德都红花-7味散降酶保肝作用及其急性毒性研究

德都红花-7味散降酶保肝作用及其急性毒性研究

德都红花-7味散具有清热解毒、清肝热、调节身体素、黄药等功效。临床研究表明在改善慢性肝炎症见、体征、降酶保肝、HBV标记物转换等方面有显著疗效。本研究通过降低和减少CCl4导致的小鼠肝损害引起的ALT、AST、LDH升高和肝组织形态学改变,探讨德都红花-7味散的降酶保肝作用。并通过近似LD50试验,观察德都红花-7味散急性毒性反应。为临床应用提供安全性、有效性依据。1以肝为体、肝为肝的肝毒性研究1.1材料①实验动物:昆明种小鼠,体重19～22g,均用雄性。购于中国医科大学实验动物中心,小鼠合格证号SCXK(辽)2003-0009。②实验药品及仪器:德都红花-7味散,内蒙古民族大学附属医院蒙药制剂室提供,批号:哲卫准字9802-25。护肝片,黑龙江葵花药业股份有限公司生产,国药准字:Z20003336。四氯化碳(CCl4),沈阳市东兴试剂厂生产,批号:20030728。橄榄油,中国医药集团上海化学试剂公司生产,批号:F20020819。ALT试剂盒:OLYMPUS国药管械(进)2002第3400185号,批号:2003-06-21。AST试剂盒:OLYMPUS国药管械(进)2002第3400185号,批号:2003-04-29。LDH试剂盒:OLYMPUS国药管械(进)2002第3400185号,批号:2003-05-01。显微镜成像系统(ECLIPSEE200型),南京济南光电股份有限公司。全自动生化分析仪(PRONTO-E),意大利产。台式调速冷冻离心机(TGL-18R),珠海黑马医疗器械有限公司。精密电子天平(BS210S型),北京赛多利斯天平有限公司。1.2实验方法①德都红花-7味散对CCl4引起的小鼠急性肝损害的保肝降酶实验:取小鼠60只,随机等分为6组,即正常对照组、护肝片组、德都红花-7味散高、中、低剂量组、模型组。正常对照组和模型组给予0.9%生理盐水20mL/kg灌胃;护肝片组给予0.9%生理盐水护肝片混悬液(0.9g/kg)灌胃;德都红花-7味散高、中、低组分别给予12.5%、37.5%、187.5%的生理盐水德都红花-7味散混悬液(0.25g/kg、0.75g/kg、3.75g/kg)灌胃,均为每日1次,连续1周。于末次灌胃给药后2h,除正常对照组外,每鼠ip0.1%CCl4橄榄油悬液0.2mL/只,禁食水16h,于次日晨断头取血,分离血清,用生化分析仪检测ALT、AST、LDH含量。上述小鼠采血后,取肝大叶相同部位组织,用10%福尔马林固定,切片,HE染色,光镜观察组织变化。②德都红花-7味散急性毒性试验:采用近似LD50试验方法,测出德都红花-7味散LD50或最大耐受剂量(MTD)。取小鼠30只,分为2组,即正常对照组10只、试验组20只。试验组每只小鼠给药剂量按60g/kg体重(临床成人日服用量3g/人),分6次灌胃,每次0.6mL(每次每只200mg)。给药前禁食12h,不禁水,末次给药后禁食1h。正常对照组同上方法灌胃生理盐水。给药结束置于实验室内饲养,密切观察24h,记录小鼠出现死亡或中毒反应的数量及发生时间、持续时间、恢复时间。24h后如小鼠无死亡,对正常对照组5只小鼠、试验组10只小鼠采取断头采血,分离血清,用生化分析仪检测ALT、AST含量。小鼠采血后,取肝大叶相同部位组织,切片,HE染色,光镜对照观察组织变化。其余小鼠连续观察7天,记录反应情况,采血,检测血清ALT、AST含量。采血后,取肝大叶相同部位组织,切片,HE染色,光镜对照观察肝组织学变化。1.3统计学处理各组实验数据均用SPSS10.0统计软件做统计学处理,结果以X¯¯¯±sX¯±s表示,各组间进行方差分析。2结果2.1德都红豆-7味散对alt、ast、ldh的降酶作用由表1结果可见,护肝片和德都红花-7味散不同剂量均有不同程度的降酶作用,尤其以德都红花-7味散中、低剂降酶作用更明显,与对照组比较无显著差异,P>0.05。德都红花-7味散中剂量对ALT、AST、LDH的降低作用优于护肝片,P<0.05。德都红花-7味散低剂量对ALT、LDH的降低作用优于护肝片,P<0.05。德都红花-7味散高剂量的降酶作用与护肝片比较无明显差异,P>0.05。认为德都红花-7味散对CCl4引起的小鼠急性肝损害血清酶升高有明显的降酶作用。2.2德都麻黄-7味散对肝组织损伤的组织形态表现由表2及肝组织学可见,模型组普遍存在肝组织碎片状坏死灶,并伴有大量淋巴细胞、中性粒细胞浸润,坏死区周围可见肝细胞脂肪变性和嗜酸性变;护肝片组可见散在点状及小碎片状坏死,以被膜下及小叶中央区为著,伴有淋巴细胞和少量再生肝细胞,轻度肝细胞脂肪变性和嗜酸性变。德都红花-7味散高剂组可见散在点状及小碎片状坏死,内有炎细胞浸润,以肝细胞脂肪变性和水肿为主,少数肝细胞呈再生状态,总体肝组织损伤状况较护肝片组轻。德都红花-7味散中、低剂组肝组织损伤状况较相似,只见散在少数点状坏死,内有少量淋巴细胞和中性粒细胞浸润,主要表现为肝细胞脂肪变性和水肿。表明德都红花-7味散对CCl4所致肝组织病理损伤具有一定的保护作用。2.3德都麻黄-7味散的急性毒性检测血清酶和肝组织变化情况观察24h小鼠无死亡,无明显中毒反应,活动、皮毛、行为等未见异常。随机取正常组5只,试验组10只,采血检测ALT、AST含量和观察肝组织变化情况。其余小鼠继续观察7天,小鼠无死亡,无明显中毒反应,活动、皮毛、行为等未见异常,测得德都红花-7味散最大耐受量(MTD)>60g/kg。采血检测ALT、AST含量和观察肝组织变化情况。见表3。24h后肝组织光镜观察:正常对照组有两只小鼠肝细胞轻度水肿;德都红花-7味散组可见双核或多核肝细胞,其余无明显改变。7天后肝组织光镜观察:正常对照组肝组织无明显改变;德都红花-7味散组与24h肝组织改变基本相同。3德都发育散对ccl4所致急性肝损伤的降酶作用慢性肝炎可归属到蒙医“宝日病(包如病)”范畴。从疾病发展来看,慢性肝炎迁延期和活动期,多归属于蒙医“肝包如——寒热兼杂证”期表现,其病机为“体内三根、七素等体素之间相对平衡关系遭破坏而产生恶血及黄水,流入肝脏,使肝血不能生成正精,巴达干、齐素(血)、希拉、赫依进一步聚合,尤其以赫依及恶血热势强盛而互相交搏,阻碍了调火赫依运行之道,使其传入六腑脉道,因而齐素受赫依之追逐,流窜不定”。故表现为胃肝区疼痛,口苦泛酸,恶心厌食,大便不爽,胃胀不消,腹胀肠鸣,肢体疲乏症状。临床以调理体素、祛肝包如热邪为主要治则。“德都红花七味丸”具有解毒清肝热、调理体素、祛黄之功效,联合消食养肝之功效的蒙成药,针对慢性肝炎蒙医主要病机,疗效肯定。为进一步观察德都红花-7味散的保肝降酶作用,笔者采用CCl4所致小鼠急性肝损伤模型,探讨蒙药德都红花-7味散对血清ALT、AST、LDH含量肝组织形态学的影响。实验结果表明,德都红花-7味散中、低剂有明显的降酶作用,与对照组比较无显著差异,P>0.05。德都红花-7味散中剂量对ALT、AST、LDH的降低作用优于护肝片,P<0.05。德都红花-7味散高剂量的降酶作用与护肝片比较无明显差异,P>0.05。认为德都红花-7味散对CCl4所致急性肝损害血清酶升高有明显的降酶作用。德都红花-7味散中、低剂量对肝组织损伤坏死、变性有明显的改善作用,总体肝组织损伤状况好于护肝片。表明德都红花-7味散对CCl4所致肝组织病理损伤具有一定的保护作用。急性毒性试验表