、丹酚酸B的含量目的：利用反相高效液相色谱法测定芪龙胶囊中丹参素、原儿茶醛、芍药苷、阿魏酸、丹酚酸B的含量，为该制剂的质控提供参考。方法：采用EclipseXDB-C18(4.6mm×150mm，5μm，安捷伦公司）色谱柱，流动相为0.5%磷酸水溶液（A）-甲醇（B）-乙腈（C）进行梯度洗脱；流速：1.0mL/min；检测波长：280nm、230nm、320nm；柱温：30℃；进样量为10μL。结果：在此色谱条件下，5种成分可完全分离，丹参素、原儿茶醛、芍药苷、阿魏酸、丹酚酸B的线性范围分别为：4.24~132.29μg/mL（r2=1）,0.36~11.23μg/mL（r2=0.9998），23.71~379.39μg/mL（r2=1），0.7~11.2μg/mL（r2=0.9999），200~3200μg/mL（r2=0.9998），平均回收率为丹参素100.1%（RSD=1.40%），原儿茶醛99.9%（RSD=2.70%），芍药苷99.8%（RSD=1.47%），阿魏酸102.0%（RSD=3.11%），丹酚酸B99.9%（RSD=1.41%）。结论：该方法简单快速，5种成分分离效果好，可用于芪龙胶囊质量控制。第三部分：多波长HPLC-DAD法测定益心舒胶囊中丹参素、原儿茶醛、阿魏酸、丹酚酸B的含量目的：通过对益心舒胶囊中丹参素、原儿茶醛、阿魏酸、丹酚酸B的HPLC-DAD法测定，为该制剂的质控提供参考依据。方法：采用EclipseXDB-C18(4.6mm×150mm，5μm，安捷伦公司）色谱柱，流动相为0.5%磷酸水溶液（A）-甲醇（B）-乙腈（C）进行梯度洗脱；流速：1.0mL/min；检测波长：280nm、320nm；柱温：30℃；进样量为10μL。结果：在此色谱条件下，4种成分可完全分离，丹参素、原儿茶醛、阿魏酸、丹酚酸B的线性范围分别为：9~144μg/mL（r2=0.9999）,0.5~8μg/mL（r2=0.9998），0.65~10.4μg/mL（r2=0.9997），221.25~3540μg/mL（r2=0.9997），平均回收率为丹参素100.7%（RSD=1.75%），原儿茶醛100.3%（RSD=2.89%），阿魏酸100.2%（RSD=3.16%），丹酚酸B99.7%（RSD=2.04%）。结论：采用HPLC-DAD法，同时测定益心舒胶囊中丹参素、原儿茶醛、阿魏酸、丹酚酸B含量，该法简单易行、重现性好，可用于益心舒胶囊质量控制。第四部分：多波长高效液相色谱法测定消栓通络胶囊中丹参素、原儿茶醛、阿魏酸、丹酚酸B的含量目的：利用多波长高效液相色谱法，对消栓通络胶囊中丹参素、原儿茶醛、阿魏酸、丹酚酸B的含量进行定量分析，为该制剂的质控提供方法学参考。方法：采用EclipseXDB-C18(4.6mm×150mm，5μm，安捷伦公司）色谱柱，流动相为0.5%磷酸水溶液（A）-甲醇（B）-乙腈（C）进行梯度洗脱；流速：1.0mL/min；检测波长：280nm、320nm；柱温：30℃；进样量为10μL。结果：在此色谱条件下，4种成分可完全分离，丹参素、原儿茶醛、阿魏酸、丹酚酸B的线性范围分别为：12~192μg/mL（r2=0.9998）,1~16μg/mL（r2=0.9999），0.4~6.4μg/mL（r2=0.9999），62.5~1000μg/mL（r2=0.9999），平