蛋白质和酶的分离与纯化_第1页
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文档简介

化学办法:通过多个化学试剂对细胞膜的作用,使细胞破碎的办法如:甲苯、丙酮、氯仿和非离子型的表面活性剂(Triton粗分:将得到的蛋白溶液先运用简朴、快速、易解决的办法除去大部分杂蛋白。如:盐析、离心、有机溶剂沉淀等。避免蛋白质的变性(pH、适合的温度和缓冲体系等(一)蛋白质属于生物大分子之一,分子量从1100万之巨,其分子的直径可达(25℃时的饱和度为4.1mol/L,767g/L;03.9mol/L676g/L;在这一溶解度范畴内,许多蛋白都能pH4.5-5.5之间,影响盐析的因素:①温度:②pH(二)①葡聚糖凝胶(Sephadex)(>120℃),②琼脂糖凝胶(Sepharose):是一种天然多孔凝胶,孔径大,合用于大分子量分子的(三)------

H+团团团

R-SO-- R-SO--Na 强碱型阴离子交换剂:季胺[R-N+(CH3)3-OH (R-N+HH2-OH-(R-N+HCH3H-OH-[R-N(CH3)2H-OH-

++++++R-N+(CH3)3-OH- R-N+(CH3)3-Cl-(四)根据蛋白质特异性进行分离-

实验 IgIgG70%。7070余种血清蛋白中分离出γ-酸铵饱和度在50%下列时,可采用饱和硫酸铵溶液法,饱和硫酸铵溶液的加入量按下式计V=V0(C2-C1)/(100-C2)V=V0(C2-C1)/(1-V:应加入饱和硫酸铵溶液的体积;5①正常血清(人、兔、狗0.0175mol/LDEAE-⑤纳氏试剂:碘化汞和碘化钾的碱性溶液,与氨氮反映生成淡红棕色的化合物(410-425nm)⑥20%2201A1.0ml(pH6.3)复溶。 10-15cm。0.0175mol/L磷酸缓冲液(pH6.3)滴/min2min11滴于C样。

实验二γ-55种蛋白质β9.0-γ6.85-15.6-55种蛋白质β9.0-γ6.85-15.6-响,下表是血(pH8.610B31cmA,B,C电泳:粗糙面对下置于电泳架上,

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