金银花对实验性大鼠宫颈炎的疗效观察

金银花对实验性大鼠宫颈炎的疗效观察

金银花是中医的常用品种。这是废灌木植物、红腺植物、山银花或毛花的干燥花蕾，也被称为银花和双花。蜂蜜及其与植物中的绿色原酸（包括绿色原酸和异绿色原酸）、黄酮、三醇吡啶、环烯醚、水杨酸等化合物的有效成分，具有多种药理作用。临床报道金银花多用于内外科炎症,如肺炎、急性细菌性痢疾、婴幼儿腹泻、眼科急性炎症、外科化脓性疾患以及荨麻疹等,目前国内外的研究证实金银花对慢性宫颈炎疗效确切,但机制尚不清楚。本研究通过观察金银花对大鼠宫颈白介素(IL)-1β和前列腺素(PG)E2、肿瘤坏死因子(TNF)-α的影响,以探讨它的作用机制。1材料和方法1.1试剂盒的制备金银花,购自张仲景大药房;IL-1β(批号:20091203)、PGE2(批号:20081012)、TNF-α(批号:20090419)试剂盒购自南京建成工程研究所。1.2动物SD大鼠,雌性,200～250g,郑州大学实验动物中心提供(动物许可证号:豫动字P00101003)。1.3仪器倒置显微镜(NikonEclipseTS100);CL8000全自动生化分析仪(岛津)。1.4苯酚胶浆的制备苯酚胶浆自配,苯酚5g,阿拉伯树胶15g,加蒸馏水20ml溶解,制成苯酚胶浆;金银花类,金银花适量,加入阿拉伯树胶15g,加蒸馏水20ml溶解,配制成(25,50,100g/kg)胶浆;消糜阴道泡腾片,采用上述方法,配制成50g/kg胶浆。1.5方法1.5.1制备浓度的制备金银花加8倍量水,浸泡2h,煎煮1.5h,过滤,残渣加5倍水,继续煎煮1h,过滤并加水重复煎煮1次,合并滤液,浓缩至1g/ml,并稀释成所需浓度,备用。1.5.2大鼠阴道造模及分组SD大鼠喂养适应1w后,注射器轻轻插入大鼠阴道约1cm处,给以0.1ml25%苯酚胶浆注射,另取10只作为对照组,给以赋形剂0.1ml阴道内注射。所有组每天2次,连续5次。造模4次后模型组部分大鼠阴道有白色分泌物,阴道红肿,充血,继续造模1次。选择造模成功的50只大鼠按体重随机分为5组(n=10):模型组,金银花低、中、高剂量组(25,50,100g/kg),消糜阴道泡腾片组(50g/kg)。未造模10只作为对照组。造模成功后开始给药,给药组动物用1ml注射器吸取药液注入阴道深处,按照按体重分别0.1ml/200g给药,每天2次,对照组、模型组给以等量基质,连续10d给药后处死。1.5.3组织病理学检测末次给药次日,立即处死大鼠,取阴道至子宫分角处组织。一半称重后剪碎,用PBS冲洗2遍后用双蒸馏水1∶6研磨成组织匀浆,3000r/min,离心10min后取上清液1ml检测。1.5.4生物化学按照试剂盒说明书检测宫颈组织IL-1β和PGE2、TNF-α的含量。1.5.5常用石蜡切片和he染色技术另一半阴道至子宫分角处组织随即放入装有10%甲醛液中固定,24h后常规石蜡切片技术和HE染色技术,光学显微镜下观察宫颈细胞结构、变性、坏死、炎症反应等病理改变。1.6统计方法计量资料均以x¯±sx¯±s表示,应用SPSS12.0统计软件进行统计分析,多组间比较采用方差分析。2结果2.1金银花对妊娠中il-1和pge2含量的影响PGE2的影响模型组IL-1β和PGE2较对照组明显升高(P<0.05),金银花治疗组与对照组相比,金银花各组IL-1β和PGE2水平有不同程度的升高,不同剂量金银花治疗后,相比于模型组,均有明显下降并呈剂量-效应关系(P<0.05或P<0.01),说明金银花可以降低宫颈组织中IL-1β和PGE2的含量。见表1。2.2金银花对阴道组织tnf-的影响模型组TNF-α较对照组明显升高(P<0.01),金银花治疗组与对照组相比,TNF-α水平有不同程度的升高,不同剂量金银花治疗后,相比于模型组,均有明显下降并呈剂量-效应关系(P<0.05或P<0.01),说明金银花可以降低宫颈组织中TNF-α含量。见表1。2.3组织病理学检查对照组无炎细胞浸润,黏膜下组织正常;模型组可见上皮糜烂,少数病例有黏膜溃疡,黏膜下层毛细血管扩张充血,炎细胞浸润,成纤维细胞增生;给药组与模型组相应部位比较,病变均明显较其他组轻,其鳞状上皮形态与对照组相似。见图1。3金银花对宫颈炎的影响宫颈炎是常见的女性生殖器炎症性疾病,常伴有黏膜上皮、腺体的不同程度增生及鳞状化生。本实验构建大鼠宫颈炎的病理模型,病理学检查可见有黏膜溃疡,黏膜下层毛细血管扩张充血,炎细胞浸润,成纤维细胞增生,通过不同剂量的金银花治疗后,部分坏死的宫颈黏膜处有肉芽组织机化,固有层增生,腔内未见大量炎性渗出物及坏死组织。部分宫颈黏膜已接近正常,未见明显异常改变。在机体对组织损伤和炎症反应上,一些细胞因子起重要促进作用,TNF-α主要是由巨噬细胞和单核细胞产生,是诱发细胞凋亡的重要因素,机体细胞因子失调,细胞因子TNF-α水平发生改变,并随着浓度增高,可引起局部炎症反应,导致组织损害,甚至多器官、多系统损伤。本研究表明金银花对宫颈具有一定的保护作用。PGE2是体内产生的前列腺素物质中的一种,具有较强的炎症免疫调节作用,炎症发生期,PGE2的水平常明显升高,通过不同金银花治疗,发现金银花能降低大鼠宫颈黏膜PGE2的表达,从而减轻炎症反应的发生,从而使相应的病理学改变也得到明显改善。IL-1β具有广泛的免疫调节、致热和介导炎症的作用,与相应受体结合后,可促进IL-2、TNF-α等多种炎症介质和细胞因子的分泌,过多的释放,对组织产生一定的伤害。本研究说明在各种细胞因子的影响下,IL-1β过度分泌,通过金银花治