主题(一)　动物细胞培养与单克隆抗体制备

专题二十五

动物细胞工程主题(一)动物细胞培养与单克隆抗体制备[概念理解·微点判断]1.判断下列对动物细胞培养条件与过程叙述的正误(1)动物细胞培养和植物组织培养所用培养基中的成分不同。

()(2)动物细胞培养和植物组织培养过程中都要用到胰蛋白酶。

()(3)动物细胞培养应在含5%CO2的培养箱中进行，CO2的作用是刺激细胞呼吸。

()√××(4)通过动物细胞培养获得细胞株或细胞系，表明了动物体细胞具有全能性。

()(5)细胞株一般没有恒定的染色体组型，遗传物质发生了改变。

()(6)细胞系在连续传代过程中遗传性状始终保持均一。

()×××2.判断下列对单克隆抗体的制备叙述的正误(1)杂交瘤细胞的特点：既能无限繁殖，又能产生专一的抗体。

()(2)动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理相同，诱导融合的方法也完全相同。

()(3)骨髓瘤细胞经免疫处理，可直接获得单克隆抗体。

()(4)人—鼠杂交细胞通常会丢失人的染色体，因此可以进行鼠类的基因定位。

()√×××(5)诱导B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后，发生融合的细胞均为杂交瘤细胞。

()(6)单克隆抗体制备过程中，在完成细胞融合后，第一次筛选的目的是筛选出针对目标抗原的抗体为阳性的杂交瘤细胞。

()××3.判断有关动物细胞核移植与动物克隆叙述的正误(1)胚胎干细胞核移植难度明显高于体细胞核移植。

()(2)核移植形成的重组卵细胞在初次分裂时核基因不转录。

()(3)核移植时，提供细胞核和去核卵母细胞的动物都应为雌性。()(4)多莉羊克隆的成功证明了高度分化的细胞经过一定处理可以表现出动物细胞具有全能性。

()(5)进行核移植前，核供体细胞一般需要进行营养限制性培养，其原因是促使细胞增殖，抑制细胞分化。

()√××××[要点整合·强化认知]1.动物细胞培养的条件与过程(1)动物细胞培养的条件(2)动物细胞培养的过程

2.单克隆抗体的制备流程(1)杂交瘤细胞的特点是__________________________________，单克隆抗体的优点是_________________________________________________________。(2)第一次筛选：利用特定的___________筛选，获得__________；第二次筛选：进行克隆化培养和抗体检测，获得产生特定抗体的杂交瘤细胞。(3)体内培养：从小鼠腹水中提取单克隆抗体；体外培养：从细胞培养液中提取单克隆抗体。既能产生特异性抗体，又能无限增殖纯度高，可大量制备，在应用时具有特异性强、灵敏度高的特点选择培养基杂交瘤细胞3.克隆动物的培育过程分析

(1)①～③过程的名称为①______________；②将供体细胞核注入去核卵母细胞、通过___________使细胞融合；③激活重构胚并进行__________。(2)体细胞核移植技术的原理是________________________。(3)D新个体的性别与___相同,D新个体的绝大多数性状与___相同。(显微操作)去核电脉冲融合胚胎移植动物体细胞核具有全能性BB[科学思维·规范表达]1.在无菌、无毒等适宜环境中进行动物A成纤维细胞的原代和传代培养时，需要定期更换培养液，目的是___________________________________________________。2.在进行细胞培养时，除营养、温度、pH、渗透压、气体环境等要符合条件外，培养液中还应添加一定量的抗生素，其目的是__________________________________________。清除代谢产物，防止细胞代谢产生的有毒物质危害细胞抑制细菌和真菌的生长，从而预防污染有利于3.要想获得大量的单一抗体，不能通过直接培养B淋巴细胞来实现，原因是__________________________________________。4.单克隆抗体与抗癌药物结合制成“生物导弹”，可明显减少用药量，原因是__________________________________________________________________________________________________。5.研究发现，选择卵母细胞作为核受体的成功率要远远高于其他细胞，分析其原因是__________________________________________________________________________________________________________________________________。在体外培养条件下，B淋巴细胞不能无限增殖

利用癌细胞抗原制备的抗体可以特异性结合癌细胞，具有导向功能，可以携带抗癌药物准确地作用于癌细胞

卵母细胞体积大，易于操作，可为重组细胞早期发育提供较充足的营养；卵母细胞的细胞质中存在激发动物体细胞的细胞核全能性表达的物质考法(一)动物细胞培养的操作

1.(2023·宁波期中)如图所示为动物细胞培养过程中细胞增殖情况，下列有关说法正确的是

(

)A.OA段包含了原代培养过程，AB段可能发生了接触抑制现象B.BC段的培养为传代培养，C点细胞发生了癌变C.在细胞的传代培养过程中，细胞的基因型一定不会发生改变D.为了得到既能无限增殖又能产生特定抗体的杂交瘤细胞，最好选取图中CD段的细胞与B淋巴细胞融合答案：A

解析：原代培养指细胞离开有机体后的首次培养，因此图中OA段包含了原代培养过程，AB段可能发生了接触抑制现象，细胞增殖几乎停止，A正确；BC段的培养为传代培养，CD段细胞增殖代数几乎不再上升，没有癌细胞无限增殖的特点，不能说明C点细胞发生了癌变，B错误；在细胞培养过程中，细胞进行的是有丝分裂，所以培养出来的多数细胞基因型相同，有少数细胞可能在培养过程中发生遗传物质改变，因此基因型可能会改变，C错误；CD段细胞增殖缓慢，以至于完全停止，为了得到既能无限增殖又能产生特定抗体的杂交瘤细胞，最好选取图中D点后的细胞与B淋巴细胞融合，D错误。2.动物细胞培养是动物细胞工程的基础，动物细胞培养的基本过程如图甲所示。细胞系(原代培养物经首次传代成功后所繁殖的细胞群体)的形成过程如图乙所示。下列叙述正确的是

(

)A.a中培养的一般是幼龄动物的器官或组织，原因是其细胞分化程度低B.在细胞系的形成过程中，传代期细胞传代培养一次，细胞增加一倍C.原代培养前需将组织用胰蛋白酶等处理，制成细胞悬液D.为保证无菌、无毒的环境，c、d培养过程必须采用封闭式培养答案：C

解析：a中培养的一般是幼龄动物的器官或组织，原因是其细胞分裂能力强，A错误；分析图乙可知，传代期细胞传代培养一次，细胞数并没有成倍数增加，B错误；原代培养前需将组织分散成单个细胞，此时需要用胰蛋白酶等处理，制成细胞悬液，C正确；c、d培养过程需要在二氧化碳培养箱中进行，提供一定的气体环境，不能封闭式培养，D错误。动物细胞培养过程中的两个注意点(1)并不是所有的动物细胞在培养过程中都表现出接触抑制的特点，恶性细胞系在培养过程中失去了接触抑制的特点，具有异体致瘤性。(2)动物细胞培养过程中需要进行传代，主要原因是原培养瓶中发生接触抑制或培养空间的限制及营养物质的消耗枯竭，细胞的生长逐渐减慢，甚至停止并死亡。|深|化|提|能|考法(二)单克隆抗体制备与应用3.(2023·丽水、湖州、衢州三地质检)某研究小组欲制备单克隆抗体A，进行了如下实验：抗原A刺激小鼠后分离B淋巴细胞，诱导B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选获得杂交瘤细胞后进行体外培养，获得单克隆抗体A。下列叙述正确的是

(

)A.从免疫小鼠的肝脏中分离得到B淋巴细胞B.可用仙台病毒或70%的乙醇诱导细胞融合C.杂交瘤细胞的克隆培养不能在动物体内进行D.筛选得到的杂交瘤细胞在传代培养中可能发生染色体丢失现象答案：D

解析：制备单克隆抗体所用的B淋巴细胞是从免疫小鼠的脾脏中分离得到的，A错误；可用仙台病毒或聚乙二醇等诱导细胞融合，不能用70%的乙醇诱导，B错误；杂交瘤细胞的克隆培养可在动物体内或体外进行，C错误；杂交瘤细胞是不同细胞融合获得的，筛选得到的杂交瘤细胞在传代培养中可能会发生染色体丢失现象，D正确。4.(2023·杭州二中等四校期中联考)在治疗性抗体药物研发过程中，需要表达M蛋白胞外段，制备相应的单克隆抗体，增加其对M蛋白胞外段特异性结合的能力，具体制备流程如图。下列相关叙述错误的是

(

)A.图中细胞融合时，细胞膜会发生一定程度的损伤B.图中筛选2所利用的方法是克隆化培养，筛选后可获得单克隆杂交瘤细胞株C.利用M蛋白胞外段抗体与药物结合，形成抗体—药物偶联物，可实现特异性治疗D.图中获得的单克隆杂交瘤细胞株是具有特殊性质的细胞系答案：B

解析：图中细胞融合时，常采用电融合、PEG、灭活病毒诱导等方法，会对细胞膜造成一定程度的损伤，A正确；筛选2为克隆化培养和专一抗体检测，可获得产生专一抗体的杂交瘤细胞株，B错误；利用M蛋白胞外段抗体与药物结合，利用单克隆抗体的特异性强、灵敏度高的特点制成的抗体—药物偶联物，可实现特异性治疗，C正确；图中所获得的单克隆杂交瘤细胞株可无限增殖，因此是具有特殊性质的细胞系，D正确。|深|化|提|能|1.单克隆抗体制备中的两次筛选目的及两种获取抗体的方法(1)两次筛选的目的：第一次筛选的目的是获得杂交瘤细胞，第二次筛选的目的是获得能产生特定抗体的杂交瘤细胞。(2)两种获取抗体方法：若在培养基中进行杂交瘤细胞培养，则从培养液中提取；若在小鼠或其他动物腹腔中培养，则从腹水中提取。2.单克隆抗体与常规抗体比较项目制备原理分泌细胞特点产量单克隆抗体免疫原理、细胞融合技术及动物细胞培养技术杂交瘤细胞特异性强、灵敏度高产量高，易纯化分离常规抗体免疫原理效应B细胞(浆细胞)特异性差、灵敏度低产量低，分离困难考法(三)核移植与动物克隆5.(2023·杭嘉湖金四县月考)中国科学家利用体细胞核移植技术成功实现了对非人灵长类动物进行克隆，获得两只克隆猴——“中中”和“华华”。培育过程如图所示。下列叙述错误的是

(

)A.“中中”和“华华”的培育涉及核移植和胚胎体外培养B.①过程需借助精密的显微操作仪和高效率的细胞融合法C.③过程应包含了动物胚胎体外培养、胚胎移植等多个过程D.与鼠相比，克隆猴更适合作为人类疾病治疗和药物实验的模型动物答案：C

解析：“中中”和“华华”的培育涉及核移植、胚胎体外培养和胚胎移植等，A正确；①过程将纤维细胞注射到去核卵母细胞中，需要借助精密的显微操作仪和高效率的细胞融合法，B正确；②过程为动物胚胎体外培养，③过程应包含了胚胎质量检查、胚胎移植等多个过程，C错误；与鼠相比，猴与人在进化上亲缘关系较近，克隆猴更适合作为人类疾病治疗和药物实验的模型动物，D正确。6.(2023·镇海中学期末)如图表示利用某些现代生物技术培育猴