普通级家兔体温检测结果分析

普通级家兔体温检测结果分析

热原检测（兔子法）是药物和生物制品质量评价的重要组成部分。然而，由于缺乏一个使用方便、定量、再现性差和灵活性差，人们发现其他方法无法替代。先后出现过各种方法,但都由于其存在着各自的局限性,因此都不能够完全代替家兔法。家兔法虽然存在着不够灵敏及重复性较差等不足,但因能够客观反映各类药品和生物制品中的各种热原在生物体内引起发热情况的特点,仍将继续发挥作用。影响家兔法检测结果的因素是多方面的,但可简单归纳为两个方面,即环境因素(温度、湿度、光照、饲料、检测设备、检品质量等)和实验家兔自身因素(生理状况、年龄、性别等)。本实验室为屏障环境,在环境、饲料、检测设备及动物质量等方面都进行了控制,但没有对动物性别进行控制(药典与规程及其它国家药典中都没有对此作相关规定),为了分析动物性别不同是否会对检测结果产生影响,对2005年一季度检测的486只家兔的预检体温及检测结果进行统计,以观察雌雄实验家兔间在基础体温、体温波幅上是否存在差异,并进一步观察性别差异是否会对热原检测结果产生影响。1材料和方法1.1实验动物普通级新西兰家兔(北京科宇实验动物养殖中心,动物合格证号:01-5021),体重(2.2±0.2)kg。1.2环境条件屏障环境,设施合格证号:SYXK(京)2001-0002。1.3测试设备ZRY-2A型热原检测仪;软件:EasyPyrogen智能热原检测软件(天津天大天发科技股份有限公司)。1.4实验中的例子来自国内生物制品厂和生物公司。1.5方法1.5.1在最高最低最低高差的测定家兔在屏障环境中饲喂9d,健康、无孕,体重(2.2±0.2)kg用于预检体温,每间隔1h记录一次体温,连测4h。4h内各兔体温均在38.0℃~39.8℃,且最高最低温差不超过0.5℃,可用于实验。由于2005版药典三部的颁布并在2005年7月1日起施行,其中对预检温最高最低温差重新规定为不超过0.4℃可用于实验。因此虽然在此之前的实验是按2000版生物制品规程进行的,但对合格家兔的统计按新版药典的最高最低温差不超过0.4℃的标准进行。1.5.2家兔的随机分组家兔固定30~60min后开始检测,每30min测量一次体温,共测两次,两次温差不大于0.2℃,以此两次体温的平均值为正常体温,同组间正常体温之差不大于1.0℃。测得家兔正常体温后15min内,按规定剂量自耳静脉缓缓注入预热至38℃的供试品,每隔30min测量体温1次,连测6次。凡热原质试验用过的家兔,若供试品判为符合规定,家兔休息48h后可重复使用。对血液制品、抗生素和其他同一过敏源的供试品在5d内可重复使用。因此可将初次试验后已休息48h以上且不超过5d的合格的家兔再次用于第二次试验。该实验中家兔分组为每组3只或5只,遇到检测结果为不合格的情况时,整组家兔将被淘汰;结果为复试时,温度升高超过0.6℃的家兔也被淘汰,故在实验中雌雄家兔采用随机分组。设定预检温和最终检测结果中温度升高大于0.4℃的家兔为体温波动显著,并据此统计两部分中雌雄家兔体温变化情况及所占比例。2结果2.1预检温2.1.1家兔的体温分布将486只家兔的预检体温按0.5℃间隔等距分组制作频数分布,如图1。从图1可以看出,家兔的体温主要集中在38.00℃到39.50℃范围。约占总数的96.71%。符合文献记载的38.50℃到39.50℃及药典所规定的38.00℃到39.60℃的温度范围。2.1.2男女性粘土测试从图2可以看出,雌性家兔体温变化趋势线向图右侧偏离约0.4℃,说明雌性家兔体温要较雄性家兔在正常值范围内偏高约0.4℃左右。2.1.3对于原理的测量,性别家兔与毒性家兔内部的体温状况应当以变化的趋势见表1雄性家兔体温上限39.86℃,下限37.24℃,R=1.4778;雌性家兔体温上限40.15℃,下限37.00℃,R=1.5244。因此,从极限温度值看,雌性家兔的体温变化幅度较雄性家兔更大。在全部486只实验家兔中,雄性家兔共226只。其中体温升高超过0.4℃的雄性家兔为63只(63/226);雌性家兔共260只。其中体温升高超过0.4℃的雌性家兔为69只(69/260)。见表1。从表1可以看出,在预检温时虽然雌性家兔的基础体温平均值较雄性家兔偏高约0.4℃,但是体温升高超过0.4℃的雌雄家兔比例相近并都接近平均值。2.2测试结果2.2.1试试卷的合格检测检品168批,其中合格101批,不合格18批,复试29批,复试合格19批,复试不合格1批。雌雄家兔在检测分组中随机分布,其中雌雄家兔在各种检测结果中分布情况见表2。2.2.2不同性别家兔的温度变化体温升高超过0.4℃的雄性家兔第1次为18只,第2次为11只;雌性家兔第1次为52只,第2次为43只(表3)。初次实验和第二次实验中温度升高超过0.4℃的家兔中,雌性都多于雄性。并且在第二次实验中雌雄家兔温度升高超过0.4℃的数量都有所减少。2.2.3不同性别进行体温变化引起的中试结果共29批(87只),其中完全由雌性引起的23批,79.31%(23只),完全由雄性引起的4批,13.79%(4只),由雌雄共同引起的2批,6.89%(升温总合>1.4℃)(表4)。在实验中由于雌性家兔体温变化过大而引起的复试结果的数量远大于由雄性家兔体温变化过大引起的复试结果的数量,两者比例接近6∶1。复试结果每组三只中温度升高超过0.4℃的雌雄家兔数量,见表5。在实验中体温变化较大的雌性家兔数量明显多于雄性家兔。2.2.4见表63种动物实验的结果比较在热原检测中,需复试的检品在经过复试后多数为合格。这种结果显示多数复试结论很可能是由于实验动物体温的不稳定所造成的。从上面的统计显示出不同性别家兔间在基础体温和体温变化幅度上明显存在着差异。雌性家兔的体温较雄性家兔的体温偏高约0.4℃,且体温变化幅度也较雄性家兔大。在预检温结果中升温大于或等于0.4℃的雌雄比例基本相当。这可能反映由于在预检温前稳定的时间较长,预检温过程中也没有受到其它外界刺激。因此,虽然雌性体温较雄性偏高约0.4℃,但在预检温过程中雌性家兔与雄性家兔间的体温变化幅度基本相当。雌性家兔体温高于雄性,可能是由于其雌激素(黄体酮)水平较高所致。但在检测结果中无论是初次还是第二次实验,雌性家兔体温变化超过0.4℃的数量都大大超过雄性家兔。这有可能反映雌性动物较雄性动物对外界刺激的反应更为敏感。因此,注射药剂及人员操作过程等外界刺激可使其产生紧张和较强的情绪波动,紧张亢奋的情绪会引起交感神经兴奋,从而导致肾上腺素和去甲肾上腺素分泌增加、代谢水平升高而使体温升高,这可能是雌性家兔体温波动幅度较大的原因。在29批的复试检品中完全由雌性家兔引起与完全由雄性家兔引起的比例约为6∶1。家兔对热原耐受(敏感性下降)在第二次试验中已经有所反映,从统计的数据看,这种下降的幅度雄性要略高于雌性。反映在第二次实验中雌雄家兔温度升高超过0.4℃的数量都有所减少。雄性温度升高超过0.4℃的比例从初次实验的16.67%下降为13.41%;雌性温度升高超过0.4℃的比例从初次实验的27.81%下降为26.71%。雄性家兔在第二次实验中温度升高超过0.4℃的比例比初次实验时下降了3.26%;雌性家兔只下降了1.10%,并且雌雄百分比之差初次实验时为11.14%;到第二次实验时升高到了13.30%,上升了2.16%。第二次实验时无论雌雄在温度升高超过0.4℃的数量都有所减少,这可能反映出已使用过的家兔无论雌雄对热原的敏感性都有所下降,且对外界刺激的适应能力有所增强。雌雄家兔在第二次实验中在温度升高超过0.4℃的数量上的差距有所增加,且主要是由雄性家兔温度升高超过0.4℃的数量减少引起。因此,这种差距可能反映雄性家兔对外界刺激的适应能力要好于雌性家兔。也有可能反映雄性家兔对热原的敏感性要好于雌性家兔。雌性家兔较大的体温变化幅度可能主要是由外界刺激导致情绪紧张引起的。因此,雌性家兔在使用之前可能需要更长的适应时间,以使之能更好的适应实验环境,以尽可能减少应激对其产生情绪乃至生理上的影响。从统计结