电针对去势大鼠血浆、脑垂体及下丘脑-内啡肽的影响

电针对去势大鼠血浆、脑垂体及下丘脑-内啡肽的影响

胖是临床上常见的代谢性疾病，通常伴有高血压、高血糖、冠状动脉粥样硬化、糖尿病和妊娠，这可能会影响人们的健康和生活。针刺减肥效应已经被大量的临床和实验证实,而且其效应与脑神经内分泌功能、饮食调控中枢的功能活动密切相关。但对针灸减肥作用规律的研究包括针刺的刺激强度,施针间隔及针刺疗程的长短等鲜有报道,而这些因素对针刺效应的影响至关重要。为此,笔者通过在去除卵巢造成更年期肥胖动物模型上采用不同的时间间隔、刺激强度及不同针刺疗程,观察针刺对大鼠体重的影响。并比较不同疗程时血浆、脑垂体及下丘脑组织内β-内啡肽(β-endorphin,β-EP)含量的变化,试图从神经内分泌的角度分析β-EP在针刺减肥中的作用。1-内啡肽-铜的制备1.1实验动物和分组健康成年Wistar雌鼠(240~270g)共140只,由中国医学科学院实验动物中心提供。第一部分实验观察不同电针(EA)刺激强度、频度对正常大鼠体重的影响:共70只,随机分为:对照组;1mA电针:1天针1次(1t/d),隔天针1次(1t/2d)、1周针1次(1t/周)、5mA电针:1t/d、1t/2d、1t/周组,每组各10例。第二部分实验观察不同的疗程去卵巢(OVX)肥胖大鼠体重的变化:70只大鼠随机分为:假手术组(n=10);单纯OVX组(n=30);OVX+EA组(n=30)。每组于去卵巢后6周记录针刺前体重及施针后2天,针刺2周,3周时各组动物体重。动物自由饮水和常规喂养。1.2肥胖大鼠的模型制备用乌拉坦(42mg/100g)和氯醛糖(5mg/100g)混合液腹腔注射麻醉后,置放雌性大鼠于俯卧位,在脊柱两侧最后一根肋骨下方凹陷处剃毛,碘酒皮肤表面消毒,酒精脱碘。用手术剪剪开一约1cm纵长的切口,以眼科钳分离肌肉后可看到一脂肪团,用镊子将脂肪组织夹出体外,钝性分离卵巢周围的脂肪组织,上下端分别结扎输卵管,剪断,即可摘除卵巢。缝合前创口内敷以少许青霉素粉抗炎,逐层缝合即可。对侧法同。1.3电针治疗以自制的鼠套固定动物于自制的木制鼠架上,针刺时大鼠处于清醒状态。针刺取穴:双侧“足三里”-“阳陵泉”,即每穴用半寸28号针灸针(华佗牌)各刺入一针,然后连接LH202H韩式电针仪。第一部分实验电针参数为:强度:1mA,5mA,频率:2/15Hz,每次持续30min;电针频度为:1t/d、1t/2d、1t/周。共4周。各组均于每周同一天测量和记录大鼠的体重变化。第二部分实验电针刺激强度1mA,频率2/15Hz,每次持续30min;分别给于2天,1周和3周。1.4取材及β-内啡肽的测定血浆:各组动物在实验结束时,用乌拉坦和氯醛糖混合液麻醉后,由心脏采血约3~4mL/只,注入含10%EDTA.Na230μL和抑肽酶20μL的试管中,混匀,静置约20min;然后,用离心机(Megafuge1.0R)低温(4℃)3000r/min离心5min,分离血浆。取离心后的血浆1mL放入指形管、薄膜封口,再置于低温冰箱保存(-70℃)待测。下丘脑-垂体组织:将动物用上述麻醉药深度麻醉后断头,在冰盘中迅速剥取脑垂体和下丘脑组织,称重后放入装有煮沸的生理盐水(1mL)的试管中,再于水浴锅中继续煮沸3min,吸干,加入1N冰醋酸0.5mL,于匀浆器中进行匀浆;再加入1NNaOH0.5mL混匀,室温下静置20~30min,然后低温(4℃)离心(3500r/min)20min,取上清液置于低温冰箱中保存(-70℃)待测。血浆和下丘脑及垂体组织中的beta-EP的含量采用放射免疫技术测定。操作步骤按照试剂盒说明进行,试剂盒由北京华英生物技术研究所提供。1.5统计学分析第一部分实验动物体重用每次测得的实际重量,第二部分实验计算各组动物体重变化的百分率。本实验所得数据用均数±标准差(x¯±s)(x¯±s)表示。组间比较采用方差分析(one-wayANOVA),每两组间比较用LSD检验,以P<0.05作为差异有显著性的标志。2结果2.1各组大鼠体重情况频度对动物体重的影响针刺前,针刺后第1、2周7组动物的体重各组间的差异没有显著性(P>0.05)。第3周开始:1mA-1t/d、5mA1t/d、1mA-1t/2d、5mA-1t/2d组动物体重分别明显低于1mA-1t/周、5mA-1t/周组及对照组(P<0.05);而每天和隔天1针两种强度电针的4组动物体重,以及每周1针两种强度电针,组间均没有明显差异(P>0.05);说明频度高的电针刺激可明显影响动物体重的增长(见表1)。2.2模型大鼠体重、体重增加的百分率,平均提高相比较,约束条件下的模型大鼠体重,显著提高未去卵巢的假手术组动物的体重和体重增加的百分率,在针刺治疗2天、2周后,模型组体重增加,布尔普纳马尔克氏原螯虾pf的双组pf的双组pfm由表2可见:假手术组动物体重增加率为5.3%,去卵巢的两组(针刺组和模型组)在去卵巢后第6周(针刺组为接受针刺治疗前),其体重均增加分别达30.9%和26.9%,说明该两组去势大鼠体重增加显著高于未去卵巢的假手术组动物的体重(P<0.05)。接受针刺治疗2天、2周后,针刺组体重不增反减,模型组体重增加的百分率显著高于针刺组和假手术组(P<0.05);至针后3周,针刺组体重增加的百分率仍低于模型组(10.0%vs21.0%),说明针刺可明显抑制去势大鼠体重的快速增长。2.3血浆-ep含量表3显示,与假手术对照组比,模型组2天、2周、3周亚组的血浆、2周、3周下丘脑组织、和3W亚组垂体组织β-EP的水平明显升高(P<0.05),电针组2天亚组垂体组织、2周组下丘脑组织中β-EP含量均明显升高(P<0.05)。与模型组相应的亚组比,电针组2天、2周、3周亚组血浆β-EP含量明显较低,2周时下丘脑组织β-EP明显升高,3周时明显下降,其差异均具有显著性(P<0.05);其余各亚组差异不显著(P>0.05)。说明电针在抑制去势大鼠体重增加的同时,并明显降低血浆β-EP的水平而增高下丘脑组织中β-EP的含量。3电针可显著控制体重、体质量和体脂质量本研究结果表明,在正常动物上,每天电针和隔天电针对大鼠体重增长的抑制作用明显强于每周电针1次;每周1次电针动物的体重反而稍高于对照组。提示:针刺抑制体重的增长需要频度较高的治疗。在去势动物上,电针可明显抑制其体重快速增长的百分率,电针2天、2周效果明显;电针3周其抑制体重增长率的作用有所减弱,但其增长率仍然低于模型组。提示在电针治疗后的初期,动物体重有一个快速下降阶段,随着针刺重复次数的增加,其针刺效应随之增加,而到了3周时针刺抑制体重的增长的作用有所降低。针刺参数是影响针刺临床疗效的一个重要因素,掌握针灸效应发生发展的时间特点,对提高针刺效果有确切的实践意义。姜军作等临床研究观察到:针刺治疗单纯性肥胖门诊病人,治疗30min后患者的体温、脉搏、呼吸、收缩压、脉压差均明显上升;基础代谢率、体质量、体脂百分率、体脂质量均明显下降。说明针刺可产生即刻的减肥效应。袁锦虹等对比了频率15Hz和频率2~15Hz,4mA对单纯性肥胖病人的效应,观察到平均(18.75±1.36)次针刺就能减体重5kg;两种电针频率的减重效应无明显差异。在食源性肥胖大鼠动物模型上,他们观察到:针刺组1.7次为快速减重期,每次降6.97g,8.32次为缓慢下降期,平均每次减0.81g。提示:针刺减肥的早期有一个体重快速下降阶段,然后呈现缓慢下降并渐趋稳定。该结果与我们的上述结果类似。本实验第二部分结果表明:模型组去卵巢6周后血浆、下丘脑组织、和垂体组织β-EP的水平先后明显升高;电针可使去卵巢后升高的血浆中β-内啡肽显著回降;下丘脑组织中β-EP含量2周进一步明显上调,3周时下调。说明电针在抑制去势大鼠体重增加的同时,并明显降低血浆β-EP的水平而增高下丘脑组织中β-EP的含量。下丘脑是动物饮食的调控中枢,也是体内十分重要的神经内分泌器官,对机体的活动的调节起着不可或缺的作用。目前的研究结果表明:单纯性肥胖多伴有内分泌紊乱,各种激素,尤其是胰岛素、性激素、肾上腺皮质激素等异常,针刺可调整机体内分泌的活动,其中包括对下丘脑功能活动的调节,最终实现减肥。β-EP是下丘脑生成并通过垂体分泌的一种内源性阿片样物质,由31个氨基酸组成,对机体由多种调节作用,包括镇痛、心血管活动、呼吸、体温、摄食和饮水行为的调节等,并参与精神活动和免疫调节。有人报告:肥胖病人基础血浆β-EP和胰岛素水平明显高于正常对照受试者,与体质量指数无相关性。据此,高β-EP血症可能是与肥胖特征有关的一种现象,可将β-EP做为肥胖症诊断的实验室参考指标之一。因此,本研究电针降低