石墨炉原子吸收光谱法测定血铅

石墨炉原子吸收光谱法测定血铅

近年来，中国血液中的铅含量超标现象频繁发生。铅含量可导致大多数器官和系统功能障碍，尤其是血液和神经系统。研究表明,血铅是当前最可行、最能灵敏反映铅对人体健康危害的指标。目前卫生部制定的检测方法主要有三种:WS/T20-1996血铅的石墨炉原子吸收光谱测定方法、WS/T21-1996血铅的微分电位溶出测定方法以及WS/T174-1999血中铅、镉的石墨炉原子吸收光谱测定方法。由于血液中95%的铅位于红细胞中,因此全血铅的含量可以反映职业接触者和儿童体内铅水平的高低。我们在参考文献的基础上,对血铅检测条件进行了优化,并测定了956例职业接触者和226例儿童血铅,测试结果满意。本文对使用原子吸收石墨炉法测定血铅的各项参数及样品处理进行了全面介绍。1材料和方法1.1原理取0.1ml全血,经稀释离心后取上清液直接注入石墨炉原子化器原子化,测量峰高,测定吸光度,通过标准曲线求得铅含量,计算血铅值。1.2试验仪器与设备SpectrAA220Z石墨炉原子吸收分光光度计(美国瓦里安),铅空心阴极灯(美国瓦里安),Zeeman偏振效应背景校正器(美国瓦里安),石墨管(美国瓦里安)100μl微量移液器,1000μl微量移液器,XW-80A漩涡混合器,LXJ-Ⅱ高速离心机,铅标准储备溶液(GSBG62071-90),冻干牛血铅标准物质(GBW09139、GBW09140、中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所提供)磷酸二氢铵(GR)、硝酸(MOS级)、双氧水(MOS级),1.5ml塑料离心管,实验用水达到一级水规格,试验所有器材均用10%硝酸溶液浸泡24h以上,再用纯水洗干净,晾干备用。1.3血样的采集和保存按照卫生部下发的《血铅临床检验技术规范》,采集0.5ml静脉血于预置抗凝剂(0.2%肝素钠溶液10μl)的真空采血管中,置4℃冰箱中保存。准确吸取100μl血样到预置10%HNO3溶液(500μl)的优质聚乙烯离心管(1.5ml)中(注意:不可将血液加在10%HNO3溶液中,只可停留在管内壁上),立即盖紧盖子,在漩涡混合器上震荡30s。开盖,再准确加入30%H2O2溶液400μl。盖好盖子后再在漩涡混合器上混匀30s,放置过夜。在临分析前用高速离心机(≥6000rpm)进行离心,取上清液测定。1.4样品和试剂制备波长283.3nm,狭缝0.5nm,灯电流5.0mA,Zeeman扣背景,石墨炉进样总体积20μl,其中样品体积10μl,基体改进剂体积8μl,保护气为高纯氩气。基体改进剂为1%磷酸氢二铵溶液。石墨炉升温程序见表1。1.5标准组和方法铅标准储备溶液为1.0mg/ml,用0.5%HNO3溶液逐步稀释配制成5、10、20、30、40、50μg/L的标准系列。在上述仪器工作条件下,测定吸光度,仪器自动绘制标准曲线。1.6样品测定将处理好的待测血样按制备标准曲线的条件测定,同时测定试剂空白和血铅标准样品。1.7根据该公式计算样品中的铅浓度C=c×Fcg，l血中铅的浓度。cg，l由标准曲线查得的稀释血样中铅的浓度。f稀释倍数,按本法操作时稀释倍数为11。2结果2.1标准曲线的测定按标准曲线制备所述要求进行测定,每个标准溶液测定两次,铅浓度在线性范围内,标准曲线良好,回归方程:A=0.0095,相关系数r=0.9998。由于每次开机后受环境、石墨管衰减和仪器性能等影响,每测定一批样品均需重新制备标准曲线,且相关系数r≥0.999。表2和图1是某次标准系列测定数据。2.2灰化温度和基体干扰的关系石墨炉原子吸收分析步骤有干燥、灰化、原子化和净化。其中灰化温度和时间的选择是石墨炉原子分析中最重要的分析步骤,灰化温度是保证被测元素不损失的最高温度,可在一定程度上消除或降低基体的干扰,其目的是保证被测组分在没有明显损失的前提下尽量破坏基体成份,以减少或消除基体干扰。2.2.1灰化温度对血样粒径、厚度的影响按照本文所述的仪器操作条件,其它操作条件不变,仅改变灰化温度,测定经处理后的血样(约40μg/L)在不同灰化温度时的吸光度,合适的最高灰化温度为500℃,结果见图2。2.2.2灰化时间对血样粒径的影响按照本文所述仪器操作条件,其它操作条件不变,仅改变灰化时间,测定经处理后的血样(约40μg/L)在不同灰化时间时的吸光度,合适的灰化时间为20s,结果见图3。2.2.3稳定性试验结果本次试验选用了硝酸镁、磷酸二氢铵、氯化钯基体改进剂进行研究,试验浓度为10000mg/L,进样量均为8μl,结果表明,磷酸二氢铵的效果最好,具有较高的灵敏度和稳定性。实验结果详见表3和表4。2.3方法的精度2.3.1标准物质回收试验用四份血样分别加入5.00、10.00、20.00μg/LPb高中低三个浓度的铅标准溶液进行测定,回收率见表4。2.3.2血液中的铅测试用本法对4个不同浓度的国家冻干牛血铅标准物质各进行3次测定,测定结果均与给定的参考值相符,检测结果见下表5。2.4方法的精度随机抽取6个血样,进行3次测定,RSD值均在允许范围内,所得结果见表6。2.5方法限制按照试验条件,进样量为20μl时,对试剂空白进行多次测定(n=20),其测定下限为5.0μg/L。3稀释法预处理在石墨炉原子吸