酸枣仁汤对抑郁症模型大鼠海马nf-、il-1、c-fos表达的影响

酸枣仁汤对抑郁症模型大鼠海马nf-、il-1、c-fos表达的影响

抑郁是一种以抑郁为主要特征的精神疾病综合征。临床表现为情绪低落、思维迟钝、言语动作减少、自罪感、工作失去兴趣、自觉无用、常有自杀倾向,与癌症及艾滋病并驾齐驱,被公认为是新世纪的三大疾病。在我国经济建设飞速发展的同时,社会及生活压力日趋加剧,越来越多的患者正遭受抑郁症的折磨。因此,加强抑郁症的防治,寻找积极、有效的治疗方法,具有非常重要的社会和经济意义。现代医学治疗效果不理想,且不良反应较多。祖国医学治疗抑郁症则具有副作用小,疗效好,治疗多层次、多途径、多靶点的优越性,并可明显减少单纯服用西药带来的药物毒副作用,在治疗抑郁症等精神疾病中有着不可替代的作用和广泛的前景。酸枣仁汤抗抑郁的实验研究甚少,本实验通过慢性应激和隔离孤养复制抑郁症大鼠模型,来探讨酸枣仁汤治疗抑郁症的作用机制和抑郁症的发病机制,为临床上酸枣仁汤治疗抑郁症提供科学的理论依据。1实验材料1.1实验饲料及饲料健康雄性清洁级SD大鼠72只,体质量(200±30)g,由黑龙江中医药大学基础医学院动物实验中心提供。合格证号:SCXK-(黑)2010-0008,大鼠专用饲料由黑龙江中医药大学基础医学院动物实验中心提供,饲料经过高压灭菌。实验过程中动物自由摄食和饮水(禁食、禁水应激除外),室温18℃~24℃(冷、热应激除外),相对湿度60%~70%。1.2制备水生动物、成药剂酸枣仁汤方由酸枣仁20g,知母10g,茯苓10g,川芎10g,甘草5g组成,剂量参考《金匮要略》原方。生药材购于黑龙江中医药大学附属第一医院药局,按照常规方法煎煮(将上述中药加水约600mL,浸泡约40min后煎煮,水沸后用文火继续煎煮约40min,过滤;第二次加水约400mL煎煮,水沸后用文火继续煎40min后过滤,合并两次滤液)。制成水煎剂,浓缩至0.5g/mL、1g/mL、2g/mL,4℃冰箱保存备用。阳性对照药氯丙咪嗪购于同泰药店(湖南洞庭药业股份有限公司生产,批号:98022)。1.3医学数码图像分析系统低速自动平衡离心机LDZ-2型;恒温冰箱(日本三洋电器有限公司生产)。电子天平(沈阳龙腾电子公司);电击箱(北京医科院药研所);石蜡切片机(莱卡2135型德国);显微摄影系统(OlymPusB×60日本);医学数码图像分析系统(麦克奥迪厦门公司)。DAB浓缩型试剂盒(中杉试剂有限公司);兔抗人TNF-α抗体、兔抗IL-1β抗体、兔抗c-fos抗体(中杉试剂有限公司)。2实验方法2.1给药及给药方案Wistar大鼠72只,饲养7天后,参考体质量和open-field评分,分为空白组、模型组、阳性对照组,酸枣仁汤高、中、低剂量组,共计6组,每组12只。于造模7天后,连续灌胃21天。大鼠给药量参考成人体表面积与大鼠体表面积比例换算,以成人每日生药量为准。阳性对照组每天给予0.36mg/kg氯丙咪嗪,酸枣仁汤按高、中、低剂量组每天分别给予酸枣仁汤生药量9.9g/kg、4.95/kg、2.475g/kg(给药量参考成人体表面积与大鼠体表面积比例换算,以成人每日生药量为准)。正常组、模型组给予等体积生理盐水。每日1次,连续给药21天。每7天复测体质量1次,根据体质量变化更新灌胃剂量。2.2慢性应激检测正常对照组每笼饲养6只,在实验中不接受任何刺激。其余各组每笼1只。在实验的28天内,接受7种不同的慢性应激,每天随机选取1种,同种刺激不连续出现,使大鼠不能预料将发生的刺激。慢性应激包括:足底电击,4℃冰水游泳,倾斜鼠笼,潮湿饲养,昼夜颠倒,禁水12h,禁食12h。2.3观测指标2.3.1蔗糖水蔗糖量的测定在实验开始第0天、28天进行,实验开始前24h对各组大鼠禁食,禁水,用含1%浓度的蔗糖水作为大鼠的饮用水,每瓶150mL,实验当天19时开始,做好标记,次日7时记录所有瓶中剩余蔗糖水量,计算出糖水消耗量。2.3.2免疫组化剂的制备实验第28天,大鼠称得体质量及行为学测试后,立即断头取双侧海马,置于10%甲醛中固定,石蜡包埋,进行免疫组化测定。免疫组化测定步骤:脱蜡,水化组织切片;微波修复抗原,绝缘酸缓冲液冲洗;3%H2O2去离子水孵育5~10min阻断内源性过氧化物酶,PBS冲洗,2min×3次;滴加一抗,4℃冰箱过夜,PBS冲洗,2min×3次;滴加IgG抗体HRP多聚体室温孵育30min,PBS冲洗,2min×3次;选用DAB显色;自来水充分冲洗;苏木素复染,梯度酒精脱水,二甲苯透明;树脂胶封片。2.4数据的统计处理所得数据均采用SPSS15.0进行统计学处理,数据结果均以表示,采用单因素方差分析(onewayANOVA)进行检验。3结果3.1酸枣仁汤对大鼠糖的消耗的影响见表13.2酸枣仁汤对大鼠马匹tnf-i、il-1和c-fos的发现程度的影响见表24酸枣仁汤治疗抑郁症的作用机制和发病机制抑郁症是一种常见的精神疾病,主要表现为情绪低落、兴趣减低、悲观、思维迟缓、缺乏主动性、自责自罪、饮食、睡眠差、担心自己患有各种疾病、感到全身多处不适、严重者可出现自杀念头和行为。其发病机制尚无定论,主要有单胺假说、神经递质受体假说、神经内分泌功能学说、免疫系统假说等。本实验通过慢性应激和隔离孤养复制抑郁症大鼠模型,来探讨酸枣仁汤治疗抑郁症的作用机制和抑郁症的发病机制。结果显示,实验后期,与空白组相比,模型组大鼠体重减轻、垂直、水平测试得分明显减少、糖水消耗减少;同时模型组大鼠出现类似抑郁症的症状,说明抑郁症模型较理想。越来越多的研究推测与免疫激活相关的细胞因子分泌可能引起抑郁症。TNF-α、IL-1β等前炎症性细胞因子通过激活下丘脑室旁核中含促肾上皮质激素释放激素(CRH)神经元,促使腺垂体释放促肾上腺皮质激素(ACTH),从而活化HPA轴,导致抑郁症。有研究显示,当机体遭受疼痛、缺氧、寒冷等刺激时,使大脑海马的痛感受性神经元被激活,从而导致海马神经元细胞过度增殖,c-fos蛋白的表达增加,启动CasPase级联反应,最终激活CasPase-3,导致海马神经