公卫执业医师-实践技能-操作技能-4.样品采集

公卫执业医师-实践技能-操作技能-4.样品采集[问答题]1.食品样品采样数量和方法正确答案：详见解析参考解析：（一）采样的数量食品分析检验结果的准确与否通常取决（江南博哥）于两个方面：①采样的方法是否正确；②采样的数量是否得当。因此，从整批食品中采取样品时，通常按一定的比例进行。确定采样的数量，应考虑分析项目的要求、分析方法的要求和被分析物的均匀程度三个因素。一般平均样品的数量不少于全部检验项目的四倍；检验样品、复验样品和保留样品一般每份数量不少于0.5kg。检验掺伪的样品，与一般成分分析的样品不同，分析项目事先不明确，属于捕捉性分析，因此，相对来讲，取样数量要多一些。鉴于采样的数量和规则各有不同，一般可按下述方法进行。1.液体、半流体食品：如植物油、鲜乳、酒或其他饮料，如用大桶或大罐盛装者，应先行充分混匀后采样。样品应分别盛放在3个干净的容器中，盛放样品的容器不得含有待测物质及干扰物质。2.粮食及固体食品：应自每批食品的上、中、下三层中的不同部位分别采取部分样品混合后按四分法对角取样，再进行几次混合，最后取有代表性样品。3.肉类、水产等食品：应按分析项目要求分别采取不同部位的样品或混合后采样。4.罐头、瓶装食品或其他小包装食品：应根据批号随机取样。同一批号取样件数：250g以上的包装不得少于6个，250g以下的包装不得少于10个。掺伪食品和食物中毒的样品采集，要具有典型性。由于食品数量较大，而且目前的检测方法大多数具有破坏作用，故不能对全部食品进行校验，必须从整批食品中采取一定比例的样品进行校验。从大量的分析对象中抽取具有代表性的一部分样品作为分析化验样品，这项工作即称为样品的收集或采样。食品的种类繁多，成分复杂。同一种类的食品，其成分及其含量也会因品种、产地、成熟期、加工或保藏条件不同而存在相当大的差异；同一分析对象的不同部位，其成分和含量也可能有较大差异。从大量的、组成成分不均匀的被检物质中采集能代表全部被检物质的分析样品（平均样品），必须采用正确的采样方法。如果采取的样品不足以代表全部物料的组成成分，即使以后的样品处理、检测等一系列环节非常精密、准确，其检测的结果亦毫无价值，甚至导出错误的结论。可见，采样是食品分析工作非常重要的环节。（二）采样原则正确采样，必须遵循以下两个原则：第一，采集的样品要均匀一致、有代表性，能够反映被分析食品的整体组成、质量和卫生状况；第二，在采样过程中，要设法保持原有的理化指标，防止成分逸散或带入杂质。（三）采样步骤样品通常可分为检样、原始样品和平均样品。采集样品的步骤一般分5步，依次如下：1.获得检样：由分析的整批物料的各个部分采集的少量物料成为检样。2.形成原始样品：许多份检样综合在一起称为原始样品。如果采得的检样互不一致，则不能把它们放在一起作成一份原始样品，而只能把质量相同的检样混在一起，作成若干份原始样品。3.得到平均样品：原始样品经过技术处理后，再抽取其中一部分供分析检验用的样品称为平均样品。4.平均样品三份：将平均样品平分为三份，分别作为检验样品（供分析检测使用）、复验样品（供复验使用）和保留样品（供备查或仲裁）。5.填写采样记录：采样记录要求详细填写采样的单位、地址、日期、样品的批号、采样的条件、采样时的包装情况、采样的数量、要求检验的项目以及采样人等资料。（四）采样的一般方法采样通常有两种方法：随机抽样和代表性取样。随机抽样是按照随机的原则，从分析的整批物料中抽取出一部分样品。随机抽样时，要求使整批物料的各个部分都有被抽到的机会。代表性取样则是用系统抽样法进行采样，即已经掌握了样品随空间（位置）和时间变化的规律，按照这个规律采取样品，从而使采集到的样品能代表其相应部分的组成和质量，如对整批物料进行分层取样、在生产过程的各个环节取样、定期从货架上采取陈列不同时间的食品的取样等。两种方法各有利弊。随机抽样可以避免人为的倾向性，但是，在有些情况下，如难以混匀的食品（如黏稠液体、蔬菜等）的采样，仅仅使用随机抽样法是不行的，不如结合代表性取样，从有代表性的各个部分分别取样。因此，采样通常采用随机抽样与代表性取样相结合的方式。具体的取样方法，因分析对象性质的不同而异。1.均匀固体物料（如粮食、粉状食品）(1)有完整包装（袋、桶、箱等）的物料：可先按(总件数/2)1/2确定采样件数，然后从样品堆放的不同部位，按采样件数确定具体采样袋（桶、箱），再用双套回转取样管插入包装容器中采样，回转180°取出样品；再用四分法将原始样品做成平均样品，即将原始样品充分混合均匀后堆集在清洁的玻璃板上，压平成厚度在3cm以下的形状，并画对角线或十字线，将样品分成4份，取对角线的2份混合，再按上述方法加上分为4份，取对角线的2份。这样操作直至取得所需数量为止，此即是平均样品。(2)无包装的散堆样品：先划分若干等体积层，然后在每层的四角和中心点用双套回转取样器各采取少量检样，再按上述方法处理，得到平均样品。2.较稠的半固体物料：如稀奶油、动物油脂、果酱等，这类物料不易充分混匀，可先按(总件数/2)1/2确定采样件（桶、罐）数，打开包装，用采样器从各桶（罐）中分上、中、下三层分别取出检样，然后将检样混合均匀，再按上述方法分别缩减，得到所需数量的平均样品。3.液体物料（如植物油、鲜乳等）(1)包装体积不太大的物料：可先按（总件数/2）1/2确定采样件数。开启包装，用混合器充分混合（如果容器内被检物不多，可用由一个容器转移到另一个容器的方法混合）。然后用长形管或特制采样器从每个包装中采取一定量的检样；将检样综合到一起后，充分混合均匀形成原始样品；再用上述方法分取缩减得到所需数量的平均样品。(2)大桶装的或散（池）装的物料：这类物料不易混合均匀，可用虹吸法分层（大池的还应分四角及中心五点）取样，每层500ml左右，得到多份检样；将检样充分混合均匀即得原始样品；然后，分取缩减得到所需数量的平均样品。4.组成不均匀的固体食品（如肉、鱼、果品、蔬菜等）：这类食品各部位组成极不均匀，个体大小及成熟程度差异很大，取样更应注意代表性，可按下述方法采样。(1)肉类：根据分析目的和要求不同而定。有时从不同部位取得检样，混合后形成原始样品，再分取缩减得到所需数量的代表该只动物的平均样品；有时从一只或很多只动物的同一部位采取检样，混合后形成原始样品，再分取缩减得到所需数量的代表该动物某一部位情况的平均样品。(2)水产品：小鱼、小虾可随机采取多个检样，切碎、混匀后形成原始样品，再分取缩减得到所需数量的平均样品；对个体较大的鱼，可从若干个体上切割少量可食部分得到检样，切碎、混匀后形成原始样品，再分取缩减得到所需数量的平均样品。(3)果蔬：体积较小的（如山楂、葡萄等），可随机采取若干个整体作为检样，切碎、混匀形成原始样品，再分取缩减得到所需数量的平均样品；体积较大的（如西瓜、苹果、菠萝等），可按成熟度及个体大小的组成比例，选取若干个个体作为检样，对每个个体按生长轴纵剖分4份或8份，取对角线2份，切碎、混匀得到原始样品，再分取缩减得到所需数量的平均样品；体积蓬松的叶菜类（如菠菜、小白菜等），由多个包装（一筐、一捆）分别抽取一定数量的检样，混合后捣碎、混匀形成原始样品，再分取缩减得到所需数量的平均样品。5.小包装食品（罐头、袋或听装奶粉、瓶装饮料等）：这类食品一般按班次或批号连同包装一起采样。如果小包装外还有大包装（如纸箱），可在堆放的不同部位抽取一定量（总件数/2）1/2大包装，打开包装，从每箱中抽取小包装（瓶、袋等）作为检样；将检样混合均匀形成原始样品，再分取缩减得到所需数量的平均样品。（五）采样的注意事项1.一切采样工具（如采样器、容器、包装纸等）都应清洁、干燥、无异味，不应将任何杂质带入样品中。例如，作3,4-苯并芘测定的样品不可用石蜡封瓶口或用蜡纸包，因为有的石蜡含有3,4-苯并芘；检测微量和超微量元素时，要对容器进行预处理；作锌测定的样品不能用含锌的橡皮膏封口；作汞测定的样品不能使用橡皮塞；供微生物检验用的样品，应严格遵守无菌操作规程。2.设法保持样品原有微生物状况和理化指标，在进行检测之前样品不得被污染，不得发生变化。例如，做黄曲霉毒素B1测定的样品，要避免阳光、紫外灯照射，以免黄曲霉毒素B1发生分解。3.感官性质极不相同的样品，切不可混在一起，应另行包装，并注明其性质。4.样品采集完后，应在4小时之内迅速送往检测室进行分析检测，以免发生变化。5.盛装样品的器具上要贴牢标签，注明样品名称、采样地点、采样日期、样品批号、采样方法、采样数量、分析项目及采样人。（六）采样实例1.罐头(1)按生产班次取样，取样量为1/3000，尾数超过1000罐者，增取1罐，但每班每个品种取样量基数不得少于3罐。(2)某些罐头生产量较大，则以班产量总罐数20000罐为基数，取样量按1/3000。超过20000罐以上，取样量按1/10000，尾数超过1000罐者，增取1罐。(3)个别生产量过小的产品，同品种、同规格可合并班次取样，但并班总罐数不超过5000罐，每生产班次取样量不少于1罐，并班后取样基数不少于3罐。(4)按杀菌锅取样，每锅检取1罐，但每批每个品种不得少于3罐。2.瓶、袋、听装奶粉：按批号采样，自该批产品堆放的不同部位采取总数的1‰，但不得少于2件，尾数超过500件者应加取1件。[问答题]2.水样的采集正确答案：详见解析参考解析：（一）采样器材采样前应准备好采样装置和盛放水样的器皿。根据所要采集水样水体的情况，选出适宜的采样器。用来盛放水样的容器应稳定，即在存放期间既不会将容器材质溶入样品中，而容器又不会吸附水样中的某些组分，考虑到运输和使用方便，最好易于密封和开启，不易破损，容易清洗并可反复多次使用。聚乙烯塑料器皿和硬质玻璃器皿能基本上满足这些要求。在多数情况下两者都适于盛放水样，但当水样含大量油类时不宜用塑料制品器皿，因为它会渗透某些碳氢化合物，测油类的水样宜用广口玻璃瓶存放。由于玻璃吸附金属离子的能力比塑料制品强，而且还可能溶出一些金属离子，因此宜用塑料容器存放测定微量金属的水样。监测项目不同，对盛放水样的容器的要求也不同，表1-2列出了各监测项目对存放容器和保存条件的要求。（二）采样量水质检验所需的水样量取决于测定项目，不同的测定项目对水样用量及保存条件有不同的要求，因而应根据各个检验项目的实际情况分别计算，并适当增加20%～30%，作为实际采样量。各检验项目的水样实际用量和其保存方法见表1-2。如果采样器的容积有限，一次采样不能满足所需样品量时，就应多次采集，并在较大容器中将各次采集的样品混匀后再装入样品容器中。为了防止样品在运输过程中溢出，装瓶时应保证容器中留有约1/10的空隙。除测定溶解氧等气体的样品外，任何情况下容器都不能注满水样。（三）采样方法1.天然水与生活饮用水水样的采集：采集自来水及具有抽水机设备的井水时，应先放水数分钟，使积留于水管中的杂质流出去，然后再收集水样。采集湖泊或河流的表面水样时，可在距岸边1～2m处，将采集瓶浸入水中，使瓶口位于水面下20～50cm但距水底10～15cm处，打开瓶塞，让水进入瓶中。在这种情况下，要注意防止混入漂浮于水面的物质。采集井、河流、湖泊或水库等较深处的水样时，宜用水样采集瓶采集。供卫生细菌学检验用水样，采集方法与上述方法相近，但要注意进行无菌处理。要用酒精灯将水龙头灼烧消毒。采取含有余氯的水样时，应在水样瓶消毒前，按每500ml水样加2ml计，加入1.5%硫代硫酸钠溶液。(1)采样点的选择：采样点的设置应有代表性，应分别设在水源取水口、集中式供水单位出水口和居民经常用水点处。管网水的采样点数，一般按供水人口每2万人设1个点计算，供水人口在20万以上、100万以下时，可酌量增减。在全部采样点中，应有一定的点数选在易受污染的地点和管网系统陈旧部位。具体采样点的选择，应由供水单位和当地卫生行政部门根据本地区具体情况确定。(2)水样的体积：水样的体积，取决于所分析项目的多少以及选用的测定方法。分析常规水质项目，只需要3～5L水样，取样量应能满足欲测项目的需要。对于细菌与化学检验，由于采集、处理、容器等的不同，不能应用同一瓶水样。(3)水样容器：样品瓶可用硼硅玻璃瓶或聚乙烯塑料瓶，必须能够用塞或盖紧紧密封。选择容器的原则：①容器不能是新的污染源；②容器壁不应吸收或吸附某些待测组分；③容器不应与待测组分发生反应。容器的清洗原则：按水样待测组分的要求来确定清洗容器的原则。用于微生物检验样品的容器：容器及瓶塞、瓶盖应能经受热力灭菌的温度，并且在这个温度下不释放或产生任何能抑制生物活动或导致死亡或促进生长的化学物质。为了除去余氯，在灭菌前向容器里加入硫代硫酸钠以还原余氯［每次125ml水样加0.1ml硫代硫酸钠溶液(100g/L)］。热力灭菌分干热和压力蒸汽灭菌两类。压力蒸汽灭菌法要求121℃、15分钟即可杀死芽胞。干热灭菌法杀死芽胞需160～180℃、维持2小时。(4)样品保存：水样从采集到分析这段时间里，由于物理的、化学的、生物的作用会发生不同程度的变化，原则上应尽快测定。影响水质变化的因素：生物作用、化学作用、物理作用。水样保存措施：①通常将水样充满容器并密封，但对冷冻保存的水样不应充满容器。②水样保存，应达到减慢生物或微生物作用，减慢化合物或络合物水解，避免分解，减少挥发与容器的吸附损失。保存方法，可采用控制pH、加入化学剂、冷藏或冷冻。应根据具体组分选定适宜的保存方法。(5)现场采样和记录现场采样：采集井水时，须先用泵充分抽水，以保证样品真正代表地下水源的实况。采集自来水时，应开启水龙头，适当放水数分钟后再取样，微生物样品应放水数分钟后关闭水龙头，用酒精棉球擦拭水龙头口并点燃酒精棉球灼烧水龙头口后迅速采样封口。采样记录：在采样现场把采样记录用胶纸粘贴或悬挂标签于水样瓶上，注明水样编号、采样者、日期、时间及地点等。2.生活污水和工业废水水样的采集：生活污水的成分十分复杂，变化很大，它既与人们的起居作息有关，又与季节性食物的种类有关，一天之内乃至一小时之内水质的情况也不相同。工业废水是指生产过程中排出的各种废水，它包括工艺过程用水，机器设备冷却水，设备和场地清洗水等。由于生产工艺过程不同，原材料不均以及工艺的间歇性等，在不同时间内，即使是同种工业废水，其水质情况的变化也十分明显。对于这种变化很大的水样，需仔细设置采样点和采样方法，才能使所取样品有代表性。为了使所设置的采样点合适，布点前应进行必要的调查研究。例如，查清工业的用水量（主要包括工业用水量、工业用水中的循环用水量、废水排放量），查明工业废水的类型和排污去向（车间、工厂或地区排污口数量和位置，工业废水是直接进入还是通过渠道排入江河湖海中等）。一般在工厂总排污口处布点取样，这种水样适于监测悬浮物、硫化物、挥发性酚、石油和铜、锌、氟及其无机化合物等二类污染物。为了监测汞、镉、砷、铅及其无机化合物，六价铬，有机氯和强致癌物等一类污染物，则应在车间或车间设备出口处布点取样。对于有处理设施的工厂，还应在处理设施的进口和出口处布点取样，这样可了解处理效果。采集废水样品的方式主要有以下几种：(1)间隔式等量取样：通常在一昼夜内每隔一定的时间采集相等量的水样混匀，这种方式适于废水流量比较恒定的情况。(2)平均比例取样：如果废水流量不恒定，则需根据不同流量按比例采集样品，即流量大时多取，流量小时少取，混匀后装瓶。如设有总废水池，也可在废水池一次采集混合均匀的水样进行分析。(3)瞬间采样：如要了解废水在每天各个不同时间内成分的变化，应每隔一定时间，如1小时、2小时……有时甚至几分钟采集一次水样，并立即分析。(4)单独取样：有些污染物，如悬浮物、油类等在废水中的分布极不均匀，很难取到代表性的均匀水样，而且样品在放置过程中又易浮于表面或沉于容器底部，如从全分析水样中取出一部分用来分析这些项目，必然会影响到结果的正确性，在这种情况下就应单独取样，全量分析。采样点应设在排污总管口或车间污水出口处。3.对河流湖泊等进行污染调查时水样的采集：对河流湖泊等进行污染调查时，应从整个水域来考虑，合理设置采样点，建立起水体污染监测网，才能及时而准确地报告污染情况和水域中各种有害物质的动态变化。为了合理地确定采样点，首先应做好调查研究和收集资料工作。需要了解水体的水文、气候、地质、地貌特征；了解水体沿岸的城市分布和工业布局情况，污染源分布及排污情况，城市的给水情况；了解水体沿岸的资源现状，水资源的用途和重点水源保护区；收集原有的水质检验资料。必要时，还可在需要设置采样点的河段上设置一些调查点进行采样分析。然后根据检验的目的、项目和样品类型，并按上述调查研究和对有关资料的综合分析结果来确定采样点。[问答题]3.食品样品制备的前处理正确答案：详见解析参考解析：采集的样品多数不能直接检测，样品要进行前处理，再制备成样品溶液进行分析。样品前处理一般分为：粉碎、过筛、匀浆、干燥、脱脂等。1.粉碎：粉碎样品常用乳钵、药碾和粉碎机。用乳钵和药碾粉碎样品是实验室常用的老办法，该法使样品全部微粉化，主要适用于含水分少、油脂少的干燥样品。粉碎机有电动和手动两种，较常用电动一种，有滚筒式、球磨式和切削式等，粉碎效果较好。无论使用哪种粉碎方法，都应注意以下几个问题：(1)粉碎时间不宜过长，否则产生的热量大，可能会引起某些成分变化或水分减少，样品粉碎到最大颗粒不影响平均组成，最小颗粒不影响成分特点为度。(2)选用粉碎机应根据测定目的、样品种类不同来选择。例如，粉碎含纤维多的样品不宜选研磨式粉碎机，而选用冲击式切削式较好。测定金属含量的样品选用瓷的粉碎装置，否则会造成某种金属量偏高。(3)对于含水分或含油脂多的样品，要在不影响测定的情况下预先干燥除水分或预先脱脂后再粉碎。(4)所有的粉碎机使用完后都应清扫干净，用前应处理干净、干燥。2.过筛：经粉碎后的样品由于粒度不一致，会造成取样不均匀，因此粉碎后的样品要过筛，将大颗粒筛出来再行粉碎，再过筛，直至全通过。一般过20～35目筛即可。过筛时，一定要上面有盖下面有底，使整个过筛在密闭的状态下进行，否则一些细微粉末会损失。使用过的筛子应该用小毛刷轻轻清扫，清除样品剩余粉末和残渣，如果孔目较细的可将筛反过来进行清除。如果筛过含盐分多的样品，用过的筛子应用水洗净，然后干燥。3.匀浆：对于含水分或油脂多的样品，往往不适合用粉碎方法处理，可用匀浆机进行匀浆或组织捣碎。匀浆之前需将样品切成小块，匀浆时要注意下列问题：(1)对一些含水分较少的样品在匀浆时要加一定量的水，以便上下层翻动、冲击，其加水量视样品而异，一般可加1～5倍。(2)所用匀浆器材应清洁，无污染。用后必须清洗干净，特别是含酸类样品，如不及时处理，将腐蚀匀浆器金属部件，使其生锈。清洗后，干燥。4.干燥（风干物的制备）：含水分多、脂肪少、被测成分对热稳定的样品，可进行预干燥。取样品适量，将之切细或切薄，称取200～300g，平铺在珐琅盘中，于60～80℃条件下加热干燥后置于室温下1～2日，使其与大气温度达到动态平衡，称重，计算出和未预干燥前样品的关系。5.脱脂：油菜籽、芝麻等种子及其制作的食品含油脂较多，粉碎时由于脂肪出来了而影响粉碎。如果少量损失油脂不影响测定结果，可选用尽可能减少油脂损失的机器，粉碎成粗块。如若将油脂全部除去，则称取适量样品于乳钵中粗碎，然后进行脱脂，供分析用。[问答题]4.医院消毒效果正确答案：详见解析参考解析：一、采样的原则与要求（一）采样时应注意无菌操作采样人员应做好个人防护，并按无菌技术操作，防止人员、标本和环境的污染；并正确处理采样及污染的废弃物。（二）样品的采取和送检注意样品采取的正确时段，并将采取的样品在6小时内送实验室检测，若样品保存于0～4℃条件时，送检时间不得超过24小时。（三）样品标识应对采取的样品进行唯一性标记，在样本上注明样品编号，并附详细的采样单，注明样品编号、样品名称、采样地点、采样时间、单位名称、来源、数量、检测项目和采样人信息。二、采样器材和采样液常用的采样工具主要包括：含营养琼脂平板(直径为9cm)、10ml磷酸盐缓冲液采样管、含0.1%硫代硫酸钠10ml磷酸盐缓冲液采样管、含3%(W/V)吐温80和0.3%卵磷脂10ml磷酸盐缓冲液采样管、含0.3%甘氨酸10ml磷酸盐缓冲液采样管、9ml普通营养肉汤采样管、含0.1%硫代硫酸钠9ml营养肉汤采样管、含3%(W/V)吐温80和0.3%卵磷脂9ml营养肉汤采样管、含0.3%甘氨酸9ml营养肉汤采样管，灭菌规格板(5cm×5cm)、无菌镊子、酒精灯、快速手消毒剂、无菌棉签、一次性使用无菌注射器(5ml)。三、样本采取方法（一）各类环境空气、物体表面分类Ⅰ类环境：采用空气洁净技术的诊疗场所、分洁净手术部和其他洁净场所；Ⅱ类环境：包括非洁净手术部（室）、产房、导管室、血液病病区、烧伤病区等保护性隔离病区；重症监护病区；新生儿室等；Ⅲ类环境：包括母婴同室、消毒供应中心的检查包装灭菌区和无菌物品存放区、血液透析中心（室）、其他普通住院病区等。Ⅳ类环境：包括普通门（急）诊及其检查、治疗（注射、换药等）室；感染性疾病科门诊和病区。（二）空气1.采样时段Ⅰ类环境在洁净系统自净后与从事医疗活动前采样；Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ类环境在消毒或规定的通风换气后与从事医疗活动前采样。2.采样方法(1)Ⅰ类环境可选择平板暴露法或空气采样器法，按照GB50333《医院洁净手术部建筑技术规范》要求进行检测。空气采样器法可选择六级撞击式空气采样器或其他经过验证的空气采样器。检测时将采样器置于室内中央80～150cm高度，按采样器使用说明书操作，每次采样时间不应超过30分钟。房间大于10m2者，每增加10m2增设一个采样点。(2)Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ类环境采用平板暴露法，室内面积≤30m2，设内、中、外对角线3点，内、外点应距墙壁1m处；室内面积>30m2，设4角及中央5点，4角的布点部位应距墙壁1m处。采样方法：将普通营养琼脂平板(Ф90mm)放置各采样点，采样高度为距地面80～150cm；采样时将平板盖打开，并将平板盖平移扣放于平板底上边边缘，平板盖不能遮挡普通营养琼脂，暴露至规定时间（Ⅱ类环境暴露15分钟，Ⅲ、Ⅳ类环境暴露5分钟）后，盖上盖及时送检。(3)注意事项1)采样前，关好门、窗，在无人走动的情况下，静止10分钟后进行采样。2)采样高度选择与地面垂直高度80～150cm。3)行走时动作要轻，且尽可能少在室内走动。4)先布点（放平板），后开盖。5)同一房间的空气与物表采样，均由一人操作。（三）医务人员手1.采样时段在医院工作人员清洗消毒双手后，接触病人或从事医疗活动前采样。2.采样方法将浸有无菌0.03mol/L磷酸盐缓冲液或生理盐水采样液的一支棉拭子在双手指曲面从指跟到指端来回涂擦各两次（一只手涂擦面积约30cm2），并随之转动采样棉拭子，剪去手接触部位，将棉拭子放入装有10ml采样液的试管内编号送检。采样面积按平方厘米(cm2)计算。工作人员用消毒剂消毒双手后，手上残留有消毒剂，应用含有与消毒液相对应的中和剂的采样液采样。3.注意事项采样必须在工作人员手清洗消毒后，进行医疗活动前，采取两只手为一个样品。（四）物体表面1.采样时段潜在污染区、污染区消毒后采样。清洁区根据现场情况确定。2.采样面积物体被采表面<100cm2，取全部表面；被采表面≥100cm2，采取100cm2。3.样品采样方法用5cm×5cm灭菌规格板放在被检物体表面，用浸有无菌0.03mol/L磷酸盐缓冲液或生理盐水采样液的1支棉拭子，在规格板内横竖往返各涂抹5次，并随之转动棉拭子，连续采4个规格板，剪去手接触部分，将棉拭子放入装有10ml采样液的试管中送检。门把手等小型物体则采用浸有无菌0.03mol/L磷酸盐缓冲液或生理盐水采样液的棉拭子涂擦物体表面采样。若采样物体表面有残留的消毒剂时，应用含与消毒液相对应的中和剂的采样液采样。4.注意事项(1)门把手等不规则物体表面用棉拭子涂擦采样，菌落总数是用CFU/件表示。(2)同一房间空气、物体表面的采样，应先采空气，后采物体表面，最好由一个人操作。(3)物体表面的采样应由近及远，兼顾上下中左右。（五）医疗用品1.采样时段在消毒或灭菌处理后，存放有效期内采样。2.采样方法样品采取应在100级洁净实验室内进行。(1)灭菌的医疗器材1)可用破坏性方法采取的灭菌医疗器材；如一次性输液（血）器、注射器和注射针等参照《中华人民共和国药典》中的无菌检查法进行。2)对不能用破坏性方法采取的医疗器材：缝合针、针头、手术刀片等医疗器械各5件，分别投入5ml的无菌洗脱液中；注射器则取5副在5ml无菌肉汤中分别抽吸5次；手术钳、镊子等大的医疗器械取2件，用棉拭子涂擦采样，将棉拭子投入5ml无菌洗脱液中，被采表面<100cm2，取全部表面，被采表面≥100cm3，取100cm2。然后将除去手接触部分的棉拭子进行无菌检查。3)牙科手机样品，将每支手机分别置于含20m1～25ml采样液的无菌大试管(内径25mm)中，液面高度应大于4.0cm，于旋涡混合器上洗涤振荡30秒以上，取洗脱液进行无菌检查。(2)消毒医疗器材1)可整件放入无菌试管的灭菌物品，用洗脱液浸没后震荡30秒以上，取洗脱液1.0ml接种于灭菌的平板，将冷至40～45℃的熔化营养琼脂培养基，每个平板倾注15～20ml营养琼脂培养基，冷至室温将平板翻过来，置36℃±1℃恒温箱培养48小时，计数菌落数（单位CFU/件），必要时分离致病性微生物。2)可用破坏性方法采取的消毒医疗器材，在100级超净工作台称取1～10g样品，放入装有10ml采样液的试管内进行洗脱，取洗脱液1.0ml接种灭菌的平板，计数菌落数(CFU/g)，必要时分离致病性微生物；对不能用破坏性方法取样的医疗器材，在100级超净工作台，用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子在被检物体表面涂抹采样，被采表面<100cm2，取全部表面，被采表面≥100cm2，取100cm2。3)消毒后内镜，取清洗消毒后内镜，采用无菌注射器抽取50ml含与消毒剂相应中和剂的洗脱液，从内镜的活检入口注入冲洗内镜管路，并全量收集（可使用蠕动泵）送检。3.注意事项(1)在洁净度100级区域中进行，应严格遵守无菌操作，避免微生物污染。(2)当消毒因子为消毒剂时，采样液中应加入与消毒剂相应的中和剂。(3)应采有效期内的样品（高压灭菌-2周；环氧乙烷-2年）。（六）消毒剂1.采样要求(1)采样时间，采取更换前使用中消毒液与无菌器械保存液。(2)消毒剂采样分库存消毒剂和使用中消毒液。2.采样方法在无菌条件下，用无菌吸管吸取1ml被检样液，加入9ml含相应的稀释液中混匀。对于醇类与酚类消毒剂，稀释液用普通营养肉汤即可；对于含氯消毒剂、含碘消毒剂、过氧化物消毒剂，需用含0.1%硫代硫酸钠磷酸缓冲液；对于洗必泰、季铵盐消毒剂，需用含3%(W/V)吐温80和0.3%卵磷脂磷酸缓冲液；对于醛类消毒剂，需用含0.3%甘氨酸磷酸缓冲液；对于含有表面活性剂的各种复方消毒剂，需用含3%(W/V)吐温8磷酸缓冲液，也可使用该消毒剂消毒效果检测的中和剂鉴定试验确定的中和剂，以中和被检样液的残效作用。3.注意事项(1)采集消毒液样品时应在消毒液内没有物品或放入物品消毒作用到规定时间之后进行采样。(2)采样后1小时内检测，实际工作中由于各种原因做不到，因此，我们加入9ml与所采消毒剂相对应的中和剂中和其消毒作用，带回实验室后及时检测。(3)不同消毒剂使用与之相对应的中和剂中和，以中和被检消毒液的残效作用。[问答题]5.人禽流感样品采集、运输和检测正确答案：详见解析参考解析：（一）标本的采集1.标本采集人员：医疗机构的医生、护士或当地疾病预防控制中心专业人员负责标本采集并填写标本登记表，标本采集人员按照《与禽流感病禽密切接触者个人防护指导原则（试行）》做好个人防护。2.采集对象：禽流感病人，疑似病人，根据需要可采集病禽以及人禽流感密切接触者。3.标本采集种类和时限(1)采集标本的种类：疑似禽流感患者的咽、鼻拭子或含漱液、血清、粪便以及死亡病例的尸检肺组织、气管分泌物、其他脏器。(2)采集标本时间：咽、鼻拭子或含漱液、粪便在发病的头3天内采集。急性期血清在发病后7天内采集，恢复期血清在发病后2～4周采集。尸检标本尸检时采集。(3)标本的运送：采集的标本若不能在24小时内送达，则应尽快在﹣70℃以下保存。无﹣70℃条件的需在﹣20℃冰箱短时间暂存，并尽快联系递送标本。(4)标本采集的方法病毒分离标本：应采集发病后3天内相关标本进行病毒分离。标本采集后应立即放入适当的采样液中低温保存，常用的采样液为：普通肉汤，pH7.4～7.6的Hank液、Eagle液或水解乳蛋白液。在采样液中需加入抗生素，抗生素多用青霉素、链霉素(1000U/ml)，庆大霉素(其终浓度为1mg/ml)和制霉菌素(终浓度为50μg/ml)。主要的采集样本的方法有以下几种：1)鼻拭子：将棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出。以同一拭子拭两侧鼻孔。将棉签浸入4～5ml采样液中，尾部弃去。2)咽拭子：用棉签擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，同样将棉签头浸入4～5ml采样液中，尾部弃去。3)鼻咽抽取物：用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取黏液。先将收集器头部插入鼻腔，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。收集抽取的黏液，并用采样液刷洗收集器3次。4)鼻洗液：患者取坐姿，头微后仰，用移液管将1～1.5ml洗液注入一侧鼻孔，嘱患者同时发K音以关闭咽腔。然后让患者低头使洗液流出，用平皿或烧杯收集洗液。重复此过程数次。洗两侧鼻孔最多可用10～15ml洗液。5)漱口液：用10ml洗液漱口。漱口时让患者头部微后仰，发噢声，让洗液在咽部转动。然后，用平皿或烧杯收集洗液。注意：取鼻洗液和漱口液时，需预先了解患者是否对抗生素有过敏史，如有则洗液和含漱液中不应含有相应的抗生素。6)肺活检材料：肺活检组织在无菌条件下，用灭菌过的乳钵磨碎，用生理盐水配成20%悬液，2000转/分离心10分钟，取上清液加入上述提到的抗生素。7)粪便标本：采集10～20g粪便（或用塑料杆人造纤维头的肛拭子2支）放入含有10mlPBS或生理盐水无菌的50ml有螺旋盖的塑料瓶内，密封，40℃条件下立即送至有关实验室。血清标本：血清标本应包括急性期和恢复期双份血清5～10ml。急性期血样应尽早采集，一般不晚于发病后7天。恢复期血样则在发病后2～4周采集。血液标本2000～2500转/分离心15分钟。收集血清，血清可在40℃存放1周，长期保存置﹣20℃。（二）标本包装、运送1.禽流感病例（包括疑似禽流感病例）标本必须放在大小适合的带螺旋盖的内有橡胶圈的塑料管里（一级容器）拧紧。2.将密闭后的标本放入大小适合的塑料袋内密封；每袋装一份标本。3.直接在一级容器上用油性记号笔写明样本的种类、采样时间、编号、患者姓名，同时也将标本有关信息填写在禽流感人体标本送检表（见附表），连同一级容器封于塑料袋内。4.将装标本的密封袋放入二级带螺旋盖的内有橡胶圈的塑料容器内，拧紧盖，在容器上标明有关信息。5.将二级容器摆放在专用运输箱内（或疫苗运输箱），放入冰排，然后以柔软物质填充，并密封。(1)同一患者2份以上的密封标本，可以放在同一个二级容器内。(2)二级容器要承受不小于95kPa的压力，内衬具吸水和缓冲能力的物质。(3)若进行病毒分离，可将密封好的装有标本的一级容器直接放入液氮运输罐内运输。(4)所有容器必须印有生物危险标注。(5)标本需由专人（2人）运送，不得邮寄，最好使用专车。（三）标本的接收1.省（市）预防控制中心为本辖区内标本接收指定单位，并开展相关的实验室检测工作。对病毒分离物的血凝实验阳性和血清H5N1抗体阳性的标本，连同送检表同时送至省疾病预防控制中心进行复检。2.省CDC负责其他地级市样本的接收和实验室检测工作。并对复核样本进行检测、鉴定及上送国家流感中心。3.指定实验室应实行24小时标本接收制。（四）相关病毒学的检测项目1.病毒分离和鉴定：用组织培养（MDCK细胞）和鸡胚分离法，细胞和鸡胚培养物进一步用HA和HI实验鉴定。经HI实验（用H5抗血清）检测阳性者报送国家流感中心。经特异性H5RT-PCR病毒核酸检测阳性的采样标本的病毒分离及鉴定工作必须在生物安全Ⅲ级(BSL-3级)实验室里操作。2.血清抗体检测3.禽H5病毒核酸检测：对疑似禽流感患者的咽、鼻拭子或含漱液，死亡病例的尸检肺组织、气管分泌物采用RT-PCR的方法快速检测禽H5亚型流感病毒及排除工作。4.微量中和试验：对部分疑似病例的急性期和恢复期的双份血清进一步做微量中和试验。该实验必须在生物安全Ⅲ级(BSL-3级)实验室里操作。（五）检测结果的确认1.各流感监测实验室对血凝实验(HA)阳性或H5血凝抑制试验(HI)阳性的标本，上送进行复核。2.省CDC流感实验室对血凝(HA)阳性、H5血凝抑制试验(HI)阳性、RT-PCR检测阳性、微量中和试验阳性的标本，上送国家流感中心复核检测及确认。（六）检测报告时限一般情况下，实验室收到的样本应立即进行实验，并于收到标本后48小时内出具RT-PCR检测报告，3～5天出具病毒分离培养结果，于分离到病毒后的3～5天出具流感病毒的血凝抑制试验结果，微量中和实验需3～5天后完成。当实验过程中出现不可预测情况或意外事件，影响了按时出具报告时，应及时报告和说明。（七）流感实验室检测中应注意的问题1.初期病毒分离标本的处理可以在二级生物安全柜中进行；如标本确认为H5N1阳性后，此标本的有关实验应在P3实验室中操作。血清学实验操作应在二级生物安全柜中或生物安全二级实验室进行。2.禁止在同一实验室，更不能在同一接种柜中，同时处理、接种未知临床标本和已知阳性标本。3.禁止在同一实验室，同一时间处理、接种采自不同动物的标本；动物标本（如禽、猪等）必须与人的标本分别保存。4.接种后剩余原始标本，尤其分离出病毒的标本需暂时冻存，有条件的应置﹣70℃或以下保存，以便需要时可进行复查，待分离物经国家流感中心鉴定完成后方可处理掉。分离阴性的标本也应随时废弃处理。5.严禁实验室交叉污染：在病毒分离时严禁设阳性对照及操作在人群中已消失的流感病毒。6.流感病毒在﹣40～﹣20℃时不稳定，故长期保存应在﹣70℃以下。[问答题]6.常用的现场检测项目正确答案：详见解析参考解析：（一）空气温度目前我国测定室内温度的标准方法有玻璃液体温度计法和数显示温度计法。测定时，测点离地面高度0.8～1.6m，应离开墙壁与热源0.5m以上。1.玻璃液体温度计法温度计的刻度最小分度值<0.2℃，测量精度±0.5℃，测量范围为0～50℃。现场测定时，温度计应在现场放置5～10分钟后读数，读数时视线与温度计标尺垂直，水银温度计按凸出弯月面的最高点读数，酒精温度计应按凹月面的最低点读数。2.数显式温度计法数显式温度计最小分辨率0.1℃，测量范围0～60℃，测量精度±0.5℃。现场测定时，应首先安装好电池，然后将仪器的传感器杆接好（或拔出），打开仪器开关，按照相关标准要求选点，待仪器读数稳定后读取现场温度值。待测定完成后，将传感器杆回复原位，关闭仪器开关，记录测得值。（二）空气相对湿度测定室内空气湿度的方法包括干湿球法、氯化锂露点法、电阻电容法。1.电阻电容法目前常用的测定方法。测定前，应首先安装好电池，然后将仪器的传感器杆接好（或拔出），打开仪器开关，按照相关标准要求选点，待仪器读数稳定后读取相对湿度值。待测定完成后，将传感器杆回复原位，关闭仪器开关，记录测得值。2.干湿球法利用通风干湿表测量空气的相对湿度，在-10～45℃条件下，相对湿度的测量范围为10%RH～100%RH。（三）大气压使用空盒气压表测定室内大气压力，普通空盒气压表测量范围800～1064hPa环境的测定，应用高原空盒气压表可用于气压为500～1020hPa环境的测定。测定时将空盒气压表直接带到现场，先读附温，准确到0.1℃轻敲盒面，待指针摆动静止后读数。（四）室内风速测定室内风速常用指针式热电风速计或数显式热电风速计，其最低检测值不应大于0.05m/s，在0.05～2m/s范围内，其测量误差不大于±10%。1.指针式热电风速计现场测定时基本步骤如下：(1)将风速传感器与风速计连接，打开电源开关；(2)按照仪表使用说明书调整仪表的机械零点、满度和零点；(3)轻轻拉动螺塞，使测杆测头露出，测头上的红点对准来风方向，从表上读出风速值。2.数显式热电风速计测定时基本步骤如下：(1)将风速传感器与风速计连接，打开电源开关；(2)按使用说明书进行自检或预热等操作；(3)轻轻将测杆测头拉出，测头上的红点对准来风方向，读出风速值；（五）噪声测定室内噪声通常采用数字声级计测定，其原理通常利用电容式声电换能器，将被测的声音信号转变为电信号，经内部一定处理后成为声级值。使用声级计在规定时间内测量一定数量的室内环境A计权声级值，经过计算得出等效A声级LAeq，即为室内噪声值。1.数字声级计测量范围30～120dB(A)，精度±1.0dB。2.测定时基本要求(1)测点选择：测定时大于100m2的公共场所，距声源中心（或一侧墙壁）画一直线至对侧墙壁中心，在此直线上均匀分布3点为监测点，小于100m2的公共场所在中央区一点作为监测点。(2)仪器校准：测量前使用声校准器对声级计进行校准。(3)测量时声级计可以手持也可以固定在三角架上，并尽可能减少声波反射影响。(4)稳态噪声测定，用声级计快档读取1分钟指示值或平均值，对于脉冲噪声读取峰值和脉冲保持值。(5)周期性噪声测定，用声级计慢档每隔5秒读取一个瞬时A声级值，测量一个周期。(6)非周期非稳态噪声测定，用声级计慢档每隔5秒读取一个瞬时A声级值，连续读取若干数据。（六）照度测定目前我国公共场所标准中测定照度使用的仪器是利用光敏半导体元件的物理光现象制成的。当外来光线射到硒光电池（光电元件）后，硒光电池即将光能转变为电能，通过电流表显示出光的照度值。使用的照度计性能应符合公共场所照度测定方法要求。1.照度计量程下限不大于1lx，上限不小于5000lx，测定公共场所室内照度仪器示值误差要求不超过±8%，室内照明测定仪器示值误差不超过+4%。2.测点要求在进行公共场所整体照明调查时，测定面高度为地面以上80～90cm。一般大小的房间在房间的对角线上或呈梅花式均匀分布取5个点，影剧院、商场等大面积场所的测量可用等距离布点法，一般以每100m2布10个点为宜。局部照明测量时，要根据实际情况合理选择，并在测定结果中注明。3.测定时间要求测定时应注意，测定前白炽灯至少开5分钟，气体放电灯至少开30分钟。为使受光器不产生初始效应，在测量前至少曝光5分钟。测定时受光器一律水平放置在待测面上。4.测量步骤(1)按使用说明书要求检查调整照度计；(2)照度计的受光器上必须洁净无尘；(3)测量时照度计受光器应水平放置；(4)将受光器置于待测位置，选择量程并读取照度值；(5)操作人员的位置和服装不应该影响测量结果；(6)按要求对仪器进行期间核查和使用前校准。（七）紫外辐照计紫外辐照计是宽谱线功率测量仪，主要用于测量紫外线的辐射能功率密度，即每平方厘米的辐射能功率。单位为：微瓦/平方厘米(μW/cm2)。1.操作方法(1)安装电池。(2)按下开关按钮，液晶显示屏显出数字。(3)调零：左边紫外辐照计插上接触头，不需要调零；右边紫外辐照计，在无紫外线照射下，旋转调零旋钮调零。(4)选择正确挡位：左边紫外辐照计需要选择挡位，紫外线强度监测选择253.7mm波长。(5)检查一下换挡开关是否在×1挡。(6)取下探头保护盖，检查光敏感窗是否清洁。(7)测量：将探头窗口置于测量位置，显示数值即为辐照强度，单位：μW/cm2。当数值显示1时，即为超量程，请将换挡开关至×10挡位置，辐照强度即为读数乘10。(8)数据保持：在测量过程中，测量数值尾数不稳定时，按下HOLD键会保持当前读数，且屏幕上会出现HOLD标志。如需退出保持功能，只需再按下HOLD键，HOLD标志消失并退出保持功能。(9)使用结束，将电源关闭，并盖上探头盖。2.注意事项(1)在现场监测时，拿到仪器检查是否有在有效期内的检定合格标记。(2)因紫外线对人体皮肤及眼睛有损害，所以测量中要注意安全防护，监测少量紫外线灯时要戴上防护眼镜；监测大量紫外线灯时戴上防护式头盔和手套，无暴露皮肤，以免损害身体健康。(3)在监测紫外线灯的辐照强度时，紫外线灯表面应清洁，发现灯管表面有灰尘、油污时，应用酒精棉球将灯管擦拭干净后再进行检测。(4)普通30W直管紫外线灯在开灯5分钟后，距紫外线杀菌灯管(GB28235-2011)表面正中法线1.000m处用波长为253.7nm的紫外照度计测定，打开探头盖，待仪器稳定后，所示数据即为该紫外线灯的辐照强度，使用中的紫外线灯的辐照强度不得低于70μW/cm2为合格。(5)HOLD键每次按下时间不应超过15秒，否则影响液晶寿命。[问答题]7.大气样品采集方法正确答案：详见解析参考解析：大气样品的采集方法分为直接采样法和富集（浓缩）采样法两类。一、直接采样法--容器采样法适用于大气中被测组分浓度较高或监测方法灵敏度高的情况，这时不必浓缩，只需用仪器直接采集少量样品进行分析测定即可。此法测得的结果为瞬时浓度或短时间内的平均浓度。常用容器有注射器、塑料袋、采气管、真空瓶等。1.注射器采样：常用100ml注射器采集有机蒸气样品。采样时，先用现场气体抽洗2～3次，然后抽取100ml，密封进气口，带回实验室分析。样品存放时间不宜长，一般当天即分析完成。气相色谱分析法常采用此法取样。取样后，应将注射器进气口朝下，垂直放置，以使注射器内压略大于外压。2.塑料袋采样：应选不吸附、不渗漏，也不与样气中污染组分发生化学反应的塑料袋，如聚四氟乙烯袋、聚乙烯袋、聚氯乙烯袋和聚酯袋等，还有用金属薄膜作衬里（如衬银、衬铝）的塑料袋。采样时，先用二联球打进现场气体冲洗2～3次，再充满样气，夹封进气口，带回实验室尽快分析。3.采气管采样：采气管容积一般为100～1000ml。采样时，打开两端旋塞，用二联球或抽气泵接在管的一端，迅速抽进比采气管容积大6～10倍的欲采气体，使采气管中原有气体被完全置换出，关上旋塞，采气管体积即为采气体积。4.真空瓶采样：真空瓶是一种具有活塞的耐压玻璃瓶，容积一般为500～1000ml。采样前，先用抽真空装置把采气瓶内气体抽走，使瓶内真空度达到1.33kPa之后，便可打开旋塞采样，采完即关闭旋塞，则采样体积即为真空瓶体积。二、富集采样法--浓缩采样法富集（浓缩）采样法：是使大量的样气通过吸收液或固体吸收剂得到吸收或阻留，使原来浓度较小的污染物质得到浓缩，以利于分析测定。适用于大气中污染物质浓度较低，用直接采样法所得的样品进行分析，往往不易检出的情况。采样时间一般较长，测得结果可代表采样时段的平均浓度，更能反映大气污染的真实情况。具体采样方法包括溶液吸收法、固体阻留法、低温冷凝法、自然积集法等。（一）溶液吸收法主要用于吸收以气态和蒸气态存在的有害物质。当空气通过装有吸收液的吸收管时，有害物质分子被阻留在吸收液中，因而能同时达到采集大气和浓集有害物质的目的。其吸收原理是：当空气通过适当的吸收液时，在气泡和吸收液的界面上，有害物质分子由于溶解作用或化学反应能很快地进入吸收液中。同时，处于气泡中间的气体分子，由于运动速度很大，也能迅速地扩散到气液界面上而被吸收，因而整个吸收过程能很好地完成。各种气体吸收管就是根据上述原理设计的，是采集大气中气态、蒸气态及某些气溶胶态污染物质的常用方法。采样时，用抽气装置将欲测空气以一定流量抽入装有吸收液的吸收管（瓶），使被测物质的分子阻留在吸收液中，以达到浓缩的目的。采样结束后，倒出吸收液进行测定，根据测得的结果及采样体积计算大气中污染物的浓度。吸收效率主要决定于吸收速度和样气与吸收液的接触面积。常用的吸收液有水、水溶液和有机溶剂等。选择吸收液时应考虑到以下几点：被测物质在吸收液中的溶解度大，且具有足够的稳定时间；选择吸收液要考虑下一步化学反应，应与以后的分析步骤衔接；吸收液要价廉易得。1.吸收液的选择原则(1)与被采集的物质发生不可逆化学反应快或对其溶解度大；(2)污染物质被吸收液吸收后，要有足够的稳定时间，以满足分析测定所需时间的要求；(3)污染物质被吸收后，应有利于下一步分析测定，最好能直接用于测定；(4)吸收液毒性小，价格低，易于购买，并尽可能回收利用。2.常用吸收管(1)气泡式吸收管：适用于采集气态和蒸气态物质，不宜采集气溶胶态物质。(2)冲击式吸收管：适宜采集气溶胶态物质和易溶解的气体样品，而不适用于气态和蒸气态物质的采集。(3)多孔筛板吸收管（瓶）：是在内管出气口熔接一块多孔性的砂芯玻板，当气体通过多孔玻板时，一方面被分散成很小的气泡，增大了与吸收液的接触面积；另一方面被弯曲的孔道所阻留，然后被吸收液吸收。所以多孔筛板吸收管既适用于采集气态和蒸气态物质，也适用于采集气溶胶态物质。（二）填充柱阻留法（固体阻留法）空气通过装有固体吸附剂的采样管时，有害物质被固体吸附剂吸附而被浓集。固体吸附剂有颗粒状吸附剂和纤维状吸附剂两种。填充柱是用一根6～10cm长、内径3～5mm的玻璃管或塑料管，内装颗粒状填充剂制成。采样时，让气样以一定流速通过填充柱，则欲测组分因吸附、溶解或化学反应而被阻留在填充剂上，达到浓缩采样的目的。采样后，通过加热解吸，吹气或溶剂洗脱，使被测组分从填充剂上释放出来测定。1.常用的颗粒吸附剂种类：常用的颗粒吸附剂有硅胶、活性炭、素烧陶瓷和分子筛等，它们是多孔性物质，具有较大的比表面积，对气体和蒸气有极强的吸附作用。同时尘粒在多孔性气路中因惯性碰撞而被阻留。因此，用固体颗粒状吸附剂采样，在气体和尘粒共存时，有时是个较好的采样方法。采样完后，再选择适当的溶剂，将被测物质洗脱下来；如为有机蒸气，也可用加热吹气法解析，然后进行分析测定。2.常用填充柱的种类：根据填充剂阻留作用的原理，可分为吸附型、分配型和反应型三种类型。(1)吸附型填充柱：所用填充剂为颗粒状固体吸附剂，如活性炭、硅胶、分子筛、氧化铝、素烧陶瓷、高分子多孔微球等多孔性物质，对气体和蒸气吸附力强。(2)分配型填充剂：所用填充剂为表面涂有高沸点有机溶剂（如甘油异十三烷）的惰性多孔颗粒物（如硅藻土、耐火砖等），适于对蒸气和气溶胶态物质（如六六六、DDT、多氯联苯等）的采集。气样通过采样管时，分配系数大的或溶解度大的组分阻留在填充柱表面的固定液上。(3)反应型填充柱：其填充柱是由惰性多孔颗粒物（如石英砂、玻璃微球等）或纤维状物（如滤纸、玻璃棉等）表面涂渍能与被测组分发生化学反应的试剂制成，也可用能与被测组分发生化学反应的纯金属（如金、银、铜等）丝毛或细粒作填充剂。采样后，将反应产物用适宜溶剂洗脱或加热吹气解吸下来进行分析。3.固体阻留法的优点(1)用固体采样管可以长时间采样，测得大气中日平均或一段时间内的平均浓度值；溶液吸收法则由于液体在采样过程中会蒸发，采样时间不宜过长。(2)只要选择合适的固体填充剂，对气态、蒸气态和气溶胶态物质都有较高的富集效率，而溶液吸收法一般对气溶胶吸收效率要差些。(3)浓缩在固体填充柱上的待测物质比在吸收液中稳定时间要长，有时可放置几天或几周也不发生变化。所以，固体阻留法是大气污染监测中具有广阔发展前景的富集方法。（三）滤料阻留法主要用以采取尘粒状气溶胶，如烟和总悬浮颗粒物。采用动力装置使空气通过滤纸或滤膜时，阻留尘粒于膜或滤料上。常用的滤料有玻璃纤维滤料、有机合成纤维滤料、微孔滤膜和浸渍试剂滤料等。所选用的滤料和采样条件要保证有足够高的采样效率。滤料的选择，要求不含待测物质，或含量低而分布均匀；例如，分析空气无机元素应选用有机滤料，而分析有机成分时，应选用无机的玻璃纤维滤料。滤料的阻力要尽量小，以提高采样速度。为此，在采样前，应常根据目的和要求对滤膜进行预处理。常用滤料有两类：①纤维状滤料，如定量滤纸、玻璃纤维滤膜（纸）、氯乙烯滤膜等；②筛孔状滤料，如微孔滤膜、核孔滤膜、银薄膜等。各种滤料由不同的材料制成，性能不同，适用的气体范围也不同。将过滤材料（滤纸、滤膜等）放在采样夹上，用抽气装置抽气，则空气中的颗粒物被阻留在过滤材料上，称量过滤材料上富集的颗粒物质量，根据采样体积，即可计算出空气中颗粒物的浓度。（四）低温冷凝法是借制冷剂的制冷作用使空气中某些低沸点气态物质被冷凝成液态物质，以达到浓缩的目的。适用于大气中某些沸点较低的气态污染物质，如烯烃类、醛类等。1.常用致冷剂：冰、干冰、冰-食盐、液氯-甲醇、干冰-二氯乙烯、干冰-乙醇等。2.优点：效果好、采样量大、利于组分稳定。（五）自然积集法利用物质的自然重力、空气动力和浓差扩散作用采集大气中的被测物质，如自然降尘量、硫酸盐化速率、氟化物等大气样品的采集。其优点是不需动力设备，简单易行，且采样时间长，测定结果能较好地反映大气污染情况。[问答题]8.样品管理与运输正确答案：详见解析参考解析：1.样品管理除用于现场测定的样品外，大部分水样都要运回实验室进行分析，在水样运输和实验室检测过程中应保证其性质稳定、完整、不受玷污、损坏和丢失。采集的水样应有采样标签和采样记录，注明水样编号、采样者、采样日期、采样时间、采样地点、水样体积、数量、保存方法、水样采集点周边状况、气温、水温、需检测指标等信息。2.样品运输样品装箱运输前应逐一核对样品标签、采样记录，检查容器是否盖好或封好，用于检测油类的水样不能用蜡封；然后按照冷藏、保温、常温等分类装箱；做好防震、防碰撞等衬垫工作等。夏季应注意运输时间不宜过长，同时注意防止样品温度过高，导致水中化学物质发生反应，尤其应注意微生物学检测水样的保存条件；冬季应避免水样在运输过程中结冰，影响检测结果。[问答题]9.食品样品正确答案：详见解析参考解析：一、采样原则1.根据检验目的、食品特点、批量、检验方法、微生物的危害程度等确定采样方案。2.应采用随机原则进行采样，确保所采集的样品具有代表性。3.采样过程遵循无菌操作程序，防止一切可能的外来污染。4.样品在保存和运输的过程中，应采取必要的措施防止样品中原有微生物的数量变化，保持样品的原有状态。二、采样工具常用的采样工具主要包括两类，一类是适合采集各种样品的无菌采样器具，一类是盛放样品的灭菌容器（袋）等。如铲子、匙、夹子、镊子、吸管、灭菌广口瓶、灭菌袋以及剪子、刀具、开罐器等。此外还应准备消毒用的75%酒精棉球、酒精灯、打火机或火柴。三、样品采集的数量散装食品一般采集5倍或以上检验单位的样品量，即固体样品不少于250g，液体样品不少于250ml，或按照检验方法要求的样品数量进行采集。四、采样操作散装食品的采样必须在无菌操作下进行。采样前操作人员应先穿戴好工作服、工作帽和口罩，将酒精灯、打火机或火柴移至采样点后，用75%酒精棉球消毒手，然后用75%酒精棉球将采样开口处周围消毒后将容器或包装打开。固体样品可用已经过消毒灭菌的合适的取样工具适量取样放入灭菌容器或灭菌袋中，在酒精灯火焰下将盛放样品的容器（袋）封口。散装液体样品在采样前先用灭菌玻璃棒搅拌均匀或摇匀，有活塞的应用75%的酒精棉球将活塞及出口处表面抹擦消毒，然后打开活塞待样品通过出口流出一些后再用灭菌样品瓶接取样品，或用灭菌吸管吸取样品，装入灭菌采样容器内，在酒精灯火焰下封口。采集进行微生物检验的样品时，无菌采样是操作的关键环节，无菌采样的注意事项包括：采样时使用的各种取样用具要灭菌后才能使用，通常可在酒精灯火焰上灼烧灭菌；要使用无菌容器或无菌袋盛放样品，确保容器（袋）密封，防止样品外漏；不要触摸或接触无菌容器（袋）的里面以防污染；妥善保管已经消毒灭菌的采样用品；采集液态样本时，譬如牛奶、饮料等，要注意采集前将样本充分混匀，样本容量不要超过容器体积的3/4，以避免样品泄漏造成污染。五、采集样品的标记应对采集的样品进行及时、准确的标记和记录，填写相应的采样单，采样单应包括以下主要内容：样品名称、来源、批号、数量、保存条件、采样地点、时间、采样人等信息。六、采集样品的贮存和运输采样后，应将样品在接近原有贮存温度条件下尽快送往实验室检验。运输时应保持样品完整。如不能及时送检，应在接近原有贮存温度条件下贮存样品。[问答题]10.现场直读仪使用注意事项正确答案：详见解析参考解析：1.应是国家标准、地方标准或行业标准中规定的检测设备。2.测量范围与精度应符合国家标准方法的规定。3.应定期到有资质的计量部门进行检定或校准，并将所得结果进行有效确认，确认合格后将合格证贴到仪器明显处，方可使用。4.应按照仪器使用说明书定期对仪器进行保养与维护。5.仪器在使用前应进行校准。[问答题]11.水样的保存正确答案：详见解析参考解析：微生物的新陈代谢活动和化学作用能引起水样组分的变化；有些物质的聚合、解聚合作用也能引起水样的变化；胶体的絮凝和沉淀的吸附作用也能引起水样组分发生变化。这些变化有的很迅速，有的则比较缓慢。完全不损失的样品保存实际上是不可能的，为了尽量减少水样组分的变化，最有效的办法就是力求缩短从采样到分析之间的时间间隔。采集水样后应尽快进行分析，相隔的时间越短，分析结果越能代表取水样所属水体的水质情况。如来不及分析，则应根据不同检验项目的要求，采取不同的保存方法。保存样品时总希望能尽量减慢微生物的作用，尽量减慢化合物与络合物的水解作用，尽量减少组分的挥发损失。对于那些易受微生物分解、易氧化而发生变化的水样，应放在冷库、低温室等在4℃以下的阴暗处保存，也可加一些防腐剂，如氯化汞(每升加20～60mg)，苯、甲苯或氯仿(每升加0.5～1ml)等起到抑制微生物的作用；为了减少金属离子的水解和与容器壁发生吸附交换等，需将水样用酸酸化，通常每升水加5ml浓硝酸；对于有些金属离子，比如Cr[～+6.gif]，就不能保存酸化样品，而应在中性或碱性条件下保存，因为在酸性溶液中Cr[～+6.gif]可转化成Cr[～+3.gif]。我们还发现水中的钼在中性或天然pH下远比酸性溶液中稳定。总之，由于水样的性质不同，检验项目的要求不同，对水样的保存方法也各不相同。水样保存的期限既取决于水样的性质，又取决于保存条件和测定项目的要求。各种不同水样的保存条件、保存期限见表1-2、表1-3。[YS247_50.gif][问答题]12.食品样品采样要求正确答案：详见解析参考解析：（一）样品具有代表性由于各类食品名目繁多，包装不一，采样时具体的做法也不尽相同，但首先要考虑到采样的样品必须具有代表性，一般情况下样品的采样数可按理论式S=(n/2)1/2进行，其中，S代表采样次数（份数）。（二）样品具有典型性针对检验目的，采集能说明这一目的的典型样品。对污染或怀疑污染的样品，采样时应采集接近污染源的食品，以证明是否污染，同时要采集确认出未被污染的同种食品作空白对照；对掺伪或怀疑掺伪的食品，应采集这些认为有问题的样品，而不能采集均匀的样品作代表；对造成中毒或怀疑造成中毒的食品，应采集造成食物中毒的样品或怀疑造成中毒的样品。（三）样品具有适时性分析化验工作者要有强烈的时间概念。待测食品总是随着时间的推移而不断变化，想得到正确结论就不能坐失良机。（四）要认真填写采样记录写明样品的生产日期、批号、采样条件、包装情况等，外地调入的食品应结合运货单、兽医卫生人员证明、商品检验机关或卫生部门的化验单、厂方化验单了解起运日期、来源地点、数量、品质情况，并填写检验项目及采样人。[问答题]13.食物中毒样品采集要求正确答案：详见解析参考解析：食物中毒事件发生后，由于送检单位采集样品时存在一些问题，给中毒食品和毒物品种的鉴定工作带来很大困难，影响了现场处理和救治的针对性和时效性。送检样品存在的主要问题包括：采样的漫无边际性，提出检验毒物的无针对性，送检样品数量不足以及食物中毒现场情况不甚明了等。食物中毒样品采集要求：1.针对采样的漫无边际性，要求现场调查采样人员对食物中毒个案详细的调查，全面分析，了解集体性食物中毒的潜伏期、容易引发中毒的食物及其规律，有目的地采集食物样品。主要采集：(1)可疑食物、食品用工具样品：可疑食物样品和食品用工具样品的采集，往往是确定食物中毒原因的关键之一，应该尽可能早地采集。两类样品较高的检出率，说明该采样原则在变形杆菌食物中毒的调查中具有重要意义。(2)环境条件样品：在应急处理食物中毒时，对盛装剩余废弃食物的桶、熟食间、地面等环境采样。但也要考虑到所采集样品的目的性和可疑病原物质的检出率，不要盲目地贪大求全。(3)呕吐物：采集病人呕吐物样品，可能由于病人在开始出现呕吐、腹泻等胃肠症状时，自行口服诺氟沙星（氟哌酸）等广谱抗菌药，从而影响鉴定结果。因此，发生细菌性食物中毒时，只有在病人用药前采集呕吐物样品，才能对食物中毒原因的确定有意义。(4)粪便及肛拭子：一般粪便样品的检出率要明显高于肛拭检出率，在采集粪便样品时，要尽量采集腹泻物，不要或少采肛拭子样品。(5)血液样品：采集病人急性期血液样品及恢复期血液样品，作血清凝集试验。2.针对提出检验毒物的无针对性，要求现场调查采样人员了解引发食物中毒各类毒源的特征和临床表现，有目标地对实验室提出检验毒源要求，而非要求实验室逐一筛检判定。3.送检样品数量要足够（表1-6）。4.要求送检人员了解食物中毒现场情况，包括中毒的具体情况和中毒人员的临床表现，为实验室检验提供有利于确定检验项目的信息，减少检验的盲目性。故送检人员为中毒现场调查处理人员，送检时须持有正式的报检介绍信或文函，明确送检样品种类和数量、要求检验项目，同时注明责任单位的联系方式，责任人的姓名、电话、传真、通信地址等。5.提供系统流行病学分析资料。系统的流行病学和临床分析资料，对确定检验项目十分有帮助。送检时须携带现场流行病学调查和临床分析资料，或提供大部分中毒病人的《食物中毒个案调查登记表》以及《食物中毒报告登记表》。6.为了提高食物中毒样品检验的针对性和时效性，迅速切断毒源，争取救治病人时间，努力缩短送检时间，尽早为临床救治提供依据。7.采样应根据中毒病人发生的时间分布，确定中毒餐次，采集该餐食剩的可疑食物和中毒病人的呕吐物。8.采样应使用无菌袋无菌采集。怀疑微生物中毒时应使用相应增菌液或者无菌生理盐水。样品应置冰箱内保存运送（温度通常控制在4℃左右）。[问答题]14.食品理化检验样品的采集、收样与检验正确答案：详见解析参考解析：（一）采样原则食品采样是指从较大批量食品中抽取能较好地代表其总体样品的方法。因此，应遵循下列采样原则：1.代表性：在大多数情况下，待鉴定食品不可能全部进行检测，而只能抽取其中的一部分作为样品，因此，所采的样品应能够较好地代表待鉴定食品各方面的特性。2.真实性：采样人员应亲临现场采样，以防止在采样过程中的作假或伪造食品。所有采样用具都应清洁、干燥、无异味、无污染食品的可能。应尽可能避免使用对样品可能造成污染或影响检验结果的采样工具和采样容器。3.准确性：性质不同的样品必须分开包装，并应视为来自不同的总体；采样方法应符合要求，采样的数量应满足检验及留样的需要；可根据感官性状进行分类或分档采样；采样记录务必清楚地填写在采样单上，并紧附于样品。4.及时性：采样应及时，采样后也应及时送检。尤其是检测样品中水分、微生物等易受环境因素影响的指标，或样品中含有挥发性物质或易分解破坏的物质时，应及时赴现场采样并尽可能缩短从采样到送检的时间。（二）样品采集1.采样应注意样品的生产日期、批号、代表性和均匀性（掺伪食品和食物中毒样品除外）。采集的数量应能反映该食品的卫生质量和满足检验项目对样品量的需要，一式三份，供检验、复验、备查或仲裁，一般散装样品每份不少于0.5kg。2.采样容器根据检验项目，选用硬质玻璃瓶或聚乙烯制品。3.液体、半流体饮食品如植物油、鲜乳、酒或其他饮料，如用大桶或大罐盛装着，应先充分混匀后再采样。样品应分别盛放在三个干净的容器中。4.粮食及固体食品应自每批食品上、中、下三层的不同部位分别采取部分样品，混合后按四分法对角取样，最后取有代表性样品。5.肉类、水产等食品应按分析项目要求分别采取不同部位的样品或混合后采样。6.罐头、瓶装食品或其他小包装食品，应根据批号随机取样，同一批号取样件数，250g以上的包装不得少于6个，250g以下的包装不得少于10个。7.掺伪食品和食物中毒的样品采集，要具有典型性。[问答题]15.食品卫生微生物检验样品的采集和处理正确答案：详见解析参考解析：（一）样品的采集1.采样数量：每批样品要在容器的不同部位采取，一般定型包装食品采取1袋/瓶(不少于250g)及散装食品采取250g。2.采样方法(1)采样必须在无菌操作下进行。(2)根据样品种类，袋装、瓶装和罐装食品，应采完整的未开封的样品。如果样品很大，则需要无菌采样器取样；固体粉末样品，应边取边混合；液体样品通过振摇混匀；冷冻食品应保持冷冻状态（可放在冰内、冰箱的冷盒内或低温冰箱内保存），非冷冻食品需在1～5℃中保存。(3)采样标签：采样前或后应贴上标签，每件样品必须标记清楚（如品名、来源、数量、采样地点、采样人及采样时间等）。（二）运送样品送到微生物检验室应越快越好。如果路途遥远，可将不需冷冻样品保持在1～5℃环境中（如冰壶）。如需保持冷冻状态，则需保存在泡沫塑料隔热箱内（箱内有干冰可维持在0℃以下）。送检时，必须认真填写申请单，以供检验人员参考。微生物检验室接到送检申请单，应立即登记，填写实验序号，并按检验要求，立即将样品放在冰箱或冰盒中，积极准备条件进行检验。（三）保存与处理各食品微生物检验室必须备有专用冰箱存放样品。一般阳性样品，发出报告后3天（特殊情况适当延长）方能处理样品。进口食品的阳性样品，需保存6个月方能处理。阴性样品可及时处理。检验完后，检验人员应及时填写原始记录，签名后，送质控办出具检验报告。[问答题]16.艾滋病检测样品的采集处理和送检正确答案：详见解析参考解析：（一）HIV抗体、抗原检测最常使用的样品是血清或血浆。1.血清样品采集和处理：用一次性注射器或真空采血管抽取3～5ml静脉血，室温放置1～2小时，待血液凝固、血块收缩后再离心，尽可能地吸出血清备用。2.血浆样品采集和处理：抗凝剂最常用的是K[2.gif]EDTA，用一次性注射器抽取3～5ml静脉血，转移至加有抗凝剂的试管，或直接用加有抗凝剂的真空采血管，反复轻摇，室温放置，血浆和血细胞会分层，尽可能地吸出血浆备用。3.送检要求(1)经HIV初筛实验室进行初筛检测后，若需上送的样品，只送血清或血浆，标本量要求达到1ml，最少不能低于0.7ml，不符合要求的标本将可能被拒收。标本用螺口的血清管装，在管外标记好病人姓名；每份标本需填写HIV复检送检单，表格内资料要填写齐全，送检时与标本分开放置。(2)应采用WHO提出的三级包装系统第一层容器：装样品，要求防渗漏。样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的编号或受检者姓名、种类和采集时间。在试管的周围应垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。随样品应附有送检单，送检单应与样品分开放置。第二层容器：要求耐受性好、防渗漏、容纳并保护第一层容器，可以装若干个第一层容器。将试管装入专用带盖的容器内，容器的材料要易于消毒处理。第三层容器：放在一个运输用外层包装内，应易于消毒。在第三层容器外面要贴标签（数量，收、发件人）。（二）HIV核酸定性检测最常用的样品是血清、血浆或血细胞。1.血清样品采集和处理：同HIV抗体、抗原检测。2.血浆和血细胞样品采集和处理：抗凝剂最常用的是K[2.gif]EDTA，采集的抗凝血应在4～8小时内分离PBMC和血浆，否则应在24～48小时内分离血浆和血细胞。3.样品的运送和保存：4℃冷藏送检采集的抗凝全血，采集后务必在24小时内送到目的实验室。分离出的血清、血浆、血细胞、PBMC均立即放入﹣80℃冰箱备用。样品的包装同上述三层容器包装。（三）HIV核酸定量（病毒载量）测定最常用的样品是血浆。1.抗凝剂的选择：不同病毒载量检测方法选用不同