宁波沿海森林伞滑刃属线虫种类调查

宁波沿海森林伞滑刃属线虫种类调查

新余市是浙江省宁波市的一个综合性国家。森林覆盖率为44.6%，其中针叶林占树木总积累量的87.9%。伞滑刃属线虫中松材线虫(Bursaphelenchusxylophilus)是林业病害——松树萎蔫病的病原物,致病力强,传播速度快,发生后治理难度非常大。为了明确余姚市针叶林中伞滑刃属线虫种类及分布情况,为松材线虫及潜在的其他线虫危害防治提供理论依据,2008年以来,笔者对余姚市所辖各街道、乡镇的松木中伞滑刃属线虫种类进行了调查,发现并鉴定了8种伞滑刃属线虫,其中程氏伞滑刃仅在台湾的木质包装中报道。1材料和方法1.1样本来源主要采自余姚市所辖各街道、乡镇的针叶林区,包括原木树干和少量树枝,共计218份。1.2线虫分离液的制备采用改良漏斗法分离线虫。将采来的木样劈成小片置于漏斗中,加入适量水,在20～25℃下放置24h,用表面皿接取5～10ml线虫分离液,镜检。1.3关于线条形态的观察1.3.1临时玻璃设在载玻片上滴一滴水,解剖镜下用挑针将数条线虫挑取至水滴中,在酒精灯火焰上来回移动几次,至线虫恰好被杀死后,加盖玻片。1.3.2b型线虫的形态观察和照片拍摄临时玻片制好后,即可用于形态观察摄影。用LeicaBX51显微镜和数码相机对线虫的整体形态和内部特征进行观察、摄影,主要包括线虫整体、头部、雌虫阴门、尾部、雄虫交合刺和交合伞等。用DeMan公式进行形态特征测计。1.3.3加固玻片用挑针挑取雄虫至载玻片上的水滴中,水量要少,加盖盖玻片。在显微镜低倍镜下用手轻轻推动盖玻片,使雄虫的尾部扭动,直至露出交合伞。2结果与分析2.1两种伞滑实践主要线虫混生情况采自余姚市辖属的各街道、乡镇的松木218份样品中,初步鉴定了含松材线虫在内的8种伞滑刃属线虫,包括松材线虫、莱奴尔夫伞滑刃线虫(B.rainulfi)、拟松材线虫(B.mucronatus)、林伞滑刃线虫(B.lini)、湖南伞滑刃线虫(B.hunanensis)、泰国伞滑刃线虫(B.thailandae)、中华伞滑刃线虫(B.sinensis)和程氏伞滑刃线虫(B.chengi)。调查中发现大多数样品都为2种或2种以上线虫混生,一些样品甚至是2种或2种以上伞滑刃属线虫混生。发现频率分别为松材线虫192次,莱奴尔夫伞滑刃线虫83次,拟松材线虫51次,林伞滑刃线虫40次,湖南伞滑刃线虫30次,泰国伞滑刃线虫5次,中华伞滑刃线虫3次,程氏伞滑刃线虫2次。2.2类型形态的识别特征2.2.1门盖尾状松材线虫主要鉴定特征:雌虫具有较长的阴门盖,尾近圆筒形,末端宽圆或指状,一般无尾尖突;雄虫交合刺大,显著弯成弓状,喙突锐尖,交合刺远端膨大成盘状。2.2.2松材线虫的形态拟松材线虫与松材线虫的区别主要在雌虫尾部,拟松材线虫尾圆锥形,尾尖突长,大于3μm。松材线虫雌虫尾端钝圆,无尾尖突,或少数个体具有尾尖突,但不超过3μm。依据形态和基因序列等差异,拟松材线虫还进一步分为东亚型和欧洲型2种,东亚型雌虫尾端渐尖,而欧洲型雌虫尾端则较钝,具有尾尖突。调查发现的拟松材线虫全部为东亚型。2.2.3阴浚门盖结构雌虫虫体细长,热杀死后略向腹面弯曲;侧区有2条侧线;缢缩明显,口针长约12μm,基部略膨大,没有基部球;阴门前唇向后延伸,形成小阴门盖;尾长圆锥形,明显向腹面弯曲,末端钝圆。雄虫虫体前部与雌虫相似,热杀死后虫体尾部弯成钩状;交合刺成对,背面拱形,腹面平直,长约3μm的喙突位于交合刺的中部;基顶突高,端部略向腹面弯曲;远端盘状突不显著;尾强烈向腹面弯曲,爪状,交合伞小,形态卵圆形、铲形等多变。2.2.4雄虫热阴门药物泰国伞滑刃线虫鉴定特征比较明显,雌虫热杀死后虫体几乎伸直,唇区高,缢缩,阴门无阴门盖,阴唇明显突出,尾部呈细长圆锥形,尾端尖。雄虫热杀死后尾部弯向腹面,呈“J”形,交合刺较小,喙突钝圆,远端没有盘状突;尾爪状,交合伞很小,有时几乎不可见。2.2.5阴门阴门雌虫热杀死后向腹面弯曲,体表有细环纹;侧区有3条侧线;唇区稍缢缩;口针长约20μm,锥部与秆部分界不明显,口针基部不膨大;中食道球长卵圆形至近方形;阴门明显骨化,略向后延长,但不形成阴门盖;直肠和肛门几乎不可见;尾圆锥形,细长,向腹面弯曲,末端钝圆。雄虫前部与雌虫相似,热杀死后尾部强烈弯向腹面,交合刺成对,较直,仅远端略向腹面弯曲,基顶突较高,喙突位于交合刺中部,交合刺远端圆,不具盘状突,但末端略向背面弯曲呈钩状;尾乳突两对,1对位于肛门前,另1对位于交合伞起始处。2.2.6成虫的前壁和腹结构雌虫热杀死后略向腹面弯曲;唇区高,缢缩明显;口针长约20μm,锥部约占杆部的1/2,基部不膨大,没有基部球;中食道球长卵圆形,瓣膜清晰;阴门无阴门盖;尾圆锥形,约为肛门处体宽的3倍,向腹面弯曲,末端钝圆。雄虫体前部与雌虫相似,热杀死后虫体尾部弯成钩状;交合刺成对,喙突显著,末端钝圆,交合刺远端钝,没有盘状突;基顶半圆形;尾向腹面弯曲,尾端钝圆,交合伞形态多变,卵圆形或平截形。2.2.7阴门阴门雌虫虫体细长,热杀死后略向腹面弯曲;唇区高,缢缩显著;口针细弱,长约14～15μm,无基部球,但基部略增厚;食道前体部圆柱形,中食道球发达,近圆形;阴门位于体后部,具小而明显的阴门盖;肛门和直肠明显;尾圆锥形,尾端略向腹面弯曲,末端钝圆或尖,有时末端有不规则的尾尖突。雄虫体前部与雌虫近似,热杀死后身体末端强烈向腹面弯曲;交合刺成对,强壮,末端约1/3处强烈向腹面弯曲。基顶高圆,喙突指状,末端钝圆,交合刺末端有盘状突。交合伞平截或锐尖,有时呈不规则形。尾乳突9个,肛前1个加1对、肛后1对很明显,但位于交合伞起始处的2对很小,不清晰。2.2.8阴浚经皮结构雌虫虫体较短,略向腹面弯曲,侧区有2条侧线;唇区高,缢缩明显,口针锥部长度接近口针长的l/3,基部略膨大,无基部球;中食道球近圆形或卵圆形,瓣膜清晰;阴门前唇向后延伸,形成小阴门盖;子宫与后阴子宫囊连接处(近阴道处)可见3个细胞形成的特殊结构;尾圆锥形,几乎直或略向腹面弯曲,末端钝圆或尖,有时有小尾尖突。雄虫体前部与雌虫相似,热杀死后虫体尾部弯成“J”形;交合刺成对,其腹面有明显的膜状结构,基顶几乎呈方形,喙突不明显;交合刺背面拱形,远端明显向腹面弯曲,盘状突不明显;尾明显向腹面弯曲,末端钝尖,交合伞小,形态多变。尾乳突7个,泄殖腔前1个加1对,近尾部1对,近交合伞起始处1对。3拟松材线虫、莱奴尔夫伞线虫发现频率调查结果表明,几乎所有的松木样本中都携带有2种或2种以上的线虫种类,包括滑刃属线虫、长尾科线虫、外滑刃属线虫、垫刃目线虫以及一些腐生类线虫等,由于研究只针对伞滑刃属线虫,其他种类不作统计。在所调查样品中,松材线虫是优势种群,其次为莱奴尔夫伞滑刃线虫,大于拟松材线虫的发现频率。调查中还发现松材线虫与拟松材线虫混生,松材线虫与莱奴尔夫伞滑刃线虫、湖南伞滑刃线虫等其他伞滑刃属线虫混生,或拟松材线虫与其他伞滑刃属线虫的混生的现象,对于其中的相互作用机理,各种线虫之间有何影响,则有待于进一