头穴针刺对大鼠脑梗塞的影响

头穴针刺对大鼠脑梗塞的影响

脑梗死于中风和脉博延迟的特点。是一种临床疾病，通常是医学领域的中心研究项目。近年来,头穴针刺在治疗脑梗塞的临床上取得了显著的疗效,特别是在改善机体功能障碍方面更有独到之处,受到海内外医学界的高度重视。为了揭示头穴针刺治疗急性脑梗塞的作用机制,我们从神经细胞电生理入手,采用能直接反映神经元功能状态的细胞放电作为我们的观测指标,利用先进的微电极技术研究急性脑梗塞后一定时间窗内梗塞临近部位神经元放电活动的变化及头穴针刺对神经元放电活动的影响,阐明头穴针刺的作用机理,为临床头穴针刺治疗急性脑梗塞提供客观依据。1实验材料1.1实验仪器和试剂玻璃微电极拉制器,PE-2型;立体定位仪,SN-2型;微电极操纵器,SM-21型(日本成茂)。电刺激器,SEN-3301型;VC-9双线示波器(日本光电)。前极放大器,JDS-731-F型;源跟随器,JSD-731-YA;音响发生器,JSD-731-J(华南师院无线厂)。录音机,GF-777(日本夏普)。G-6805型治疗仪(南通无线电元件三厂)。JSD-731电生理仪(广东师院无线电厂)。屏蔽室,P-22型(常州第二无线电厂)。医用数据处理软件(Power-LabChart4.0)。人工呼吸机,DH-1(浙江医大医疗仪器实验厂)。氯醛糖(E.MEPEKAG.DARMSTADT,德国)。氨基甲酸乙酯(北京化工厂)。氯化筒箭毒碱(SIGMA,美国)。氯化钾(沈阳新西试剂厂)。氯化钠(哈尔滨新春化学试剂厂)。盐酸利多卡因(上海海普药厂)。1.2实验动物纯种Wistar大鼠,雄性,体重250～280g,由黑龙江中医药大学实验动物中心提供。合格证号:医动字第09-3-3号。2实验方法2.1动物模型的制备方法本实验按文献Zea-longa线栓法复制大鼠大脑中动脉梗塞模型。2.2动物模型组见表1本实验用健康雄性大鼠40只,按随机数字表分成:(1)正常组(空白对照);(2)假手术组(只分离动脉,结扎颈总动脉和颈外动脉,不插栓线);(3)病理组(即模型组,结扎颈总动脉和颈外动脉,大脑中动脉插栓线);(4)针刺组(线栓后2h给予头穴电针10min)。2.3麻醉前感染途径测定脑面在室温条件下(22℃),大鼠称重后,用5%的氨基甲酸乙酯和0.5%氯醛糖混和液(10ml/kg)腹腔注射麻醉,气管插管,线栓大脑中动脉,定前囟,开骨窗,除脑膜,暴露脑面,暴露坐骨神经。2.4大鼠右束旁核神经元放电检测(1)上架:手术完成后,将大鼠俯卧位头部固定在SN-2立体定位仪上,并把保护电极置于坐骨神经上,并连接刺激器;(2)制动:气管插管,连接呼吸机,腹腔注射0.1%氯化筒箭毒碱(1ml/kg)制动;(3)记录:在大鼠右束旁核中,用玻璃微电极探查神经元放电,同时每5秒用连续电脉冲(有五个单个电刺激组成,波间隔5ms,串长25ms)刺激坐骨神经,诱发神经元放电,同时观察记显示在示波器上的神经元放电;(4)放电神经元性质的鉴定;当出现神经元放电时,以有齿镊子夹尾,夹爪以及连续电脉冲(参数同上)刺激坐骨神经作为伤害性刺激;以触毛,移动关节作为非伤害性刺激。选择放电稳定的痛反应神经元记录;(5)数据处理:将各级所记录的神经元放电用GF-777双道录音机记录,磁带中的实验结果经Power-LabCart4.0医用数据处理软件进行转换成放电频率图处理和分析。2.5确定核团定位和疼痛反应器官的记录部位(1)领导人的定位按Pellegrio图谱,B坐标系定位。(2)梗死和疼痛反应的记录部分梗塞部位:右侧大脑中动脉支配区域(以右侧尾状核为代表);记录部位:梗寒邻近部位即缺血半影区(以右束旁核为代表)。2.6垂直穴右常规消毒,以28号1寸毫针两根,分别刺入百会(向右太阳穴方向),和太阳穴(右侧)。将G-6805型电麻仪正极接百会穴毫针,负极接太阳穴毫针,选择参数为1V,4HZ,通电时间为10min。2.7观测指标2.7.1疼痛和兴奋pen(1)潜伏期从电刺激伪迹到出现PEN放电之间的时间(单位:s)。(2)率平均值之差电刺激后放电频率平均值与刺激前2s放电频率平均值之差(单位:Hz)。潜伏期缩短,净增值增加,则PEN处于兴奋状态,对痛觉兴奋性增强,反之兴奋性减弱。2.7.2疼痛抑制开元pi(1)总限制时间电刺激引起PIN放电减少的时间(单位:s)。(2)单位平均之差,单位点hz;从刺激伪迹到放电开始减少前后2s放电频率的平均值之差(单位:Hz)。总抑制时程缩短,净增值增加,则PIN处于兴奋状态,对痛觉抑制性增强,反之抑制性减弱。2.8统计分析数据以均值±标准差表示,经t检验分析处理。3结果3.1梗塞前后26h内pahs-pe-5/5的比较经t检验,正常组在不同时间窗内与假手术组相比较,PEN放电潜伏期,净增值无显著性差异(P>0.05);病理组在梗塞后2～6h内PEN放电潜伏期和净增值与假手术组比较有显著性差异(P<0.01),其放电潜伏期延长,净增值减少,并随着时间的延长有加剧的趋势;针刺组与病理组比较有显著性差异(P<0.05),其放电潜伏期缩短,净增值增加。3.2梗塞前后26h内p经t检验,正常组在不同时间窗内与假手术组相比较,PIN放电抑制时程,净增值无显著性差异(P<0.05);病理组在梗塞后2～6h内PIN与假手术组比较有极显著性差异(P>0.01),其抑制时程延长,净增值减少,并随着时间的延长而有加剧的趋势;针刺组与病理组比较有显著性差异(P>0.05),其放电抑制时程缩短,净增值增加。4细胞放电观测本实验采用能够直接反映神经元功能状态的单个细胞放电作为观测对象。束旁核位于梗塞中心的临近部位,缺血损伤较轻,故能较好地观察神经细胞电活动抑制与兴奋相互转变的动态过程。4.1pan放电抑制试验从我们实验的结果可以看出,梗塞后,其梗塞邻近部位束旁核的痛反应神经元放电受到抑制,表现为:PEN放电潜伏期长,净增值减少;PIN放电抑制时程延长,净增值减少,并随着时间的延长而有加剧的趋势。分析,这主要与梗塞后局部脑组织神经元缺血缺氧有关,随着时间的推移,缺血程度逐渐加重,神经元的功能活动受到抑制,表现在痛反应神经元则PEN对痛觉的兴奋性减弱,4.2梗塞临部位束旁核痛反应神经元放电兴震机理我们在大鼠大脑中动脉栓线后2h给予头穴针刺(百会透太阳),通电10min,观察梗塞临近部位束旁核痛反应神经元的放电变化。从我们的实验结果发现:头穴针刺对梗塞临近部位束旁核痛反应神经元放电有兴奋作用,表现为:PEN放电潜伏期缩短,净增值增加;PIN放电抑制时程缩短,净增值增加。说明头穴针刺不仅能提高脑梗塞后PEN的兴奋性,而且能加强PIN的抑制性,使受到抑制的痛反应神经元的功能恢复。综上所述:头穴针刺能对抗梗塞对神经元功能的影响,改善脑梗塞急性期神经元缺血缺氧的状态,提高脑神经细胞的兴奋性,延缓神经细胞的死亡,对受损的神经细胞起了保护作用。4.3脑梗塞抗凝机理从