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高效液相色谱法测定海泥中维生素d

维生素是海洋中营养成分的之一。其存在的形式和浓度直接影响着赤潮生物的生长、繁殖和代谢,关系到赤潮的形成和发展。例如,海泥中的维生素含量与海水中维生素含量的变化密切相关。如果能确定海泥中的维生素含量,则对研究其含量变化与赤潮现象之间的关系具有一定意义。维生素的种类很多,其中维生素D3是海泥所含维生素中重要的一种,对其含量的测定很有必要.维生素D3的分析方法主要有比色法、气相色谱法和高效液相色谱法等.高效液相色谱法作为常规分析方法,具有实用性.近年来用高效液相色谱法测定食品及饲料中维生素D3的报道较多,但未见其用于海泥样品的测定.本文用氯仿萃取海泥中的维生素D3并进行含量分析,实验结果表明,回收率为93.6%~94.8%,相对标准偏差小于1.90%.1实验部分1.1仪器和试剂1.1.1仪器、仪器和仪器高效液相色谱仪(LC10A,日本岛津公司),SPD—10A紫外检测器,旋转蒸发仪(SENCOR—201,上海申胜生物技术有限公司),数显单托盘电光天平(METTLERAE240),超声仪(BRANSON3510),去离子水机(MiLLi—Q50).所有玻璃仪器均以洗涤剂洗涤,经超声处理后用自来水反复冲洗,再用去离子水荡洗3次备用.1.1.2样品和测试方法维生素D3标样(固态,纯度99%,美国ChemService公司)氯仿(分析纯,广州化学试剂厂),甲醇(分析纯,广州化学试剂厂).海泥样品取自粤东近岸海域.1.2柱温和流动相色谱柱为C18柱,流速为1.5mL/min,柱温为室温,进样量为10μL,检测波长为253nm,流动相为V(甲醇)∶V(水)=98∶2.1.3标准溶液的配制称取0.0080g维生素D3标样,置于10mL棕色容量瓶中,用甲醇溶解定容,配制成浓度为800mg/L的贮备液,再取一定量的贮备液分别用甲醇稀释,配制成浓度为20,25,40,50,100,200,400mg/L的系列标准溶液.1.4超声-滤渣、浸提液、颗粒的制备称取2.5000g湿态海泥,置于100mL带塞的磨口锥形瓶中,加入30mL氯仿,浸泡15min,放入超声仪中超声30min后,用定量滤纸过滤于250mL的锥形瓶中.滤渣用60mL氯仿分3次震荡浸提,合并浸提液,于旋转蒸发器中蒸干.用甲醇溶解残留物,于10mL容量瓶中定容.2结果与讨论2.1检测波长的确定用紫外检测器检测维生素D3的波长多在250~290nm之间.选用253,264,267,284nm的4个波长进行测量,结果表明,253nm的波长测量灵敏度最高,检出限最低,故选用253nm的波长作为检测波长.2.2流动相流速的选择以V(甲醇)∶V(水)=98∶2的甲醇溶液为流动相.流动相流速为1.0mL/min时,色谱峰较宽,再加大流速,峰形有所改善,当流速达到1.5mL/min时,峰形较为理想,故选用1.5mL/min作为流动相流速.2.3标准曲线和检出限用配制好的系列标准溶液,按选定的色谱条件进行HPLC分析,结果如表1所示.以峰面积对标样浓度作图得工作曲线,曲线的回归方程y=15046c+296.2,相关系数为0.9998,检出限为0.072mg/L(信噪比S/N=3).在0~400mg/L的浓度范围内,方程有很好的线性关系.标样浓度为50mg/L的标准样品的维生素D3的色谱图如图1所示.2.4不同的预处理方法的比较取粤东近岸海域3个站点的海泥样品各2份,分别用文献中的方法和本法进行样品预处理,分析结果如表2所示.2.5多次测量中本测量回收率的变化称取2.5000g海泥样品3份,在每克样品中加入5μg维生素D3标样,按本法提取维生素D3并进行测量,结果如表3所示.由表3可知,在多次测量中本法的回收率变化都不大.2.6样品测定结果选用粤东近岸海域5个站点的样品各1份,按本法处理样品,经孔径为0.45μm的膜过滤后,以选定的分析测试条件对样液进行测定,6次平行测定的结果如表4所示,其中站点4的海泥的色谱图如图2所示.3方法的精密度与及

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