基于薄层色谱法鉴别薏苡仁中甘油三油酸酯含量

基于薄层色谱法鉴别薏苡仁中甘油三油酸酯含量

为了评价和控制延科食品的材料质量，采用膜色谱法对不同产地的延科食品进行了识别，并对代表生产区的延科食品中甘油的含量进行了测定，为控制延科食品的质量提供了实验依据。1仪器和试剂盒1.1ech公司的纺粘设备Waters2695高效液相色谱仪(沃特世科技有限公司);Alltech-2000ES蒸发光散射检测器(ELSD,Alltech公司);AR2140万分之一电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司);AR520百分之一电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司);ZF1-I多功能紫外分析仪(上海嘉鹏科技有限公司);KQ-500E型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);DHC-9240型电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司);DF-15台式连续投料粉碎机(大德中药机械有限公司)。1.2gc-ms色谱甘油三油酸酯对照品(中国药品生物制品检定所,批号:111692-201002);薄层色谱硅胶G(青岛海洋化工有限公司);乙腈、二氯甲烷为色谱纯;石油醚(60~90℃)、乙酸乙酯为分析纯。不同产地薏苡仁经福建中医药大学中药鉴定教研室范世明高级实验师鉴定,见表1。2方法和结果2.1膜层析成像2.1.1对照溶液的制备取甘油三油酸酯对照品10mg,精密称定,置于10mL量瓶中,加石油醚制成1mL含1mg的甘油三油酸酯的溶液,即得。2.1.2供试品溶液的制备取薏苡仁样品,粉碎,称取粉末1g,加石油醚10mL,超声处理30min,滤过,滤液蒸干,残渣加石油醚1mL使之溶解,作为供试品溶液。2.1.3薏养殖仁对照药材溶液精密称取薏苡仁对照药材1g,加石油醚10mL,超声处理30min,滤过,滤液蒸干,残渣加石油醚1mL使之溶解,作为薏苡仁对照药材溶液。2.1.4该系统的薄膜启动2.1.4.油酸酯对照品、供试品、对照药材的总效果采用薄层色谱法,选择硅胶G为固定相,用0.5%羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂,分别吸取甘油三油酸酯对照品溶液、供试品溶液、对照药材溶液各10μL,点于同一硅胶G板上,以石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸(10∶3∶0.1)为展开剂,展至15cm,取出,晾干,置紫外灯(365nm)下检视,结果表明斑点不清晰。2.1.4.斑点的移动性在2.1.4.1项的基础上喷以0.5%香草醛-浓硫酸乙醇溶液并置紫外灯(365nm)下检视,主斑点可见但移至前沿。用石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸(25∶5∶1)为展开剂,展至15cm,取出,晾干,喷以0.5%香草醛-浓硫酸乙醇溶液,在105℃加热5min,置紫外灯(365nm)下检视,斑点清晰可见,分离较好,薏苡仁样品同对照品及对照药材色谱相应的位置上,显示相同的荧光斑点。2.1.5试品溶液的制备取不同产地薏苡仁样品,粉碎,称取粉末1g,加石油醚10mL,超声处理30min,滤过,滤液蒸干,残渣加石油醚1mL使之溶解,作为供试品溶液。采用薄层色谱法,选择硅胶G为固定相,用0.5%羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂,分别吸取甘油三油酸酯对照品溶液、供试品溶液、对照药材溶液各10μL,点于硅胶G板上,用石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸(25∶5∶1)为展开剂,展开至15cm,取出,晾干,喷以0.5%香草醛-浓硫酸乙醇溶液,在105℃加热5min,置紫外灯(365nm)下检视,斑点清晰可见,薏苡仁样品与对照品及对照药材色谱在相应的位置上,显示相同的荧光斑点。2.2测定椰子含量2.2.1流动相、柱温度和分离器色谱柱:ApolloC18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈-二氯甲烷(65∶35);流速:1mL/min;柱温:25℃;检测器:蒸发光散射检测器;ELSD参数:漂移管温度115℃,氮气流速2L/min。2.2.2对照品溶液的制备分别精密称取甘油三油酸酯对照品23.93mg、22.59mg于50mL量瓶中,用流动相定容至刻度,得到0.1914mg/mL、0.1807mg/mL的对照品溶液。2.2.3超声辅助提取取薏苡仁样品粉末(过3号筛)0.6g,精密称定,置于50mL具塞锥形瓶中,加入流动相50mL,称定锥形瓶重量,浸泡2h,超声处理30min,放冷,再称定锥形瓶重量,用流动相补足减少的锥形瓶重量,摇匀,滤过,取续滤液,用0.45μm微孔滤膜过滤,即得。2.2.4高效液相色谱法取0.1914mg/mL的对照品溶液与供试品溶液各10μL,在上述色谱条件下注入高效液相色谱仪,记录HPLC图,结果见图1、图2。2.2.5对照品溶液的制备吸取0.1914mg/mL、0.1807mg/mL对照品溶液2mL,置于5mL量瓶中,用流动相稀释至刻度,得到0.0766mg/mL对照品溶液Ⅰ、0.0723mg/mL对照品溶液Ⅱ。吸取稀释后的对照品溶液Ⅰ和对照品溶液Ⅱ各5μL、10μL,注入高效液相色谱仪测定。以进样量的对数(X)为横坐标,峰面积的对数(Y)为纵坐标进行线性回归,得到甘油三油酸酯回归方程:结果表明甘油三油酸酯在0.9036~1.9144μg内呈良好的线性关系。2.2.6样品制备和测定取福建省浦城县官路乡信源薏米合作社产(第一批,050201)、辽宁省建平县产(050202)、贵州省安顺县产(050203)、福建省仙游县金沙食品有限公司(2012年月2月)产(050204)的薏苡仁样品,粉碎,精密称取0.6g,按2.2.3项方法制备,分别吸取制备后的样品溶液10μL,注入高效液相色谱仪测定,记录数据并分析,见表2。结果表明,各代表性产地薏苡仁中甘油三油酸酯的含量不同,但均符合《中国药典》(2010年版)规定,其中福建省浦城县官路乡信源薏米合作社产的薏苡仁样品含量最高,达到1.219%。3讨论3.1提取法的筛选薄层色谱鉴别中,我们在对供试品溶液的前处理过程时,曾比较了回流提取与超声波提取样品,将所得样品溶液过滤,取滤液蒸干,残渣加石油醚溶解后的溶液作为供试品溶液,结果2种前处理方法获得的供试品溶液分别点样于同一薄层板上,薄层展开的分离成分斑点数和展开效果无明显差别,故供试品溶液制备最终选择较为简单的超声波提取法。3.2不同产地薏养殖中甘油三油酸酯含量情况实验在《中国药典》(2010年版)的基础上,比较测定不同代表性产地的薏苡仁样品中甘油三油酸酯的含量,各产地薏苡仁中甘油三油酸酯含量有所差异,其中,福建省浦城县官路乡信源薏米合作社产的薏苡仁样品含量最高,为1.219%,贵州省安顺县产薏苡仁样