乳腺癌患者表皮生长因子受体2、pcna、bcl-2、bax表达与预后的关系

乳腺癌患者表皮生长因子受体2、pcna、bcl-2、bax表达与预后的关系

人类表皮生长因子2（人类p-2）是乳腺癌的重要研究因素之一，在乳腺癌的发生、发展、转移和预后中发挥着重要作用。增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PCNA)是判断细胞增殖活性的内源性标志物。已知Bcl-2和Bax是一对作用相反的凋亡抑制基因和促进基因。本文联合检测HER-2、PCNA、Bcl-2、Bax在乳腺癌标本中的表达,分析其与乳腺癌预后的关系,探讨其作为乳腺癌预后指标的可行性和临床价值。1材料和方法1.1瘤旁正常乳腺癌组织的he染色病理检查收集贵阳医学院附属医院1997年1月至1997年12月收治的50例乳腺癌根治术患者的手术标本,15例经病理检查明确的正常乳腺组织(其中9例取自乳腺纤维腺瘤切除后的瘤旁正常乳腺组织,6例取自乳腺整形手术后的正常乳腺组织),用10%甲醛固定,常规石蜡包埋为存档蜡块。所有乳腺癌病例均经HE染色病理检查确诊,患者均为女性,年龄31~68岁,中位年龄45岁;其中浸润性导管癌43例,浸润小叶癌2例,单纯癌3例,粘液腺癌1例,印戒细胞癌1例;腋淋巴结转移者28例,无淋巴结转移者22例。临床分期Ⅰ期2例,Ⅱ期32例,Ⅲ期14例,Ⅳ期2例。所有病例术前未接受化疗和放疗,术后35例行CMF方案化疗,27例行放疗,内分泌治疗资料欠完整。1.2免疫组织化学HER-2、PCNA、Bcl-2、Bax蛋白的检测一抗均为鼠抗人单克隆抗体,EnVision免疫组化二步法试剂盒,购自北京中山生物技术有限公司。1.3预防过氧化物酶存档蜡块连续切片,脱蜡后浸泡于梯度乙醇水化;3%过氧化氢孵育,以阻断内源性过氧化物酶;微波抗原热修复;滴加一抗,37℃孵育1~2h,TBS冲洗;滴加非免疫性血清,37℃孵育20min,TBS冲洗;滴加EnVision二抗,37℃孵育20~30min,TBS冲洗;显色,冲洗、复染、脱水、封片。1.4细胞阳性细胞染色HER-2阳性染色位于细胞膜,呈棕黄色染色,按HercepTest标准评分。PCNA阳性染色位于细胞核,Bcl-2阳性染色位于细胞浆,Bax阳性染色位于细胞浆。阳性细胞染色为棕黄色或棕褐色,评估标准为:无阳性细胞为“-”;阳性细胞数<25%为“+”;阳性细胞数25%~50%为“++”;阳性细胞数>50%为“+++”。1.5乳腺癌复发时间从术后开始定期随访,随访形式为信访、电话访问或门诊复查,随访日期截至2003年12月,随访率100%。随访时间最长72个月,平均54个月。乳腺癌复发是经过治疗(包括手术、放化疗和内分泌治疗)后,在原发灶附近或远隔器官出现病理性质完全相同病灶的现象。本文中所指复发有原位复发、淋巴结转移及远处转移,出现其中一项即定义为复发。1.6生存曲线统计分析以SPSS10.0软件包进行统计数据分析。应用Kaplan-Meier生存曲线进行单因素分析,用log-rank检验分析生存曲线的差异。以Cox模型进行多因素生存分析。显著性检验水准P<0.05。2结果2.1pcna、bcl-2、bax乳腺癌组织中HER-2、PCNA、Bcl-2、Bax的表达见图1。其中HER-2阳性率为44.0%(22/50),PCNA为82.0%(41/50),Bcl-2为48.0%(24/50),Bax为54.0%(27/50)。而正常乳腺组织中HER-2阳性率为13.3%(2/15),PCNA为6.7%(1/15),Bcl-2为26.7%(4/15),Bax为73.3%(11/15)。2.2死亡病例及死亡病例的情况全组中位生存期62个月,其中无瘤生存19例,复发22例,死亡9例,死亡病例均死于乳腺癌进展。5年总生存率为82%(41/50),无瘤生存率为38%(19/50),死亡率为18%(9/50)。2.3患者预后分析2.3.1总生存率和总生存率分析对50例HER-2、PCNA、Bcl-2、Bax表达不同的患者的Kaplan-Meier生存曲线进行分析(图2~9),各指标水平的无瘤生存率曲线及总生存率曲线的差异用log-rank检验进行比较(表1、2)。从单因素生存分析的结果看,HER-2、Bax对乳腺癌复发有影响作用(P﹤0.001);PCNA的统计量接近临界值,但无统计学意义。Bcl-2对总生存率的影响的统计量接近临界值,但无统计学意义;各指标对总生存率的影响均无统计学意义。2.3.2影响乳腺癌预后的因素应用多因素Cox模型分析中逐步向后筛选法,HER-2、PCNA、Bcl-2、Bax均进入方程,进入水准为0.05,删除水准为0.1,选出影响乳腺癌预后的独立因素(表3、4)。影响复发的因素中HER-2、Bax被筛选出来,回归系数为正值,提示该指标表达的乳腺癌患者易复发。影响生存期的因素中Bcl-2、Bax被筛选出来,Bcl-2回归系数为负值,提示该指标表达的乳腺癌患者生存期较长;而Bax回归系数为正值,是预示生存期短的指标。3复配前后乳腺癌生存期大多数研究认为HER-2、PCNA、Bax阳性表达者肿瘤侵袭性高,复发率转移率高,无瘤生存期短。理论上Bcl-2基因表达越强,肿瘤凋亡越受抑制,恶性程度越高,其病理生物学特性越差。然而许多国内外学者的研究结果表明Bcl-2的表达往往与肿瘤较好的生物学特性呈正相关。本研究应用单因素及多因素Cox模型综合分析以上指标与乳腺癌预后的关系,探讨其能否作为判断乳腺癌复发和生存期长短的有效指标。本研究单因素分析中将HER-2、PCNA、Bcl-2、Bax各水平的Kaplan-Meier无瘤生存率曲线及总体生存率曲线分别进行比较,发现HER-2与Bax对肿瘤复发有显著影响作用,是评价乳腺癌是否早期出现复发、转移的指标。在上述指标中未发现明显对乳腺癌生存期有影响的因素;Bcl-2的生存曲线统计量比较接近临界值,虽然差异无统计学意义,但可观察到Bcl-2表达者生存期较长的趋势。多因素Cox模型分析中对肿瘤复发有影响的因素为HER-2和Bax,对生存期有影响的因素为Bcl-2和Bax,它们可作为判断乳腺癌预后的独立影响因素,其中HER-2、Bax表达是判断预后不良的指标,Bcl-2表达是预后良好的指标(回归系数为负值)。多因素分析进一步证实了HER-2、Bax表达者乳腺癌易发生复发、转移,Bax、Bcl-2可作为判断乳腺癌生存期长短的指标,Bax表达预示患者生存较短,Bcl-2表达预示患者生存期较长。解释此种现象的一种观点是Bcl-2基因不仅抑制细胞凋亡,而且还延长细胞周期,由此延缓肿瘤细胞增殖,因此Bcl-2基因表达时其总的结果与好的病理生物学行为有关。另外一种观点是Bcl-2蛋白是由雌激素调节,此蛋白多局限在ER阳性的乳腺癌细胞中,而ER阳性又是内分泌治疗的必要条件,所以Bcl-2蛋白表达患者预后好可能是由于对激素治疗反应好所致。单因素分析中为何没有体现上述指标对总生存率(即生存期)的影响作用,可能是在单因素分析中未控制其它因素对乳腺癌预后的影响,所以统计学上未发现明显影响生存期的因素。目前大多数研究认为HER-2改变常提示肿瘤复发早,生存期短。本研究中多因素分析显示HER-2对复发有明显影响作用,对生存期的影响作用不明显,这可能是本研究中病例数较少,未体现出HER-2对生存期的影响,也有可能是HER-2在评价肿瘤复发方面比评价生存期更有意义,或者