莲子体内两种黄酮甙的提取和鉴定

莲子体内两种黄酮甙的提取和鉴定

荷花心是睡莲科植物的一种古老的绿色幼叶和胚胎，苦而寒冷。它能净化心脏的安宁，使心脏的肾脏和涩精转为止血。主要用于兴奋、喉咙干渴、出血、红眼和胸痛。在我国其主要产于浙江、江苏、福建、湖南等地。莲子心生物碱研究始于l9世纪末,此后国内外学者进一步将莲子所含生物碱分为非酚性生物碱和酚性生物碱,主要有莲心碱(liensinine),异莲心碱(isoliensinine),甲基莲心碱(neferine),荷叶碱(nuciferine),牛角花碱(lorusine),甲基紫堇杷灵(methylcorypalline),莲子碱(nelumbine)等。黄酮广泛存在自然界的植物和浆果中,大约有4千多种。但其化学结构不尽相同,如绿茶多酚、芸香苷、橘皮苷、栎素、花色苷酸等都属黄酮。黄酮的功效是非常丰富的,它是一种很强的抗氧化剂,可有效清除体内的氧自由基,可阻止细胞衰老和退化,也具有阻止癌症发生的抗氧化作用。它还可以改善血液循环,减少血液中的胆固醇,大大降低了动脉粥样硬化的发病率,也可改善心脑血管疾病的症状。为了进一步开发利用黄酮资源,我们对莲子心黄酮类化合物的提取分离工艺进行了研究,并利用波谱技术鉴定了两个碳甙黄酮的结构。1材料和方法1.1路径二、实验用树脂仪器:紫外光检测器,旋转蒸发仪,核磁共振仪等。材料:莲子心,2009年9月购自福建省医药有限责任公司;D101大孔吸附树脂;硅胶;SephadexLH-20(羟丙基葡聚糖凝胶);MCI(微孔树脂);RP-18(十八烷基硅烷键合硅胶);硅胶粉,硅胶板H(中国青岛海洋化工集团公司);工业级甲醇;其余有机试剂均为分析纯。1.2黄酮类物质的检测1.2.1莲子心中黄酮类物质的提取、分离及纯化:1.2.2黄酮类物质的定性检测:层析柱所分离出的化合物使用薄层色谱分析。采用硅胶薄层层析板,以氯仿-甲醇-水(体积比为8∶2∶0.2)为展开剂。展开后的硅胶板,在紫外光365nm下,黄酮类物质呈现黄色荧光;用分子碘熏呈棕色;经5%的稀硫酸溶液(乙醇∶水=1∶1)烘烤呈黄色。1.2.3黄酮类物质的结构鉴定:核磁共振分析:将分离出的黄酮类单体物质溶解于氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)中,在核磁共振仪上测定氢谱(1HNMR),碳谱(13CNMR),异核远程相关谱(HMBC),异核单量子相关谱(HSQC)。以四甲基硅烷为内标物,并与参考文献比对确定化合物结构。2结果与讨论2.1糖及糖教育化合物c-4化合物1呈淡黄色粉末状,经5%的稀硫酸溶液(乙醇∶水=1∶1)烘烤后呈黄色,易溶于甲醇。氢谱(1HNMR)δ:7.51(1H,d,J=8.4,J=2.0,H-6′),7.48(1H,d,J=2.0,H-2′),6.88(1H,d,J=8.4,H-5′),6.63(1H,s,H-3),6.33(1H,s,H-6),4.66(1H,d,J=7.6,H-1″)。碳谱(13CNMR)δ:182.0(C-4),164.1(C-2),162.8(C-7),160.3(C-5),156.0(C-9),149.7(C-4′),145.8(C-3′),121.9(C-1′),119.4(C-6′),115.8(C-5′),114.1(C-2′),104.5(C-8),104.0(C-10),102.4(C-3),98.2(C-6),82.0(C-5″),78.8(C-3″),73.4(C-1″),70.8(C-2″),70.7(C-4″),61.7(C-6″)。1HNMR图谱显示:共有6个氢,低场区有两个在7.51,6.88且偶合值是8.4的氢信号和在7.48且偶合值是2的氢信号,判断为苯环上的ABX自旋体系,且1,3,4位被取代;同时两个在δ6.63和6.33的单峰;存在1个端基质子信号(δ4.66,J=7.6),说明这个糖是β-D-葡萄糖甙;13CNMR图谱表明:δ182.0处的信号为羰基,在δ145.8～164.1区间有6个连氧碳信号,δ102.4处有1个烯烃碳信号,在δ121.9～98.2区间有7个芳香碳信号,可推断该化合物为黄酮类化合物,通过以上的分析并参考文献可以得出该化合物为木犀草素糖甙。从13CNMR来看只有1个δ73.4处的信号表明含有C糖甙,δ61.7为糖上亚甲基。在δ82.0～70.7区间有5个连氧碳为葡萄糖上的碳信号,对照得出为β-D-葡萄糖。通过δ104.5(C-8)和98.2(C-6),推出化合物1为木犀草素-8-C-β-D-葡萄糖甙。2.2-d-葡萄糖化合物2呈淡黄色粉末状,经5%的稀硫酸溶液(乙醇∶水=1∶1)烘烤后呈黄色,易溶于甲醇。氢谱(1HNMR)δ:7.42(1H,d,J=8.4,J=2.0,H-6′),7.40(1H,d,J=8.4,H-2′),6.88(1H,d,J=2.0,H-5′),6.67(1H,s,H-3),6.47(1H,s,H-8),4.57(1H,d,J=8.6,H-1″)。碳谱(13CNMR)δ:181.9(C-4),163.7(C-2),163.3(C-7),160.7(C-5),156.2(C-9),149.7(C-3′),145.8(C-4′),121.5(C-1′),119.0(C-5′),116.1(C-2′),113.3(C-6′),108.9(C-6),103.4(C-10),102.8(C-3),93.5(C-8),81.6(C-5″),79.0(C-3″),73.1(C-1″),70.7(C-2″),70.2(C-4″),61.5(C-6″)。1HNMR图谱显示:共有6个氢,低场区有两个在87.42,86.88且偶合值是8.4的氢信号和在86.88且偶合值是2的氢信号,判断为苯环上的ABX自旋体系,且1,3,4位被取代;还有两个在δ6.67和6.47的单峰;有1个端基质子信号(δ4.57,J=8.6),说明这个糖是β-D-葡萄糖甙;13CNMR图谱表明:δ1821.9处的信号为羰基,在δ145.8～163.3区间有6个连氧碳,δ102.8处有1个烯烃碳信号,在δ121.5～93.5区间有7个芳香碳信号,推断该化合物为黄酮碳甙,通过以上的分析并参考文献可以得出该化合物为木犀草素糖甙。从13CNMR来看只有1个δ71.3处的信号表明含有C糖甙,δ61.7为糖上甲基。在δ82.0～70.7区间有5个连氧碳为糖上的的碳,对照得出为β-D-葡萄糖。通过δ108.9(C-6)和93.5(C-8),推出化合物2为木犀草素-6-C-β-D-葡萄糖甙。3黄酮糖苷化合物的合成本实验从莲子心中分离到的2种化合物经NMR鉴定分别为木犀草-8-C-β-D-葡萄糖甙和木犀草素-6-C-β-D-葡萄糖甙。在莲子心提取的文献中,已报道的莲子心中的黄酮类化合物主要是O-取代黄酮,C-取代黄酮则较少,但此次实验获得了两种葡萄糖碳甙:木犀草素-8-C-β-D-葡萄糖甙和木犀草素-6-C-β-D-葡萄糖甙。C-取代黄酮与O-取代黄酮在生物活性上也有些不同,如C8-取代柚皮素衍生物对雌激素起到调节作用,能够治疗由于雌激素缺乏或过量引起的失调与疾病。而且异戊二烯基柚皮素衍生物具有细胞毒性,可以调节白血病细胞(HL-60)增殖功能,但清除自由基实验显示其具有较弱的抗氧化作用。同时由于C-取代黄酮分子结构一般较稳定,不会轻易遭受水解、氧化等外界