大豆浓缩磷脂变色检测方法的研究

大豆浓缩磷脂变色检测方法的研究

重要的显示之一是大豆的浓缩磷脂颜色。在以往的工作中,常以目视对比法进行比色分析,其缺点:标准样(参照物)因受自然条件的影响及存放时间、温度、玻璃试管壁厚、透光度等诸多因素和人们辨色能力的限制,往往出现失真率高,误差较大。利用磷脂加特纳色标与罗维朋色值之间存在一种颜色语言的相关性,以求得磷脂加特纳色标级别,实践证明罗维朋色值可以满足磷脂比色的要求。此文结合自己的实践经验,就以下磷脂比色过程(磷脂加特纳色标与罗维朋比色计色值之间对照、对比)和实验方法,介绍给大家供同行们参考。1原料组成产物纯净的大豆磷脂在室温下,本是白色的蜡状固体,而大豆浓缩磷脂是褐色的,其色泽来源:一是由一部分原料带入的,像胡萝卜素、叶绿素等;二是原料在加工及磷脂浓缩过程中生成的褐色物质;三是原料及产品磷脂在储存时与空气接触、或在阳光照射下,不稳定易氧化,酸值升高而引起色泽加深,或在储存过程中,由某些微生物的代谢产物产生的颜色和某些菌体带有的颜色。2大豆浓缩磷脂的制备机理大豆浓缩磷脂产品的溶解度大小、透明度高低,均对比色分析有着不同程度的影响。大豆浓缩磷脂中有一定量的蛋白质-碳水化合物和约50%不饱和脂肪酸以及低含量的水分、正己烷不溶物、磷脂酸、色素等。蛋白质-碳水化合物受热后,发生的褐色反应(美拉德反应)不仅可以导致大豆浓缩磷脂色泽、风味发生变化,而且变性的蛋白质由“溶胶性”变为“凝胶性”,促使正己烷不溶物含量增多,磷脂溶解度下降。另外,蛋白质-碳水化合物结构中有较强的极性基团(氨基、羟基和多羟基化合物)极易溶于水,不溶或难溶于有机溶剂(苯、乙醚类)。大豆浓缩磷脂中过多的水分和正己烷不溶物(磷脂胶和固体颗粒杂质)的存在,也是导致磷脂溶解度降低的主要原因。在比色时,会使比色溶液出现浑浊、透明度降低、有沉淀物等。而磷脂溶解度高低,在很大程度上取决于原料加工条件和磷脂加工精度。一般大豆浓缩磷脂水分控制在1.0%以下,超过这个指标时产品会发生浑浊,同时产品水分小于1.0%,水的活度较低,也降低了微生物在磷脂体系中生存的可能性。产品中的杂质应控制在小于0.3%。3材料和方法3.1加特纳色标,2.大豆浓缩磷脂(福建康宏公司提供),理化指标:水分0.8%,含油36.0%,丙酮不溶物62.50%,乙醚不溶物0.03%,色泽(加特纳色标)12,酸值25mgKOH/g,黏度11000。硫酸、重铬酸钾、苯均为分析纯。3.2限公司限公司WSC-2型罗维朋比色计(上海精密科学仪器有限公司);AL104型天平(0.1mg)(梅特勒-托利多集团),具塞比色管25mL,烧杯50mL,容量瓶100mL等。3.3测量3.3.1原理利用比色液中的物质颜色深浅与其浓度(含量)的关系,采用罗维朋比色计原理和方法,运用色值单位来表达磷脂的颜色。3.3.2罗维朋色槽+加特纳色标液法按表1中加特纳色标级别,分别称取重铬酸钾数克(精确0.0001g),置于100mL洁净干燥的容量瓶中,加少量浓硫酸,加塞摇动,使重铬酸钾颗粒完全溶解后,再加浓硫酸至刻度,摇匀。即得加特纳色标溶液,色标级别分别为7、8、9、10、11、12、13、14。将新配制的加特纳色标溶液,按其颜色的深浅,选用不同规格的罗维朋色槽(详见表1),分别置于比色槽中(小心轻拿、轻放),液面距上口约5mm高度,放入比色箱槽内,关闭活动盖,先固定黄色玻璃片(以黄定红),然后开灯,再依次配入不同色值的红色玻璃片,直至观察管视场中玻璃片和色标溶液的颜色完全相同为止。所测得不同加特纳色标下的黄、红玻璃片色值(罗维朋单位),即为加特纳色标下的罗维朋(单位)标准色值(见表1)。3.3.3被测样品的色值精确称取混匀试样5.0000g(精确0.0002g),于50mL烧杯中,用少量苯试剂溶解后(反复冲洗),无损失地移入100mL容量瓶中,再用苯试剂稀释至刻度,充分摇匀,按样品液色泽深浅、结合感观色泽,分别选定相应的比色槽,将样品液置于比色槽中,至上口5mm高度,放入比色箱槽内,关闭活动盖,进行色泽分析(先固定黄色玻璃片,参考附表中黄35或70),开启电源观察视场,左半部显示样品颜色,右半部显示标准玻片的颜色,根据需要依次配入不同色值的红色玻璃片,直到左右两部分的颜色完全一致,此时仪器槽板显示窗显示的数值,即为被测样品的色值(罗维朋)。4加特纳色标法大豆浓缩磷脂加特纳色标级别(7～14)分别进行罗维朋比色,色标与色值的对比、对照检测结果汇总于表1中。(1)从表1中可见,浓缩大豆磷脂加特纳色标与罗维朋色值之间,存在一种较明显的颜色相关性,因此可利用磷脂加特纳色标为基础,确定罗维朋色值指标。以试样与苯试剂混合液,进行罗维朋比色计色值的测定,所得色值再与表1中加特纳色标对照查找该样品加特纳色标级别。此方法,具有一定的实用性和互换性。(2)在测定过程中,当一种或两种玻璃片调到最接近样品颜色时,如果其颜色比样品颜色深,可利用调入样品光路中的中性片,来减弱样品亮度(其数值为样品亮度数据)。这里必须明确指出,当3种玻璃片(黄、红、兰)被用于比色时,中性灰片不能再使用了,只能调节红色示值的最小玻片的方法,来实现颜色的匹配。试验结果允许差0.2,以试验结果较高的色度值作为最终测定结果。(3)在检测过程中,罗维朋黄色为固定值、红色为检测值,当试样色阶介于二者之间,如高于8、低于9,则用色标8～9来表示。从表1中可以看出,加特纳色标7～9、10～14之间,使用比色槽大小规格不同,只因溶液的颜色及色值差别较大,难以用统一规格的比色槽规范起来。从目前各生产厂的状况,大豆浓缩磷脂,一般加特纳色标都在10～13范围内,不经脱色较难达到9以下。(4)在操作时,样品溶液温度,对结果有一定影响,一般在室温下操作,另外样品液不能在罗维朋比色计中(比色箱)放置过久,以防比色箱内温度过高,样品溶液中试剂挥发及样品的浓缩,会影响测定结果的精度,一般在几分种内完成操作。5复合光的特性