生物化学实验醋酸纤维薄膜电泳法分离血清乳酸脱氢酶同工酶_第1页
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醋酸纤维薄膜电泳法分别血清乳酸脱氢酶同工酶【目的】．把握电泳法分别血清乳酸脱氢酶同工酶的原理与技术。．生疏测定血清乳酸脱氢酶同工酶的临床意义。【原理】H〔多分布于〕。依据亚基不同，LDH同工酶分为以下五种〔3-8〕。表3-8LDH同工酶的分类与组成分类分类LDH1亚基组成HHHH(H4)LDH2HHHM(H3M)LDH3HHMM(H2M2)LDH4HMMM(HM3)LDH6MMMM(M4)LDHpH8.6过醋酸纤维薄膜电泳可以将血清样品中的各种LDH以乳酸钠〔钾〕为基质，在有氧化型辅酶Ⅰ存在时，LDH可是乳酸脱氢生成NAD+复原为NADH+H+，NADH+H+又将氢传递给吩嗪二甲酯硫〔NBT)，使其复原为紫LDHLDH活性成正比。其反响如下：LDH〔3-8〕。将各谱带洗脱进展比色分析，即可求得各同功酶的相对百分比。图3-8LDH同工酶电泳图谱【器材】．电泳仪．电泳槽〔用二层滤纸或纱布搭桥〕．恒温水浴．分光光度计．点样器．白瓷盘．玻璃板．镊子【试剂】．pH8.6巴比妥电泳缓冲液〔离子强度0.05〕20.6g，巴比妥3.68g，蒸馏水加至2000ml。．pH7.5磷酸盐缓冲液〔0.1M〕磷酸二氢钾2.16g，磷酸二氢钠30.13g，蒸馏水加至1000ml。箱保存。．吩嗪二甲酯硫酸盐液0.5g，蒸馏水加至500ml。．氯化硝基四氮唑蓝液

℃冰1.25gpH7.5300ml(．1M乳酸钠液〔或0.5M乳酸钠液〕70%～80%液体乳酸钠8ml200ml为0.5M70%～80%16ml，加水到200ml为1M乳酸钠液。．染色应用液NAD+40mg0.1M磷酸盐缓冲液4ml12ml，1M乳4ml1.2ml．洗脱剂9份，无水乙醇1份，混匀。．固定液10%【操作】．预备15～20min〔液面，待膜全部潮湿后在将膜浸入液内〕。取出后用干滤纸吸去多余的水分。．点样应细窄均匀集中〕。．电泳〔点样面〕朝下，点样端在阴极端，膜条与滤纸紧贴、拉直，然后盖上槽盖，平衡5min后即可通电。

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