普洱茶中儿茶素组分的测定

普洱茶中儿茶素组分的测定

茶叶中所含的多酚类物质是茶中的多元酚类混合物。其中最重要的是以儿茶素为主体的黄烷醇类,其含量约占多酚类总量的70%～80%,是茶树次生物质代谢的重要成分,也是茶叶保健功能的首要成分,对茶叶的色、香、味品质的形成有重要作用。酚酸是一类分子中具有羧基和羟基的芳香族化合物。早在19世纪中叶就开始了茶叶中酚酸的研究。1847年从绿茶中分出没食子酸,没食子酸在茶叶中的含量约为干物质的0.5%～1.4%。没食子酸具有强抗氧化性,并且具有抗肿瘤、抗血栓等药理作用,在食品工业及医药工业中有广泛用途和应用前景。对于茶成分的研究,传统的茶分离分析方法还比较有限,茶中被较多分析的是儿茶素类,它们属于多酚类化合物,是茶叶药效的主要活性组分,具有防止血管硬化、防止动脉粥样硬化、降血脂、消炎抑菌、防辐射、抗癌、抗突变等多种功效。目前,关于茶叶儿茶素的测定方法的报道已经很多,主要有薄层色谱(TLC)、气相色谱(GC)、液相色谱-紫外检测(LC-UV)、液相色谱-质谱(LC-MS)、毛细管区带电泳(CZE)和胶束毛细管电动色谱(MEKC)等常用测定方法。本文主要采取高效液相色谱(HPLC)法测定普洱茶中右旋儿茶素(+C)、表儿茶素(EC)、表没食子儿茶素(EGC)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、没食子儿茶素(GC)、儿茶素没食子酸酯(CG)、没食子儿茶素没食子酸酯(GCG)和没食子酸(GA)9种儿茶素组分的含量,此法快速简便,能够同时测定多种儿茶素,效果较好。1材料和方法1.1试验材料1.1.1poli-rp/roli-rp/phenosenex生长高效液相色谱仪:日本岛津公司;分析色谱柱:Phenomenex公司Phenomenexpolar-RP80150×2.0mm4micron。1.1.2带模带空蒸馏器十万分之一分析天平(德国Sartorius公司);电热恒温水浴锅(北京市永光明医疗仪器厂);自动双重纯水蒸馏器(德国Sartorius公司);三角瓶,医用注射器,0.2μm水系微孔滤膜。1.1.3新生儿指标表1儿茶素类化合物标样:(+)儿茶素(+C)、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)(日本东京化成工业株式会社)、表儿茶素(EC)(美国ACROSORGANICS公司)、没食子儿茶素(GC)、表没食子儿茶素(EGC)、儿茶素没食子酸酯(CG)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)、没食子儿茶素没食子酸酯(GCG)、没食子酸(GA)(美国SIGMA公司)。高纯水:18.2MΩ/cm;甲醇:色谱纯,德国MERCK公司;冰醋酸:分析纯。1.2测试方法1.2.1流动相梯度变化色谱条件为:流动相A为0.1%的乙酸溶液,流动相B为甲醇,流动相洗脱梯度:流动相A:0.1%乙酸水溶液,流动相B:甲醇;流速:0.5mL/min;流动相梯度:从0到15min,流动相B即有机相甲醇,从10%到60%;从15到20min,流动相B保持在60%;从20到20.5min,流动相B从60%回到10%;从20.5到25min,整个分析周期结束,流动相B保持在10%。柱温30℃;紫外检测器检测波长278nm,检测器扫描范围200～350nm;分析周期25min,进样量10μl(表1)。1.2.2标准工作曲线混合标准溶液的配制标准储备液:分别称取9种儿茶素类化合物的固体标样各10mg,用50%的甲醇水溶液溶解并定容至10mL。则以上9种儿茶素类化合物的标准储备液浓度均为1mg/mL。混合标准溶液:各取9种儿茶素类化合物的单标储备液1mL,混合并用50%的甲醇水溶液定容至10mL,则混合标准溶液的浓度为100μg/mL。标准工作曲线混合溶液:先取100μg/mL的混合标准溶液5mL,用50%的甲醇水溶液定容至10mL,得到50μg/mL的混合标准溶液;再取100μg/mL的混合标准溶液1mL,用50%的甲醇水溶液定容至10mL,得到10μg/mL的混合标准溶液;再分别取0.5和2.5mL的50μg/mL的混合标准溶液,用50%的甲醇水溶液定容至25mL,分别得到1和5μg/mL的混合标准溶液。最终得到的标准工作曲线混合溶液的浓度分别为1、5、10、50、100μg/mL。1.2.3加标样品的制备将普洱茶样品先进行粉碎,过40目的筛子,再准确称量1.0g普洱茶样品放入三角瓶中,加入120mL的纯水,在70℃的水浴中浸提50min,然后将上清液过0.2μm水系微孔滤膜,装入进样瓶中,即可用于分析。2结果与分析2.1分离度的保证采用色谱条件对儿茶素类化合物各组分的混合标准样品以及普洱茶样品进行分析,所得的色谱图见图1和图2。从标样图中可以看出,儿茶素类化合物各组分之间的分离度良好,分离效果令人满意。同时各组分的峰型也呈现出良好的对称性,分析周期为25min,在保证了分离效果的同时,实现了快速分析的目的和效果。根据图1、2所得的儿茶素类化合物各组分标样和普洱茶样品的保留时间见表2,从表中可以看出,普洱茶样品中绝大部分儿茶素类化合物各组分的保留时间同标样的保留时间重现性良好,说明方法的稳定性,可信性很高。2.2色谱峰面积的检测本方法采用了外标法对儿茶素类化合物各组分进行定量分析。根据各个组分的保留时间对各组分进行定性,根据各组分的色谱峰峰面积进行定量。所得各组分的标准曲线方程及相关系数见表3,其中在标准曲线方程中的Y为为标样浓度,X标样各组分色谱峰面积。从图和表中可以看出,各条标准曲线的相关系数都在0.9990～0.9998之间,说明各组分的峰面积与各组分之间具有良好的相关性。使用外标法对儿茶素类化合物各组分进行定量,有良好的线性,可以满足定量的要求。3分析方法及检测周期(1)本方法能够同时对9种儿茶素类化合物组分进行分析检测,并使得各组分之间的分离度良好,同时整个分析周期只有25min,因此是一种快速、高效、准确的分析方法。(2)本方法操作简单,所使用的试剂、仪器均为较常使用的,这就大大降低了前处理过程的劳动强度,降低了实验成本。(3)本方法采用外标法对儿茶素类化合物各组分进行定量,所得到的各组分的标准曲线方程线性良好,说明本方法的准确性令人满意。(4)同其他的儿茶素类化合物分析检测方法相比,本方法可以一次性检测出更多的儿茶素类,包括8种儿茶素以及没食子酸,共9种物质。康海宁等建立的方法只检测了包括没食子儿茶素(GC),表没食子儿茶素(EGC),表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG),表儿茶素(EC),表儿茶素没食子酸酯(ECG)在内的5种儿茶素。高俊等建立的方法检测了包括儿茶素(C)、表儿茶素(EC)、表没食子儿茶素(EGC)、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、没食儿茶素没食子酸酯(GCG)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)在内的6种儿茶素。钟世安等建立的方法检测了包括表儿茶素(EC),表儿茶素没食子酸酯(ECG),表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG),表没食子儿茶素(EGC),没食子儿茶素没食子酸酯(GCG),儿茶素(C)在内的6种儿茶素类化合物。因此,本方法实现了对儿茶素类化合物以及在儿茶素形成过程中发挥重要作用的没食子酸的全检测,