金银木总黄酮含量测定

金银木总黄酮含量测定

黄酮类化合物以其抗逆性、肿瘤、抗高血压、阐明血管疾病和提高战斗力而闻名。近年来，黄酮类化合物的分析已在各种中药中进行，但关于金银木的研究报道很少。金银木和金银花（i）属于金银花科和废人型。在本研究中，分析了金银木花、枝、叶和果实中的黄酮类物质，并以金银木作为装饰材料的开发、抗高血压药物、心血管疾病药物的利用为基础。1材料和方法1.1络欣通银杏叶片金银木的花、枝、叶、果均采自山西大学校园内;络欣通(银杏叶片),山西瑞福莱药业有限公司,批准文号:国药准字Z20027951;聚酰胺薄膜,中国浙江台州路桥四甲生化塑料厂出品.1.2方法1.2.1金银木花总黄酮含量的测定超声波提取总黄酮:分别称取适量洗净、干燥、粉碎的金银木花、枝、叶、果,加入8～10倍体积分数为(下同)60%乙醇中密封浸泡24h,超声波提取20min,抽滤收集滤液,滤渣再加入60%乙醇反复浸泡提取抽滤,将所得滤液合并后加60%乙醇至一定体积为待测总黄酮.芦丁标准曲线回归方程建立:按照文献操作,并以芦丁浓度对光密度值计算回归方程.样品中总黄酮的测定:分别取制备的金银木花、枝、叶、果的待测滤液1mL于25mL容量瓶中,用30%乙醇补至12.5mL;以下操作同芦丁标准曲线,并以芦丁标准曲线回归方程分别计算其总黄酮含量.1.2.2聚酰胺薄膜的层析分离、荧光定量和紫外分析方法观察溶剂萃取:分别将1.2.1制得的4种滤液旋转蒸发去掉乙醇味,乙酸乙酯萃取,待分离.络欣通黄酮类化合物的提取:取络欣通胞衣片除去红棕色胞衣,研碎,其余步骤同1.2.1.层析分离:取8cm×8cm聚酰胺薄膜,于距底边1.0cm处划线,并于两侧边1.0cm内,间隔1.0cm编号.1号点样品标准芦丁,2号、3号、4号、5号、6号依次点样品络欣通、金银木花、枝、叶、果的乙酸乙酯萃取液,自然风干,于乙酸乙酯∶乙醇(体积比)=60∶40的系统中层析.待层析前沿至距薄膜0.5cm时取出晾干,用质量分数为5%氯化铝染色,紫外分析仪观察层析结果.样品的层析斑点扫描:将不同部的层析斑点剪下用60%乙醇溶解,紫外可见分光光度计200nm～800nm波长处扫描.2结果与讨论2.1y、y.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.5.4细胞系统的线性相关由1.2.1得到芦丁浓度-光密度标准曲线的回归方程:Yˆ=0.0517X−0.002‚r=0.9998(P＜0.01)Y^=0.0517X-0.002‚r=0.9998(Ρ＜0.01),线性相关极显著.2.2花3.4g/100g由1.2.1测定可知,金银木花、枝、叶、果均含总黄酮,其含量依次为叶10.750g/100g;果7.563g/100g;花3.758g/100g;枝3.340g/100g.说明金银木的总黄酮主要存在于叶和果中,花和枝中只有叶和果中的1/3～1/2.由此可知金银木的药用部位更偏向于叶和果,利用金银木作为药用资源既不损害城市植物观赏,又不浪费自然资源.2.3分析结果表明，结合环己单胞、金银木花、枝叶和果实中黄酮2.3.1号金银木果不同部位造成的斑块由图1可见,1号芦丁只出现一个斑点;2号络欣通层析出3个斑点,分别称Rf1luo、Rf2luo、Rf3luo,其中与芦丁位置相近者Rf2luo可能是芦丁;3号金银木果中层析出5个斑点,其中与芦丁位置相近者也可能是芦丁,其它斑点显示含量较低;4号金银木叶中出现5个斑点,其中3个斑点均与终欣通呈现的3个斑点类似,说明金银木叶中可能含有与络欣通相同的3种黄酮类物质;5号金银木花呈现的斑点颜色与3号金银木果中层析斑点类似,显示含量较低;金银木枝子没有层析出任何斑点.2.3.2准品层析结果芦丁标准品层析前后的扫描图谱:芦丁在层析前有3个特征峰(见图2),即WL-1=276.0nm、Abs=0.510;WL-2=340.0nm、Abs=0.267;WL-3=510.0nm、Abs=0.136.芦丁标准品层析后则只有两个特征峰,见图3,即WL-1=251.0nm、Abs=2.474;WL-2=357.0nm、Abs=0.200.说明芦丁层析染色后其分子结构发生了变化,因而其特征峰移向短波方向,峰值由276nm变为251nm,而且图形更陡峭.芦丁、络欣通Rf2luo和金银木叶、金银木果的层析扫描图:将芦丁和与芦丁层析斑点部位相同的络欣通Rf2luo、金银木果、金银木叶的层析斑点扫描图(见图4)重叠,发现它们都在357nm处有特征吸收,坡度较平缓,而在251nm～254nm有非常陡峭特征吸收峰.推测具有活血止痛,用于冠心病、心胶痛、动脉硬化、高血压、脑血管痉挛的络欣通中含有芦丁;金银木果、金银木叶中也含有与络欣通相同的黄酮——芦丁.3rf1luo,rf2luo3种黄酮的表达综上所述,金银木的花、枝、叶、果均含总黄酮,其含量依次为叶>果>花>枝;层析结果发现络欣通中含Rf