DB2308T 184-2023 稻瘟病病菌单孢分离培养技术操作规范_第1页
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ICS65.020.20B05

DB23黑龙江省佳木斯市地方标准DB2308/T184—2023稻瘟病病菌单孢分离培养技术操作规范2023-12-11发布 2024-01-11实施佳木斯市市场监督管理局 发 布DB2308/T184—2023DB2308/T184—2023前 言本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由黑龙江省佳木斯市农业农村局提出并归口。本文件由黑龙江省佳木斯市市场监督管理局批准发布。本文件起草单位：黑龙江省农业科学院水稻研究所。本文件主要起草人：王桂玲、陆文静、韩笑、周雪松、宋成艳。本文件2023年首次发布。I稻瘟病病菌单孢分离培养技术操作规范范围本文件适用于黑龙江省佳木斯市稻瘟病菌单孢分离技术。规范性引用文件DB2308/T124-2022 稻瘟病菌生理小种鉴定技术规程。术语和定义稻瘟病由稻梨孢真菌引起的一种水稻病害，又称稻热病、火烧瘟、叩头瘟。病菌侵染叶片、茎秆、穗颈、小穗梗和谷粒。根据受害时期和侵染部位不同，可分别引起苗瘟、叶瘟、节瘟、穗颈瘟和谷粒瘟。单孢分离法由单个孢子繁殖来获得纯菌种的方法。仪器和用具常用仪器超净工作台洁净等级：100级@0.5um。平均风速：0.25m/s～0.6m/s。高压灭菌锅温度范围：0℃～135℃，灭菌时间范围：4min～120min，最高工作压力：0.22MPa～0.25MPa。恒温培养箱温度范围：0℃～50℃。温度波动：±1℃。光照度：0LX～7500LX。光学显微镜1DB2308/T184—2023目镜：10×；物镜：10×、40×。电子天平感量0.01g。常用用具分离技术分离方法悬挂震落法分离单孢菌株。培养基的配制酵母淀粉培养基（淀粉10g、酵母粉2g、琼脂粉20g、蒸馏水1000mL）、琼脂培养基（琼脂粉15g～20g、蒸馏水1000mL），在121℃湿热灭菌20min。培养基去杂质1000mL的培养基，40℃～505min1层～2层纱布，将大块蛋白滤除，再用7层纱布过滤，所得滤液即可装瓶灭菌备用。）病菌标样消毒取新采集的1cm长的发病组织（节瘟或穗颈瘟）用75%酒精消毒（30s左右），然后用无菌水冲洗。病菌标样培养12（浸湿吸水纸即可毒过的发病标样放在吸水纸上盖好后，放在26℃光照培养箱中培养1d～2d，标样表面就会产生深灰色霉层（即孢子）。孢子震落按照DB2308/T 124-2022执行。单孢镜检镜检时将培养皿反转放在显微镜的载物台上，在10×10倍的显微镜下查找稻瘟病菌孢子，同时2DB2308/T184—2023再用蘸水钢笔在单孢处轻轻点一墨水小圆点，在无菌条件下将所画圆圈内的单孢挑入酵母淀粉培养基上。单孢提纯3d～5d，观察

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