几种抗菌药对鸡滑液囊支原体gx11-株的敏感性

几种抗菌药对鸡滑液囊支原体gx11-株的敏感性

鸡和鸡的滑液囊腔（ms）是潜在的呼吸道病原体，会导致鸡和鸡的滑膜炎症和肌腱鞘炎，导致公鸡和鸡的滑膜炎症和肌腱鞘炎，以及产卵、蛋质量和孵化率的降低。生长缓慢，食物转化率降低。鸡滑液囊支原体病病程长,笼养鸡不易被发现,常给养鸡生产造成难于弥补的损失。我国鸡群滑液囊支原体阳性感染率为20.7%,普遍存在于全国各地。澳大利亚、南非和英国均从患呼吸道疾病的肉鸡中分离到MS。利用抗菌药物防治鸡滑液囊支原体病仍是目前国内外采取的主要方法,常用的药物有氟喹诺酮类、大环内酯类、林可胺类。恩诺沙星是动物专用的氟喹诺酮类抗菌药,是一种广谱、高效、低毒抗菌药,在预防和治疗畜禽支原体病方面取得较好效果,与其他适宜抗菌药联合应用更可降低成本、提高疗效、减少耐药性。本试验选取恩诺沙星、替米考星、泰乐菌素、吉他霉素、林可霉素、沃尼妙林、泰妙菌素、氯霉素及氟苯尼考,对鸡滑液囊支原体GX11-T株进行体外抑菌试验,确定药物的最小抑菌浓度(Minimalinhibitoryconcentration,MIC),并通过恩诺沙星与其他抗菌药的联合药敏试验,摸索其药物敏感性,为防治鸡滑液囊支原体病提供数据参考。1材料和方法1.1k0103-恩诺沙星对照品,含量99.9%,批号H0081206;替米考星对照品,含量93.7%,批号K0311109;泰乐菌素标准品,每毫克相当于泰乐菌素1026U,批号K0160911;吉他霉素标准品,每毫克相当于吉他霉素1611U,批号K0151010;林可霉素对照品,含量84.9%,批号K0101003;延胡索酸泰妙菌素对照品,含量99.7%,批号K0340808;氯霉素对照品:含量为99.5%,批号:K0350706;氟苯尼考对照品:含量为99.3%,批号:K0301004,以上药品均由中国兽医药品监察所提供。沃尼妙林,含量98.5%,批号100102,由浙江海正药业股份有限公司提供。分别称取各药并溶于适宜溶剂中,无菌操作配制成1280μg/mL,于4℃保存备用。1.2培养基改良Frey氏液体培养基,参照现行《中华人民共和国兽药典》(三部)规定方法配制。1.3畜禽药品监测鸡滑液支原体GX11-T(CVCC2960)株,由中国兽医药品监察所提供。取菌种,通过复壮并培养,使颜色变化单位(Colorchangeunit,CCU)达到108CCU/mL以上,于-20℃保存备用。1.4不同培养基的接种量采用试管二倍稀释法进行测定。每排取无菌带胶塞试管10支,将改良Frey氏液体培养基分装于各管中,每管0.5mL,取适宜浓度药液0.5mL加入第1管充分混合后,取0.5mL加入第2管,依此方法,进行稀释,至最后一管。取CCU达108CCU/mL的菌液,用改良Frey氏液体培养基稀释成10-4,于各管中加入0.5mL。同时试验设2组对照:培养物对照接种菌液,不加抗菌药;培养基对照不接种菌液,不加抗菌药。每组试验重复3次。所有试管置37℃培养,当培养物对照为橘黄色,对照培养基不发生颜色变化时,未发生颜色变化的最低药物浓度为该药物的MIC值。1.5联合药敏试验结果及判定标准参照戴自英等的棋盘法进行试验。根据已测得的MIC值,以两药MIC值的4倍、2倍、1倍、1/2倍、1/4倍分别联合。联合药敏的相互作用依据FIC指数进行判定。FIC=甲药联合时的MIC/甲药单用时的MIC+乙药联合时的MIC/乙药单用时的MIC。判定标准:FIC≤0.5为协同作用;0.5<FIC≤1为相加作用;1<FIC≤2为无关作用;FIC>2为拮抗作用。2鸡滑液产物的mic测定恩诺沙星、替米考星、泰乐菌素、吉他霉素、林可霉素、沃尼妙林、泰妙菌素、氯霉素、氟苯尼考对鸡滑液支原体GX11-T株的MIC测定结果见表1。恩诺沙星与其他抗菌药合用对鸡滑液囊支原体GX11-T株的联合药敏作用结果见表2、3。3讨论3.1鸡滑液囊受体病本研究测定的MIC结果表明,MSGX11-T株对恩诺沙星、替米考星、泰乐菌素、沃尼妙林、泰妙菌素均高度敏感,对吉他霉素、林可霉素中度敏感,对氯霉素、氟苯尼考低度敏感。国内外用抗生素测定鸡滑液囊支原体MIC的报道较少,仅查阅到泰乐菌素、替米考星、泰妙菌素对MSMIC测定的相关资料。本试验测定的MSGX11-T株对泰乐菌素MIC值为0.031μg/mL,Jordan等和Bouchardon等对MSWVU1853株测定的MIC值分别为0.025μg/mL、0.06μg/mL,三者测定的MIC值差异不大,说明不同鸡滑液囊支原体对泰乐菌素均高度敏感,而临床上也多次采用泰乐菌素预防和治疗鸡滑液囊支原体病,取得了较为理想的效果[9~11]。Jordan等等用替米考星测定MSWVU1853株的MIC值为0.0125μg/mL,本试验测定的MIC值为0.063μg/mL,两者存在一定差异。Bouchardon等用泰妙菌素测定MSWVU1853株的MIC值≤0.03μg/mL,本试验测定的MIC值为0.25μg/mL,两个数值差异较大,由此说明MS的不同菌株对替米考星、泰妙菌素敏感性均存在差异。关于MS对抗生素敏感性的研究,除了测定MIC值,还可采用药敏纸片法进行研究。宋战胜测定结果表明,MS对恩诺沙星、替米考星、泰妙菌素、泰乐菌素均敏感,这与本试验测定结果一致。临床上用来预防或治疗鸡滑液囊支原体病较多的抗生素是泰乐菌素、替米考星、恩诺沙星、泰妙菌素、林可霉素、土霉素、强力霉素。这也间接验证了本试验测定MIC数据的可靠性,对指导临床用药具有重要意义。3.2联合用药治疗由表3可知,恩诺沙星分别与替米考星、泰乐菌素、吉他霉素、林可霉素的联合抑菌试验FIC指数均为0.75,说明这4组抗菌药物联合应用对MS表现为相加作用。仅有王春华等曾联合应用恩诺沙星与替米考星治疗鸡毒支原体病,效果显著。虽然恩诺沙星联合其他3种药的药敏试验和临床应用均未见报道,但从试验结果分析,通常在应用其他抗生素产生耐药性的前提下,可以尝试用此联药方式治疗鸡滑液囊支原体病。联合用药,可使各单药的MIC值降低,大幅降低生产成本,有效防治支原体与其他病原菌的混合感染。恩诺沙星+沃尼妙林、恩诺沙星+泰妙菌素,FIC指数在1~2之间,表现为无关作用,临床上不建议联合使用。恩诺沙星+氟苯尼考FIC指数大于2,表现为拮抗作用,提示在临床上应避免同时使用,以免失去药效。3.3鸡滑液囊产物的敏感性和鸡毒产物的不一致鸡滑液囊支原体病分布于全世界,且近几年在我国有增多趋势,有些地区发病还相当严重。鸡滑液囊支原体对药物的敏感性和鸡毒支原体不完全一致,所以在使用抗菌药物防治时,建议先做药敏试验,选择对该病敏感的药物进行治疗。多数鸡群中常存在支原体与其他病原菌混合感染的情况,