全自动生化分析仪的常用检测方法

生化分析仪的常用检测方法

1整理ppt内容一概述二根本原理终点法三检测方法固定时间法连续监测法2整理ppt功能特点特点：自动化——机械化的仪器设备模仿代替手工操作优点：提高了工作效率减少了主观误差灵敏准确快速标准化3整理ppt分类管道连续流动式按结构原理分分立式——常用离心式干片式——急诊常用

小型按测定速度分中型大型超大型〔模块式〕按自动化程度分半自动全自动4整理ppt主要构成加样系统〔样品转盘试剂仓取样装置〕比色系统〔光源比色杯单色器检测器〕供排水系统数据处理系统5整理ppt内容一概述二根本原理终点法三检测方法固定时间法连续监测法6整理ppt根本原理临床生化分析仪最常使用的是——分光光度法分光光度法——是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法。

7整理ppt分光光度计组成光源样品池单色器检测器记录装置8整理ppt光吸收曲线溶液对不同波长光的吸收程度，通常用光吸收曲线来描述。9整理ppt讨论不同浓度的同一种物质，其吸收曲线形状相似λmax不变。而对于不同物质，它们的吸收曲线形状和λmax那么不同。不同浓度的同一种物质，在某一定波长下吸光度A不同，在λmax处吸光度A的差异最大。此特性可作为物质定量分析的依据。10整理ppt在分光光度法中,以______为纵坐标,以____为横坐标作图可得光吸收曲线。浓度不同的同种溶液,在该种曲线中其最大吸收波长_______，相应的吸光度大小那么_______，同一波长下摩尔吸数。波长不同相同吸光度相同11整理pptLamber-Beer定律：吸收光谱法根本定律描述物质对单色光吸收强弱与液层厚度和待测物浓度的关系Lamber定律：A∝lBeer定律：A∝C

入射光强度I0

透射光强度I

物体截面为S

厚度为l12整理pptLambert-Beer〔朗伯-比尔〕定律

当一束平行单色光通过均匀的非散射样品时，样品对光的吸光度与样品的浓度及厚度成正比

A=kcb

A---吸光度k---吸光系数c---溶液浓度

b---液层厚度13整理ppt吸光度透光度的负对数表示物质对光的吸收程度

A=-lgT=lg1/T=lgI0/ItT---透光度

I0--入射光强度

It--透射光强度

T=It/I014整理ppt吸光系数

定义：吸光物质在单位浓度及单位厚度时测得的吸光度。K值的大小取决于吸光物质的性质、入射光波长、溶液温度和溶剂性质等，与溶液浓度大小和液层厚度无关。但K值大小因溶液浓度所采用的单位的不同而异。

15整理ppt吸光系数

三种表现形式：摩尔吸光系数ε

吸光系数a

百分吸光系数E1%1cm16整理pptLambert-Beer〔朗伯-比尔〕定律

郎伯-比尔定律说明：当液层厚度固定时，溶液的吸光度与溶液的浓度成正比。即：A/C=const故：只要测出某种溶液的吸光度，将它与浓度的标准溶液吸光度进行比较，就可以算出该溶液的浓度。17整理ppt讨论：

1.Lamber-Beer定律的适用条件〔前提〕:入射光为单色光溶液是均匀，无散射溶液2.该定律适用于固体、液体和气体样品3.在同一波长下，各组分吸光度具有加和性如果溶液中同时存在两种或两种以上的吸光性物质,那么测得的该溶液的吸光度等于溶液中各吸光性物质吸光度的总和，即：A〔a+b+c〕＝Aa＋Ab＋Ac应用：多组分测定18整理ppt偏离Beer定律的因素依据Beer定律,A与C关系应为经过原点的直线偏离Beer定律的主要因素表现为以下两个方面：〔一〕光学因素〔二〕化学因素19整理ppt〔一〕光学因素1．非单色光的影响：Beer定律应用的重前提—入射光为单色光

照射物质的光经单色器分光后并非真正单色光其波长宽度由入射狭缝的宽度和棱镜或光栅的分辨率决定为了保证透过光对检测器的响应，必须保证一定的狭缝宽度这就使别离出来的光具一定的谱带宽度20整理ppt讨论入射光的谱带宽度严重影响吸光系数和吸收光谱形状E1＝E2A=E1C·LE1≠E2A与C不成线性关系，偏离Beer定律〔E2-E1)↑A与C偏离线性关系越严重结论：●选择较纯单色光〔Δλ↓，单色性↑〕●选λmax作为测定波长21整理ppt〔一〕光学因素2.杂散光的影响杂散光是指从单色器分出的光不在入射光谱带宽度范围内，与所选波长相距较远。杂散光来源：仪器本身缺陷；光学元件污染造成杂散光可使吸收光谱变形，吸光度变值。22整理ppt〔一〕光学因素3．反射光和散色光的影响：反射光和散色光均是入射光谱带宽度内的光直接对T产生影响。散射和反射使T↓，A↑，吸收光谱变形注：一般可用空白比照校正消除4．非平行光的影响：使光程↑，A↑，吸收光谱变形23整理ppt〔二〕化学因素溶液中的溶质可因c的改变而有离解、缔合、配位以及与溶剂间的作用等原因而发生偏离L-B定律的现象。例：在水溶液中，Cr(Ⅵ)的两种离子存在如下平衡

Cr2O42-+H2O⇌2CrO42-+2H+

定量分析方法(1)标准曲线法(2)标准溶液比照法〔外标一点法〕(3)吸光系数法25整理ppt标准曲线法——最经典方法

前提：固定仪器和固定条件

过程：配置标准溶液系列分别测定A

得C~A曲线样品测定A样查得C样26整理ppt标准曲线法27整理ppt标准溶液比照法在相同的条件下，配制浓度为cs的标准溶液和浓度为cx的试样溶液，在最大吸收波长处，分别测定二者的吸光度值为As、Ax，依据朗伯-比尔定律得:As=KbcsAx=Kbcx

那么:cx=cs*Ax/As28整理ppt标准溶液比照法29整理ppt吸光系数法吸光系数法又称绝对法，是直接利用朗伯-比尔定律的数学表达式A＝Kbc进行计算的定量分析方法。在手册中查出待测物质在最大吸收波长处的吸光系数或,并在相同条件下测量样品溶液的吸光度A，那么其浓度为：或30整理ppt内容一概述二根本原理终点法三检测方法固定时间法连续监测法31整理ppt终点法终点法——通过检测终点吸光度的改变大小来求出被测物含量。何为终点？如何判断？通常在反响终点附近连续选择两个吸光度值，求其平均值，根据两点的差值来判断反响终点。32整理ppt终点法终点时间确实认：一、根据时间-吸光度曲线如:Trinder反响测尿酸，反响曲线上3-5分钟时其A趋向稳定,故可将5分钟作为反响终点。二、根据被测物反响终点，结合干扰物的反响情况来确定如:溴甲酚绿法测血清白蛋白33整理ppt分类终点法：一点终点法二点终点法免疫比浊法双波长法34整理ppt一点终点法一点终点法——在时间-吸光度曲线上吸光度不再改变时，选择一个时间点测定吸光度值。通常在反响终点附近连续读两个吸光度，求出两点的平均值，并根据两点的差值判断反响是否到达平衡。35整理ppt一点终点法的设置：以R和S混合之前的空气空白、水空白或试剂空白的吸光度值为测定计算基点，以反响到达平衡的吸光度读数减去空白读数，校准曲线通过零点且成直线，对于反响速度快的多用。如：GLUTGCH等36整理ppt2023/11/2537AlT〔时间〕AS+R(吸光度〕一点终点法反响曲线37整理ppt计算公式：

C=(Am-Ab)*KAm----终点读数点的吸光度

Ab----试剂空白吸光度

K----校正系数38整理ppt二点终点法

第二试剂参加以前，选择某一点读取吸光度Am，经过一定时间后反响达终点后测第二个吸光度值An,利用两吸光度之差计算结果。第一点吸光度值由样本本身或第一试剂与样品的非特异性反响有关，相当于样品空白，可有效的消除样品自身的吸光度，如溶血，黄疸，脂血等的干扰。39整理ppt2023/11/2540AnTAR2AmS+R1(吸光度〕〔时间〕两点终点Ax=样本空白An-k0

Am〔体积校正因子〕k0=Sv+RlSv+R1+R240整理ppt两点终点法计算公式：

C=(An-K0*Am)*K

K0---体积校正因子K0=(Sv+R1)/(Sv+R1+R2)41整理ppt免疫比浊法

通过物质对光的散射或透射来测定物质含量的方法：散射比浊：特定蛋白分析仪透射比浊：自动生化分析仪通常作两点终点法分析，多采用多点校准。应用：用Ab测定Ag〔主要为微量蛋白：IG、C、APOA1/B、ASO、RF、CRP等〕，要求Ab过量，此时Ag-Ab复合物的生成量随Ag的增加而递增，光散/透射射强度与抗原量成正比。42整理ppt免疫比浊法优点：方法简便结果准确可用于自动化仪器检测缺点：抗体用量大达平衡时间长43整理ppt双波长法

消除样品中对测定有干扰的物质的影响；在试样中含有两个组分a和b时，假设要测定组分b,组分a有干扰，应设法消除组分a的吸收干扰。首先选择待测组分b的最大吸收波长λ1作为测量波长，然后用作图的方法选择参比波长λ2，使组分a在这两个波长处的吸光度相等。44整理ppt双波长法试样溶液在λ2和λ1两个波长处的吸光度之差，只与待测组分的浓度成正比，而与干扰组分的浓度无关45整理ppt干扰物质1.脂血：吸收光谱300～600nm呈下降趋势2.Hb：350nm、400nm、540nm、580nm吸收峰3.胆红素：300～500nm有吸收峰可见它们的吸收峰都较宽，且同测定波长有重叠现象。46整理ppt双波长法主波长的选择

反响体系中待测组分吸收峰对应的波长，尽量避开或减少来自试剂空白和样本空白对测定组分的干扰，提高特异性和灵敏度。47整理ppt双波长法辅助波长的选择：根据测定波长选择辅助波长，要求干扰物质在测定波长同辅助波长有相同的吸光度，待测物吸光度差异很大。如:钼酸铵法测P3＋用340nm，而Hb在340及380nm均有较高吸收峰，选380nm作为辅助波长。48整理ppt双波长法双波长测定优点：①消除噪音干扰②减少杂散光影响③减少样品本身光吸收的干扰49整理ppt固定时间法指在时间-吸光度曲线上选择两个测光点，这两点既非反响初始吸光度亦非终点吸光度，利用这两点吸光度差值计算结果。如：苦味酸法测肌酐50整理ppt固定时间法计算公式：

C=(A2-A1)*K

·●●A1A2T(吸光度〕51整理ppt连续监测法根据反响速度与待测物的浓度成正比，通过测定一段时间内吸光度的变化速率〔△A/min〕来计算待测物的浓度。酶活性测定常用52整理ppt酶促反响曲线53整理ppt连续监测法零级反响期---酶促反响速度到达并保持恒定速率进行反响，单位时间内的变化速率恒定不变。在零级反响期单位时间内的吸光度变化(反响速率△A/min)与酶活力呈正比。54整理ppt连续监测法测定时间的选择：监测时间应根据所用仪器不影响检测速度和结果的准确性选在时间反响进程曲线的线性期。通常：延迟时间：30-60秒监测时间：>120秒55整理ppt1.连续监测法

即零级反响速率法,亦称斜率法