宫颈病变与hpv-dna检测的相关性研究

宫颈病变与hpv-dna检测的相关性研究

子宫颈癌是妇科常见的肿瘤之一，发病率位于女性肿瘤的第二位置，其次是乳腺癌。每年约有50万新发病例,其中80%的病例发生在发展中国家。我国宫颈癌的发生率和病死率均约占世界的1/3。现已明确HPV(humanpapillomavirus)感染是宫颈癌发生的主要病因,应用宫颈脱落细胞学检查可以早期发现并治疗HPV感染引起的宫颈组织病变,有效预防宫颈癌的发生。本研究对妇科门诊宫颈炎、CIN患者进行新柏氏液基薄层细胞学(TCT)技术筛查并与病理学诊断相结合,并进行高危型HPV16/18型荧光定量PCR检测。发现HPV高危型患者CIN发病率较高,特别是高度病变。从宫颈上皮内瘤病变(CIN)发展到宫颈癌是一个较长的过程,因此及早发现高危型HPV感染,及早发现和治疗CIN患者以阻断宫颈癌的发生,是当前医学预防和研究的重点之一。南宁市妇幼保健院2004年1月~2006年8月对400例患者开展人乳头瘤病毒感染与子宫颈上皮内病样变相关关系的研究,本文通过对我院TCT技术筛查与病理学诊断相结合、对宫颈炎和CIN一级及其以上(≥CIN1)病例各200例进行HPV16/18型荧光定量PCR检测病例分析,总结评价TCT联合HPV-DNA检测在宫颈病变诊断中的价值。数据和方法1.院专科门诊就诊患者宫颈炎、CIN患者各200例均来自于2004年1月~2006年8月在我院妇科门诊就诊患者,年龄19~62岁。宫颈炎对照组200例经TCT技术筛查和阴道镜检查诊断为宫颈炎,宫颈病变组200例经TCT技术筛查诊断为宫颈病变≥不典型鳞状细胞(≥ASC),经病理学诊断为宫颈病变≥CIN1。2.细胞涂片的制备采用颈管刷收集子宫颈外口、宫颈管的脱落细胞,将采集的细胞立即洗入有保存液的样本保存瓶中,经过ThinPrep2000处理仪对样品进行处理,就可以得到一张薄而均匀的直径为2cm大小的圆形细胞涂片。剩余的TCT标本可送往PCR实验室作HPV-DNA荧光定量检测。3.核酸检测试剂盒罗氏-Lightcycler全自动荧光定量PCR检测仪,HPV16/18型核酸检测试剂盒,购于中山医科大学达安基因股份有限公司。设阴性对照、临界值对照、强阳性模板经稀释成103、104、105、106、107,用于做标准曲线,检测结果≥500拷贝者为阳性。4.统计方法采用χ2检验统计分析结果。5.鳞状上皮细胞的asc-h细胞学诊断采用TBS描述性报告方式,本研究所涉及的细胞学异常诊断包括:非典型鳞状细胞(atypicalsquamouscells,ASC),包括不明确意义的非典型鳞状上皮细胞ASC-US和不除外高度病变的非典型鳞状上皮细胞ASC-H);低度鳞状上皮内病变(low-gradesquamousintraepitheliallesion,LSIL);高度鳞状上皮内病变(high-gradesquamousintraepithelialesion,HSIL)。荧光定量pcr检测1.200例宫颈病变的TCT技术筛查诊断和病理学诊断结果:见表1。2.以病理学诊断为标准对200例宫颈病变与200例宫颈炎进行HPV16/18型荧光定量PCR检测,结果见表2。以上结果表明,200例宫颈病变≥CIN1的HPV16/18型感染69例,感染率为34.5%(69/200),明显高于宫颈炎对照组(感染率为8.0%),两组结果比较有显著性差异(χ2=41.9,P<0.005),特别是25例宫颈病变≥CIN2的宫颈上皮内高度病变的病例,HPV16/18型感染18例,感染率高达72.0%(18/25)。技术联合hpv-dna检测筛查妊娠合并用药1.关于宫颈脱落细胞学检查:宫颈脱落细胞学的开展显著降低了宫颈癌的发病率。通过对宫颈直接观察或取材分析,如脱落细胞学检查,可以早期发现宫颈存在的问题。长期应用的巴氏五级诊断方法由于不能完全反映宫颈病变的状态,并且不能与组织学诊断相对应,又难以满足临床工作的需求。1988年提出的Bethesda系统(TBS)以明确、恰当的方式表达细胞学判读的结果,便于与临床医师的交流与沟通。2001年再次修订的Bethesda系统,将鳞状上皮细胞异常分为4类:非典型鳞状细胞(ASC,包括ASC-US和ASC-H)、低度鳞状上皮内病变(LSIL,包括HPV/CINⅠ),高度鳞状上皮内病变(CINⅡ/Ⅲ,包括可疑浸润)、鳞状细胞癌。本研究所采用病例均为细胞学≥ASC以上病变。我院2002年引进TCT技术,它是一种比较新的脱落细胞制片技术,该技术改变了传统的涂片方法,几乎100%的样品细胞都被收集到装有保存液TCT专用瓶子中,细胞固定及时,形态结构不容易发生改变,细胞随机均匀分布,并且湿固定的细胞核结构清晰,易于鉴别,尤其是HSIL。与传统巴氏涂片方法相比,TCT技术检查能非常显著地提高对低度及其以上病变的检出率。TCT技术和TBS描述性细胞学诊断可以提高并与病理学诊断结果的一致性(表1),对细胞学形态特征表现为挖空细胞、角化不良细胞、湿疣外底层细胞的患者可以诊断或提示为HPV感染。因此,应用TCT技术联合HPV-DNA检测筛查宫颈癌势在必行。2.关于高危型HPV检查:HPV感染是子宫颈癌的主要致病因素。按其与癌发生危险性的高低分为高危型和低危型。低危型HPV主要引起肛门皮肤及男性外生殖器、女性大小阴唇、尿道口、阴道下段外生性疣类病变和低度宫颈上皮内癌变。高危型HPV除引起外生殖器疣外,更可以导致外生殖器癌、宫颈癌和高度宫颈上皮内瘤变。本研究采用罗氏-Lightcycler全自动荧光定量PCR检测仪,HPV16/18型核酸检测试剂盒,由于实验条件所限,只研究最常见的高危型HPV16/18与CIN关系,结果显示200例宫颈病变≥CIN1的HPV16/18型感染69例,感染率为34.5%,明显高于宫颈炎对照组的8.0%,两组结果差异有统计学意义(P<0.005),说明高危型HPV16/18感染与宫颈上皮内瘤变密切相关。HPV高危型患者CIN发病率明显增高。尤其是25例宫颈病变≥CINⅡ的宫颈鳞状上皮高度病变和宫颈鳞癌患者,HPV16/18型感染18例,感染率高达72.0%(18/25),明显高于宫颈鳞状上皮低度病变CINⅠ组的感染率29.1%(51/175),两组结果比较差异有统计学意义(χ2=17.78,P<0.005),本研究证实,随着病变级别增高,高危型HPV阳性率愈高,提示高危型HPV的存在在宫颈病变发展中的重要作用。HPV检测在宫颈病变的检查中有重要意义;高危型HPV患者CIN高度病变发生率明显增高,此结论与上海市长宁区妇幼保健院和复旦大学附属肿瘤医院的唐礼榕和张志毅研究相一致。与北京大学人民医院妇科赵昀等的研究相一致。因此,HPV-DNA高危型阳性者是宫颈癌筛查的高危人群,应加强随访,由此可见,高危型HPV16/18阳性预示着CIN的存在特别是CINⅡ、CINⅢ、宫颈鳞癌的存在或者将来有可能发展为CINⅡ、CINⅢ、宫颈鳞癌的可能。现在,人们对HPV感染与宫颈病变的关系的认识逐渐统一:HPV感染是宫颈上皮内瘤病变及宫颈癌发生的必要因素。3.无论是细胞学(TCT技术)或是高危型HPV检测,均是临床常用的宫颈病变检查方法。通过细胞学检查可以明确患者是否存在细胞学的改变,因细胞学诊断受阅片医师主观影响较大,使细胞学的可重复性较差。高危型HPV检测采用标准化试剂盒,人为主观因素影响小,可了解患者是否存在和宫颈癌关系密切的高危型HPV感染,从而对患者将来发生宫颈病变的危险性进行预测,但还应结合其他检测才能判断患者目前的病变程度,如细胞学、阴道镜、病理学。HPV感染所引起的疾病的发展通常要经过潜伏感染期、亚临床感染期、临床症状期和HPV相关肿瘤期。对于潜伏感染期和亚临床感染期,PCR可以检测到HPV的存在,但在感染初期,部分患者无细胞