大窑湾虾夷扇贝麻痹性贝毒的含量与组分

大窑湾虾夷扇贝麻痹性贝毒的含量与组分

麻痹性骨关节炎（psp）是一种广泛分布于世界沿海水域的生物毒素。它是由藻类和细菌引起的，可能会导致人体麻痹和中毒。它是由氨基甲酸酯类(carbamatetoxins)、N-磺酰氨甲酰基类(n-sulfo-carbamoyltoxins)、脱氨甲酰基类(decarbamolytoxins)、脱氧脱氨甲酰基类(deoxydecarbamoyltoxins)4类毒素20余种化合物组成的生物大分子。由于产毒藻类、环境条件以及对毒素具有富集功能贝类等的差异,不同海域麻痹性贝毒含量及组分有着明显的差异。大窑湾位于大连市市区东南海域,受市政废水等影响,海域富营养化程度比较严重,赤潮时常发生,麻痹性贝毒一直缺乏研究。本文通过大窑湾海域虾夷扇贝体内麻痹性贝毒的周年调查,对于科学制定贝毒监测方案,以及适时收捕养殖贝类,保障公众健康,具有切实的指导意义。1普通法上的化合物在大连市大窑湾浮筏养殖区,2007～2008年每月采集虾夷扇贝,采用高效液相(agilent1200)—柱后衍生(Pickering)方法(highperformanceliquidchromatography,HPLC),检测麻痹性贝毒含量及组分。色谱条件:C毒素流动相:1mmol/L四丁基磷酸铵,氨水调pH值为5.8,过0.45μm滤膜,色谱柱:phenomenexC185μ250mm×4.6mm;GTX毒素流动相:4.3mmol/L庚烷磺酸钠与10mmol/L磷酸铵的混合液,磷酸调pH至7.1,过0.45μm滤膜;STX毒素流动相:2mmol/L庚烷磺酸钠与30mmol/L磷酸铵的混合液,磷酸调pH至7.1,过0.45μm滤膜:乙腈(20:1);GTX和STX毒素检测使用色谱柱:phenomenexC185μ250mm×4.6mm。所用麻痹性贝毒标准物质购置于加拿大海洋生物科学研究所,有C1,C2;GTX1,GTX2,GTX3,GTX4,GTX5,dcGTX2,dcGTX3,neo-STX,dcSTX,STX等12种。同时,还采用了小白鼠生物法(MouseBiologicalAssay,MBA),进行了麻痹性贝毒毒性的检测。2月份虾麻醉性贝毒含量采用高效液相色谱法检测大窑湾虾夷扇贝体内麻痹性贝毒结果表明,4～7月份,麻痹性贝毒含量较高,各组分含量也较高;尤其是4月份含量最高,各组分也最高;其它月份含量较低,各组分也较低(图1、图2)。1月份,虾夷扇贝体内麻痹性贝毒平均含量45.46μgSTXeq/100g,其中neoSTX毒素平均含量为32.75μgSTXeq/100g,C2毒素为11.59μgSTXeq/100g,C1毒素为1.13μgSTXeq/100g,其它9种组分均均未检出。2月份,麻痹性贝毒平均含量为68.21μgSTXeq/100g,其中neoSTX毒素平均含量为54.61μgSTXeq/100g,C2毒素为11.19μgSTXeq/100g,C1毒素为1.33μgSTXeq/100g,GTX5毒素为1.08μgSTXeq/100g,其它8种组分均未检出。3月份,麻痹性贝毒平均含量71.00μgSTXeq/100g,其中neoSTX毒素平均含量为39.60μgSTXeq/100g,C2毒素为11.81μgSTXeq/100g,C1毒素为1.51μgSTXeq/100g,其它9种组分均未检出。4月份,虾麻痹性贝毒平均含量为378.32μgSTXeq/100g,其中C2毒素平均含量为122.42μgSTXeq/100g,GTX1毒素为73.31μgSTXeq/100g,dcGTX2毒素为45.69μgSTXeq/100g,neoSTX毒素为27.19μgSTXeq/100g,GTX3毒素为25.93μgSTXeq/100g,GTX2毒素为24.44μgSTXeq/100g,dcGTX3毒素为20.45μgSTXeq/100g,C1毒素为16.61μgSTXeq/100g,STX毒素为16.21μgSTXeq/100g,GTX5毒素为6.07μgSTXeq/100g,GTX4和dcSTX未毒素检出。5月份,麻痹性贝毒平均含量为209.98μgSTXeq/100g,其中GTX毒素平均含量为66.28μgSTXeq/100g,neoSTX毒素为50.35μgSTXeq/100g,GTX2毒素为24.96μgSTXeq/100g,dcGTX2毒素为23.29μgSTXeq/100g,GTX3毒素为19.15μgSTXeq/100g,C2毒素为13.94μgSTXeq/100g,dcGTX3毒素为4.96μgSTXeq/100g,C1毒素为3.88μgSTXeq/100g,GTX5毒素为3.17μgSTXeq/100g,GTX4,dcSTX和STX毒素未检出。6月份,麻痹性贝毒平均含量90.85μgSTXeq/100g,其中neoSTX毒素平均含量为31.26μgSTXeq/100g,GTX1毒素为19.86μgSTXeq/100g,GTX2毒素为15.93μgSTXeq/100g,GTX3毒素为10.33μgSTXeq/100g,dcGTX2毒素为9.78μgSTXeq/100g,C2毒素为2.39μgSTXeq/100g,C1毒素为1.29μgSTXeq/100g,其它4种组分均未检出。7月份,麻痹性贝毒平均含量92.04μgSTXeq/100g,其中GTX1毒素平均含量为44.36μgSTXeq/100g,neoSTX毒素为23.02μgSTXeq/100g,GTX2毒素为11.26μgSTXeq/100g,GTX3毒素为7.98μgSTXeq/100g,dcGTX毒素为3.73μgSTXeq/100g,C2毒素为1.04μgSTXeq/100g,C1为0.66μgSTXeq/100g,其它5种组分均未检出。8月份,麻痹性贝毒平均含量44.82μgSTXeq/100g,其中neoSTX毒素平均含量为35.30μgSTXeq/100g,GTX2毒素为5.10μgSTXeq/100g,GTX3毒素为3.68μgSTXeq/100g,C2毒素为0.42μgSTXeq/100g,C1毒素为0.32μgSTXeq/100g,其它7种组分均未检出。9月份,麻痹性贝毒平均含量58.79μgSTXeq/100g,其中neoSTX毒素平均含量为32.44μgSTXeq/100g,dcGTX2毒素为10.86μgSTXeq/100g,GTX2毒素为5.30μgSTXeq/100g,dcGTX3毒素为4.27μgSTXeq/100g,GTX3毒素为4.15μgSTXeq/100g,C2毒素为1.25μgSTXeq/100g,C1毒素为0.51μgSTXeq/100g,其它5种组分均未检出。10月份,麻痹性贝毒平均含量58.16μgSTXeq/100g,其中neoSTX毒素平均含量为29.46μgSTXeq/100g,dcGTX2毒素为10.46μgSTXeq/100g,GTX2毒素为9.84μgSTXeq/100g,GTX3毒素为3.91μgSTXeq/100g,dcGTX3毒素为3.82μgSTXeq/100g,C1毒素为0.35μgSTXeq/100g,C2毒素为0.32μgSTXeq/100g,其它5种组分均未检出。11月份,麻痹性贝毒平均含量18.86μgSTXeq/100g,其中neoSTX毒素平均含量为18.66μgSTXeq/100g,C1毒素为0.20μgSTXeq/100g,其它10种组分均未检出。12月份,麻痹性贝毒平均含量21.29μgSTXeq/100g,其中neoSTX毒素平均含量为17.36μgSTXeq/100g,C2毒素为3.60μgSTXeq/100g,C1毒素为0.32μgSTXeq/100g,其它9种组分均未检出(图2)。2007年大窑湾虾夷扇贝体内麻痹性贝毒平均含量为126.45μgSTXeq/100g,2008年为66.51μgSTXeq/100g,2a平均含量为96.48μgSTXeq/100g。比较2007年和2008年高效液相检测结果可看出,麻痹性贝毒组分含量比例很相近,但GTX毒素同比上一年下降,而C毒素含量有所上升,STX毒素基本没有变化。虾夷扇贝麻痹性贝毒以GTX毒素为主,占45.74%;其次是STX毒素,35.33%;C毒素占18.94%。采用小鼠生物法(MBA)检测大窑湾虾夷扇贝麻痹性贝毒含量结果表明,4月份含量为1026.60Mu/100g,7月份含量为727.50Mu/100g,5月份含量为559.50Mu/100g,6月份含量为380.20Mu/100g,9月份含量为278.00Mu/100g,3月份含量为217.00Mu/100g,8月份含量为213.20Mu/100g,10月份含量为179.00Mu/100g,2月份含量为169.00Mu/100g;1月、11月和12月份均未检出(图1)。与高效液相色谱法监测结果基本一致,仍然是4～7月份虾夷扇贝体内麻痹性贝毒含量较高。3大窑湾虾夷小波藻细胞的诱导表达本文发现4～7月份大窑湾虾夷扇贝体内麻痹性贝毒组分和含量最高,11～12月份最低,有着明显的季节变化(图2)。为了比较准确地评估北黄海虾夷扇贝体内麻痹性贝毒的危害,建议在4～7月份进行麻痹行贝毒监测比较适宜;同时这一期间该海域虾夷扇贝不宜上市,以保障公众健康。2004年5月和2005年10月份在北黄海虾夷扇贝体内均检出GTX3、GTX2、C1、C2、neoSTX和STX等6种毒素组分,麻痹性贝毒总含量分别为54.6μgSTXeq/100g和52.0μgSTXeq/100g。而本文在2007年5月和10月份,大窑湾虾夷扇贝体内分别检出9种和7种组分(图2),麻痹性贝毒总含量分别为243.57μgSTXeq/100g和78.64μgSTXeq/100g(图1);2008年分别检出8种和3种组分(图2),含量分别为243.57μgSTXeq/100g和78.64μgSTXeq/100g。由此可见,2007～2008年比2004～2005年同月份,北黄海海域虾夷扇贝体内麻痹性贝毒组分显著增多,含量明显升高。产生麻痹性贝毒的微藻有亚历山大藻属(Alexandrium)、裸甲藻属(Gymnodinium)等。2006年10月至2007年9月,在大窑湾浮游植物种群中,在1～4月和6月,均有产生麻痹性贝毒的塔玛亚历山大藻Alexandriumtamarense出现,而这期间大窑湾虾夷扇贝体内麻痹性贝毒均能检出,且4月份为全年中最高(图1),在海域水温7.5～9℃时,特别适宜