益生菌剂对草鱼生长性能的影响

益生菌剂对草鱼生长性能的影响

鱼是中国重要的食用鱼类之一，具有很强的抗病性。然而，随着大规模高密度育种的到来，鲤鱼的抗应激能力、疾病增多和成活率下降。近年来鲫鱼的细菌性疾病(赤皮、鳃、出血及肠炎),病毒性出血病和鱼体表、体内寄生虫病(锚头鳋)等时有发生,并有日渐增加的趋势。养殖户用漂白粉、敌百虫、诺氟沙星、孔雀石绿、呋喃唑酮、氟哌酸等药物来预防治疗或者促进生长,但这些药物导致的药物残留,耐药苗株的产生,环境污染,以及二重感染等副作用越来越突出,严重阻碍鲫鱼养殖业健康持续发展。许多研究表明,鱼类具有稳定的肠道菌群,乳酸杆菌是肠道具有生理意义的菌群,以乳酸杆菌制成的益生菌制剂是近年发展起来的新型绿色饲料添加剂,在虾类和鲤养殖中,能起到改善肠道菌群,防病治病,促进生长等性能。以乳酸杆菌制成的益生菌制剂对鲫鱼肠道菌群及生长有怎样的影响,尚未见报道。笔者对这些问题进行了初步研究,旨在探讨益生菌在鲫鱼养殖中的应用前景。1材料和方法1.1酸杆菌配制而成益生菌剂由本实验室从鲫鱼肠道分离的一株乳酸杆菌配制而成。将乳酸杆菌用LBS培养基25℃培养48h后收集菌体,用PBS将菌浓度调至1.0×108个/ml的菌悬液。1.3次饲养重复与投喂试验鱼来自绍兴县灵芝镇央茶湖,选用平均体质量(23±2)g,活泼无外伤的鲫鱼。饲养前用5%的NaCl水溶液消毒鱼体后分成对照组和益生菌剂组,每组4个重复。每组鲫鱼33条,称质量后饲养于水族箱中并用充气泵增氧。各组定时投喂饲料,按鱼体质量的2%投喂,早晚各1次。开始2d(2006年4月19—20日)各组投喂相同的人工配制饲料(绍兴科盛饲料公司),以后对照组投喂人工配制饲料,益生菌剂组投喂在表面喷有益生菌剂液的饲料(250ml/kg)。每天早晨虹吸出残饵和排泄物,5d换新鲜曝气自来水1次。1.4肠道菌群测定2006年4月20日、4月25日、4月30日、5月6日、5月11日分别每组随机挑3条鱼进行肠道菌群检测。5月11日将各组剩下的鱼称质量并计算平均鱼体质量。培养期间统计各组鱼体死亡数。1.5去肠、去肠,剪取后肠鱼体随机采集后,用75%酒精擦拭鱼体表面进行消毒,无菌解剖,展现并分离肠道,用75%的酒精棉球擦拭肠管外壁,用无菌棉线分别结扎中肠与后肠,后肠与肛门交界处,用无菌剪刀剪取后肠。称量肠段质量后,剪碎放入装有玻璃珠和10ml无菌水的三角瓶内,充分振摇,制成10-1的后肠稀释液,再稀释得到10-2、10-3、10-4、10-5稀释液。1.6培养基的筛选选用几种常用的培养基进行好氧菌总数、厌氧菌总数以及各种肠道细菌的分离培养。好氧菌总数、大肠杆菌(Escherichiacoli)、肠球菌(Enterococcus)分别选用营养琼脂培养基,EMB培养基,EC培养基于25℃培养24h;厌氧菌总数、乳酸杆菌(Lactobacillus)、双歧杆菌(Bifidobact)、产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)分别选用EG培养基,LBS培养基,BBL培养基,SPS培养基,于25℃、72h厌氧培养。1.7计算细菌的数量各项肠道菌群指标的平板菌落计数方法参照文献。将计数结果(cfu/g)取对数记录。1.8饲料系数及成活率/比例增重率/%=[(平均末质量-平均初始质量)÷平均初始质量]×100%饲料系数=总摄食量÷(总末质量+死亡鱼质量-总初始质量)成活率/%=(试验末鱼尾数÷试验初始鱼尾数)×100%2结果与讨论2.1缺乏能混养菌竞争菌的肠道各组鲫鱼肠道菌群测定结果见表1。由表1可见,大肠杆菌和肠球菌只在少部分鲫鱼肠道存在,大部分鲫鱼肠道未见这两种菌,说明对鲫鱼肠道来说它们是非常住菌(过路菌)。乳酸杆菌、双歧杆菌、产气荚膜梭菌在所有鲫鱼肠道中均存在,是常住菌群,这与王红宁等的研究相符。2.2益生菌活性测定正常肠道微生物菌群在机体内构成了一道天然屏障,对动物的营养、生长、健康、防病、免疫等方面起着重要作用。双歧杆菌和乳酸杆菌是动物肠道最具生理意义的益生菌,对动物有益无害。产气荚膜梭菌是一种致病菌,可分泌外毒素,对动物有毒害作用。诸多研究表明,增加动物肠道厌氧菌、双歧杆菌和乳酸杆菌含量,减少好氧菌、产气荚膜梭菌含量能促进动物的生长发育、抗病防病。将表1中益生菌剂组与对照组鲫鱼肠道的好氧菌总数、厌氧菌总数、乳酸杆菌、双歧杆菌、产气荚膜梭菌,分别做同一培养时间的成对T检验。试验结果表明,投喂益生菌剂后,好氧菌极显著减少(P<0.01),厌氧菌总数、乳酸杆菌、双歧杆菌极显著增加(P<0.01),产气荚膜梭菌显著减少(P<0.05)。说明益生菌剂中的乳酸杆菌能定植在鲫鱼肠道,有效改善鲫鱼肠道菌群,进而有利于鲫鱼生长和成活。这和国内外学者的研究相符。2.3益生菌对水产动物的影响各组鲫鱼生长成活测定结果见表2。由表2可见,益生菌剂组的增重率显著高于对照组,饲料系数显著低于对照组,成活率极显著高于对照组。说明所选浓度的益生菌剂能提高鲫鱼对饲料的利用率,促进鲫鱼生长和成活。其他学者的研究也表明益生菌能促进水产动物的生长和成活。王斌认为益生菌剂在发酵和代谢过程中,产生促生长素之类的物质和各种酶类,并提高动物的消化酶活性,有助于动物的消化吸收,进而促进动物生长。赵燕飞等认为益生菌剂促进水产动物成活的原因是益生菌可以定植在鱼类肠道,通过拮抗外袭菌和致病菌、促进肠黏膜SigA的分泌、促进免疫器官的发育和生长、激活巨噬细胞活力、防止有毒物质胺和氨的积累等作用来增强鱼类的免疫力,进而提高鱼类的抗病能力和成活率。3实际应用推广问题乳酸杆菌制成的益生菌剂能改善鲫鱼的肠道菌群,提高鲫鱼对饲料的利用率,促进鲫鱼的生长和成活,在鲫鱼养殖业具有广阔的发展前景。实际应用推广需要解决如下三个问题:一是益生菌的浓度。本试验参考其他学者的研究,选用了一个试验