结核分枝杆菌实验活动风险评估报告

(一)一般特性结核分枝杆菌瘦长略弯曲，端极钝圆，大小约(1～4)μm×(0.3~多数学者认为结核分枝杆菌无荚膜。结核分枝杆菌常用萋-尼氏(Zieh1-胞壁缺陷L型，以与存在于结核病灶、浆液性渗出液等样品可结核分枝杆菌为缓慢生长细菌，较一般细菌生长非常缓慢，在动物体内繁殖代时约为15h,在家兔角膜中约须要20～22h,在巨噬细胞内月须要15～20h。体外生长时养分要求高，可在含有蛋黄、马铃薯、甘油和天门冬素或动物血清等的固体培育基上生长。最适PH6.4～7.0,在35～40℃油酸血清(白蛋白)琼脂培育基和苏通液体培育基等，在良好的培育条件下，生长代时约18～24h,培育2～4周才出现肉眼可见的菌落。在固体培抗结核免疫反应在结核分枝杆菌感染中起着效地反抗大多数感染，感染结核分枝杆菌的大多数人(约90%)在其一生结核分枝杆菌基因序列有4400多万bp,包含了4000多个基因，有很高的鸟嘌呤(G)和胞嘧啶(C)含量。结核分枝杆菌基因中形成了不同的分枝，主要有北京家族、东非-印度分枝、中亚或德里家结核分枝杆菌产生耐性的机制主要是靶编码基因的突变所致。结核分枝杆菌的自然耐药突变率为10¹⁰~10⁵之间。当结核分枝杆菌的编码基因的疾病，或许有了人类之后，不久就有了它的存在。1965年，法国学者湖南长沙马王堆汉墓出土的2100年前的女尸身上发觉左上肺门均有结核痰涂片阳性，若1mL痰液中含菌量为1000～10000,则其痰涂片阳性率为性降为25%;感染耐药菌的病人未治疗时相对传染性为100%,在治疗时则降为27.3%。结核分枝菌主要通过呼吸道传播，传染源主要是排菌的肺结核病人(尤其是痰涂片阳性，未经治疗者)的痰。飞沫感染为最常见的方式，健康人吸入患者咳嗽、打喷嚏时喷出的飞沫而受感染。直径小于10um的痰滴可(五)易感性2.易感人群结核病主要是人群之间传播的传染病，发生结核杆菌传播主3.易感者的自身因素结核杆菌进入人体，引起易感者机体的困难反应。免疫力强、接种过卡介苗(Bacilluscalmettegué(六)潜藏期(七)剂量—效应关系传染源排出的飞沫受压力和黏度的影响而大小不一。飞沫核直径为1~豚鼠通过气溶胶途径接触1～5个结核分枝杆菌感染就可造成肺部感染并导致死亡。小鼠对结核分枝杆菌少见自然感染，静脉注射标准毒株(八)致病性(1)原发感染：多发生于儿童。肺泡中有大菌酶而接着繁殖，使巨噬细胞遭遇破坏，释放出的大量菌在肺泡内(2)原发后感染：病灶亦以肺部为多见。病菌可以是外来的(外源性感染)或原来潜藏在病灶内(内源性感染)。由于机体已有特异性细的淋巴结，被纤维素包围的干酪样坏死灶可钙化2.肺外感染部分患者体内的结核分枝杆菌可进入血液循环引起肺内、日本在20世纪30～40年头统计表明年内发病率为30%,近年报告降低为10%。我国无准确统计数字可依据。在发病者中近半数在感染后半年至两(九)变异性介苗(BCG)就是Calmette和Guerin2人(1908年)将牛结核分枝杆菌在含甘油、胆汁、马铃薯的培育基中经13年230次传代而获得的减毒活几种药物的耐药，印度等国家就接连报道了全耐药结核分枝杆菌(十)稳定性1.在自然环境中的稳定性与对温度的敏感性在自然条件下结核分枝杆菌在室内阴暗潮湿处能存活半年；在干燥的痰中于阴暗处可存活6～8个月；在随尘土飞扬的空气中可保持传染性8～10d3个月；3℃条件下存活1年，一6～8℃环境下可存活4～5年。另有资料表明，室内的结核分枝杆菌微滴核约60%～71%,可存活3h,48%～56%中存活6h,28%～32%中存活9h以上。2.化学灭活结核分枝杆菌干脆接触70%～75%乙醇5～30min可被杀死，处理12h以上才能达到杀菌作用。在房间密闭性好、相对湿度60%～80%的条件下，运用8～10g/m³甲醛熏蒸12h以上，可有效杀灭空气中和光滑纯培育物；100℃煮沸5min可杀死痰中结核分枝杆菌。65℃巴氏消毒法可用于牛奶中结核分枝杆菌的灭活。用600W微波灭菌器照耀4min,可将玻璃表面污染的牛型结核分枝杆菌完全杀灭。121℃压力蒸汽30min,132℃结核分枝杆菌对日光敏感，日光照耀2h以上可杀死结核分枝杆菌，紫外线对结核分枝杆菌有确定杀灭作用，用辐射强度在100uw/cm²以上的30w(十一)预防和治疗青少年和成人的爱护效果差异较大，不同的人群和不同地区的爱护力在防止产生或削减已感染结核菌者发生结核病的机会。常用药物预防方法有：①利福喷叮加异烟肼，每周服药2次，3个月；②单服异烟肼每日1肺结核病的诊断参照肺结核诊断标准(ws28(2)试验室诊断出结核菌，就能确诊患了结核病，但敏感性低(0～50%)。菌落，但个别菌需6～8周，检测时间长使得应用受到限制。主要方法，但传统药敏试验须要4周，影响了耐药结核病的与时诊断。②免疫学检测结核菌素试验是应用结核菌素进行皮肤来测定机体扰素释放试验(T-cellinterferongammarelease点(ELISPOT)法定量检出受检者全血或外周血单个核细胞对结核分枝杆③分子检测通过检测结核分枝杆菌或耐药结核分枝杆菌特异的基因结核病的诊断困难，治疗困难，往往疗程很长，耐多药病人一般须要18～24个月，而且医药费用是治疗一般病人的100倍左右。因此，耐结核病的诊断和治疗需到市级以上的专业或定点结核病医疗机构进行(二)事故分析2.有关试验室已发生的事故迄今为止未见有关证明是由于在试验室操作(一)试验活动(1)菌株的传代2)打开菌株培育管，用灭菌的接种环轻轻刮取菌落，置于磨菌管中。3)运用磨菌棒将菌落制成匀称的菌液。4)静置10min后，用吸管接种约0.1ml至中改良罗氏培育基斜面上。5)传代后的培育基放置36℃培育，每周1次视察菌落生长状况，于肉眼可见菌落出现后2～3周进行药敏试验。②风险因素(见表8-20)。序号操作风险概率风险限制措施风险1开盖溅出较低整个活动中动作温柔，勿猛烈操作，以防止液体溅出险2菌落溅出中整个活动中动作温柔，勿猛烈操作，以防止菌落溅出险3磨菌开较低整个活动中动作温柔，以防止磨菌管裂开险4接种胶较低吸管动作温柔险险1)在磨菌管上标记好样品编号，于生物平安柜中运用无菌吸管吸取含10%2)用一次性接种棒(环)刮取2～3周德簇新菌落，置于磨菌管中。3)留意尽可能刮取斜面各个部位的菌落，避开挑取1、2个单独菌落进行试验，刮取菌的量以半环或一环(5～10mg)为宜。4)运用磨菌棒将菌落制成匀称度菌液。5)渐渐滴加灭菌生理盐水，直至菌液浊度与麦氏1号标准比浊管一样，即②风险因素(见表8-21)。表8-21菌悬液制备过程中可能出现的风序号试验操作风险风险限制措施残留风险概率1开盖溅出较低动作温柔，勿猛烈操作，以防止液体溅出2菌落溅出中动作温柔，勿猛烈操作，以防止菌落溅出3磨菌开较低动作温柔，防止磨菌管裂开(4)菌液稀释和接种中，即稀释10²mg/mL菌液；用同样方法再进行100倍稀释，即成②风险因素(见表8-22)。表8-22菌悬液稀释和接种过程中可能出现的风险与限制措施序号试验操作可能风险生概率风险限制措施险1稀释吸管吹动胶中吸管操作温柔，勿猛烈操作，以防止气溶胶的产生2接种液体溅出较高烈操作，以防止液体溅出1)接种后的培育基置于恒温培育内，直立放置(36±1)℃培育。2)培育4周后报告结果。②风险因素(见表8-23)。表8-23菌悬液培育过程中可能出现的风险与限制措施序号试验操作可能风险风险发生概率风险限制措施残留风险1移送培育管培育管滑落裂开低移送培育管时动作谨慎低风险(二)设施设备设备的风险评估按支配进行，试验人员进入试验室应检查试验室压力验活动仪器设备相关风险识别与限制见表8-24。名称可能风险能性后果描述限制措施样、生物平安柜出现正压能员与试验室的高度危急操作培训，设备定期维护。运用时，视察窗不要抬得过高；柜内尽量少放仪器和物品，不要堵塞后面气口处的空气流通；禁止在柜内运用酒精灯；在柜内的全部工作都要在工作台中心或后部进行，并且通过视察窗能望见柜内的操作；尽量削减操作者后面的人员走动，操作者前面的空气栅格不要被吸管或其他材料拦住；生物平安柜的风扇在工作起先前与操作结束后至少要再运行5min。试验起先前开启平安柜排风，待压力稳定后再进行试验二氧化碳泄漏；电源短路；培育物产可能性低人员接触污染1.每次运用二氧化碳培育箱时，留意视察二氧电源连接正常，电源线四周无液体存在2.定期更换二氧化碳培育箱的空气滤膜生气溶胶3.严格规范操作，定期检查机离心管发生裂开气溶胶释放可能性低人员接触污染配备离心机有平安套筒，可转移到生物平安柜内处理产生气溶胶、泄露和容器裂开可能性低人员样品接触污染必需运用塑料的器皿，因为玻璃可能会裂开释放出感染性物质，而且可能伤与操作者。在操作结束后，容器应在生物平安柜里才能重新启动冰箱保存管泄露可能性极低人员样品接触污染操作培训，做好个人防护器人员接触位，发生烫伤可能性中等人员发生烫伤操作培训，做好个人防护菌器接种环灭菌器温度过低，不能灭菌高度接种环灭菌不彻底定期检修(三)人员本试验室依据我中心当前与将来业务开展须要，组织制订人员培训支潜在风险因素发生可能性后果严峻性限制措施试验人员技术技术培训不足或操作不娴熟导致误中试验人员需接受相关技术培训并考核合格后方能上岗；定期进行相关培训与演练水平操作人员健康水平试验人员身或患有基础疾病严峻试验室工作人员每年参与体检，预留本底血清标本；试验人员进入BSL-3试验室前需测量体温，体温高于37℃者不能进入未经人员未经授权人员进入BSL-3试验室中进入BSL-3试验室须得到相关部门和试验室负责人的批准，应具体登记出入时间，并保证两名以上的人员同时进入(四)意外事务、事故带来的风险试验室意外事务包括感染性物质的裂开与在台面、地面和其他表面溢出。感染性物质溅入眼睛，皮肤刺伤、误接触污染物(如标识不清、消毒不彻底等缘由)、皮肤刺伤是发生概率比较高的感染缘由。因此，在试验(五)其他风险限制1.工作人员试验活动的非生物风险(化学、物理、辐射、电气)③新的、改装过的或修理过的电气设备在未经专业人员(如有资质的电工或生物医学工程师)完成电气平安测试和设备符合平安运用要求之前运②化学品的毒性作用在操作某些化学品或吸入它们的蒸汽时会对人体健影响外，发生暴露时还可能导致一些不能被马上识别的对人体健康的损可能造成叠氮化铜的猛烈爆炸。因此，叠氮化物不应当与铜或铅(如污水管以与管道设施)接触。乙醚老化和干燥形成结晶后极不稳定，可能会爆2.防护屏障的风险(正常运行、错误运用、功能失常、清洁、维护和关停期间)维护，可能使生物平安柜的气溶胶防护效果明显降低或消逝，失去将会是部分电器元件老化从而失去正常功能。设备的锐角可能会划维护，可能使高压灭菌器效果明显降低或失效，失去去污染与无害导致污染物扩散环境或感染处理人员。设备长期关停期间，假如内(4)个人防护用品。个人防护用品