分子病理诊断的现状与思考

分子病理诊断的现状与思考摘要：基于总体视角，我国分子病理诊断发展进程相比于国外大体上同步，我国国内最早的分子病理针对为上个世纪八十年代的DNA原位杂交，之后随着更多与肿瘤有关的基因被发现，也诞生了更多的检测和抑制癌基因的分子病理技术。鉴于此，文章详细阐述了分子病理诊断的现状及思考，希望能够为行业发展提供帮助。关键词：分子病理；诊断；现状；思考前言：分子病理诊断，具体为经过应用分子生物学技术，基于基因水平视角，判断及检测细胞与组织分子遗传学的变化，它是一种病理诊断技术，在病理诊断、靶向治疗、疗效预测和预后预测等方面都有很大的帮助，其也为转化医学范畴一类。基于本质而言，广义上可把分子病理诊断定义成以组织与细胞分子水平为基础的疾病诊断，狭义上讲，它为一细胞或组织基因水平为基础的一种病理诊断，其可叫做分子病理诊断。1我国分子病理诊断的发展现状概述总体而言，现今，可以说我国分子病理诊断发展进程和国外大体同步。我国最早的分子病理诊断就是上世纪80年代的DNA原位杂交，在社会不断发展进步下，发现了更多的与肿瘤有关的基因，则不断诞生了更多的检测和抑制癌基因的分子病理学技术。本世纪初，肿瘤靶向药物的使用导致了靶向诊断的诞生，乳腺癌HER2基因扩增的FISH检测和肺癌中EGFR基因突变的ARMS检测都是我们较为熟悉的新技术。最近一些年，已经有更多的医院在应用分子病理诊断，所以，可以说，最近一些年，我国分子病理诊断处于蓬勃发展时期，然而，虽然我国分子病理诊断同国际趋势大体相同，当通过对比，我们在认识度及普及方面还有规范化程度上的距离还很大。精准医疗环境下基层医院病理科分子病理学发展面临着巨大的挑战，病理学界应当充分重视这一现实。由于历史、工作环境等诸多原因，我国病理从业人员数量少，分布严重不均。主要存在的问题如下：①医院病理科条件差，病例数量少，不具备开展分子病理检测的条件。②病理科医师和技术人员对分子病理学认识不足，对其检测的临床意义、检测方法及标本规范化处理等方面缺乏必要的知识。③由于以上原因难以满足规范化分子检测的要求，从而严重影响分子病理检测的结果，这已成为分子病理学发展的瓶颈问题。应该看到，不管是从卫生经济学角度，还是从我国病理学现状看，让每一个基层医院病理科均开展分子病理学检测工作既不现实也无必要。应当努力寻求一种适合我国现状的分子病理学科学发展模式，从病理界自身层面努力提高从业人员的分子病理学知识水平，加强分子病理学检测能力建设。精准医学已成为当代医学发展的一个热点方向，因此应当在充分调研的基础上，权衡利弊并提出不同层次医院分子病理检测要求和标准，努力争取卫生行政部门的政策支持和认可。在加强三级医院分子病理学建设的基础上，强化对口支援工作，从而进一步推进我国分子病理学均衡发展，以满足精准医疗环境下临床对分子病理学检测的需求。2我国分子病理诊断技术2.1显色原位杂交（chromogenicinsituhybri-dization,CISH）显色原位杂交的基础原理是核酸分子单链间的碱基互补，将标记有地高辛或生物素的探针与待测的DNA或RNA互补配对后，从而将该位置标记出来。又将待测基因的不同分为：DNA原位杂交（主要应用于基因定位、特定基因检测等）和RNA原位杂交（主要应用于基于表达检测）。显色原位杂交的优点是操作简单、信号稳定、存储方便。是当前应用最广泛的分子病理诊断技术之一。2.2荧光原位杂交（fluorescenceinsituhybridi-zation,FISH）其原理与显色原位杂交相同，区别在于FISH中应用了荧光标记，可以用荧光显微镜观测到信号的表达。随着对荧光原位杂交研究的不断深入与拓展，科研人员又研发出多彩荧光原位杂交，主要是对疾病在染色体水平（检测染色体的易位、缺失、变异等）和DNA水平上的检测（检测基因的突变、易位、缺失等）。FISH在检测中比CISH更安全、快捷、特异性好、定位准确。2.3聚合酶链反映（PCR）PCR的原理是在TaqDNA聚合酶的催化作用下，通过特异的引物，对特定的一段区域采取高温变性、低温退火、适温延伸三个过程扩增，再用凝胶电泳或测序的方法分析产物。该技术检测的是组织、细胞中病毒的DNA。2.4基因芯片（DNA芯片或DNA微阵列）基因芯片的原理是将样品分子DNA/RNA扩增、转录等技术后与DNA芯片的已知序列进行杂交，在计算机的综合分析下，获得样品中基因表达的信息。基因芯片是将已知的DNA/cDNA片段大量集成在固体载体上而得名。基因芯片采用的是已知探针，可以在一次实验中自动、快速完成数千条序列的检测。3我国分子病理的临床应用随着分子病理的快速发展，已经发现了许多肿瘤基因和一些疾病基因，它已应用于临床疾病的诊断，尤其在遗传病、传染病和肿瘤的诊断和药敏试验中发挥了显著的优势。3.1遗传性疾病诊断、分型通过检测病患的基因和染色体，能够更好的预测家族遗传性疾病的发生，如今，临床上常用方法是染色体核型分型、荧光原味杂交等，产前筛查中得以广泛应用。3.2感染性疾病病原体的检测HPV的检测通过原位杂交及PCR-斑点杂交实现；使用原位杂交检测EB病毒；使用PCR对HSV及SARS病毒实施检测等，这部分检测已在临床中得以广泛应用，且在诊断感染性疾病方面发挥着十分重要的作用。3.3肿瘤的病理诊断与临床应用在分子病理诊断的临床应用中，肿瘤诊断和药敏检测应用最为广泛，技术相对成熟，对肿瘤的早期筛查和早期诊断有着十分巨大的作用，在肿瘤诊断和个体化治疗中发挥着相应的辅助作用。肿瘤辅助诊断中，软组织及骨肿瘤的诊断以及淋巴造血系统肿瘤的分子分型应用了分子病理诊断计划，使用荧光原味杂交法检测有肿瘤特征的染色体及融合基因，最终能够在保持基因水平的前提下，更好的对疾病的发生与发展进行了解。4对分子病理诊断所存的思考1）行业协会需要进一步努力将本职工作认真做好，并做好相应的宣传及推动工作，尽可能组织分子病理诊断宣传活动，宣传分子病理诊断对临床诊疗的意义，进而有效提升人们对分子病理诊断的认识度、关注度及重视度。不可只把分子病理诊断完全依附于大城市医院和经济发达的医院，在具备开展分子病理检查软硬件条件和标本来源的医疗机构，也要进一步强化开展力度，积极开展实施。2）分子病理检查需要病理科进行承担，而非仅局限在经济方面的利益，并且需要更多的开展分子病理检查项目，并派病理医师主要负责，最终获得正确的细胞或组织，让检验结果更具根据性，出现的争议更具责任性。同时将生物技术公司的技术、资金、设备等优势发挥出来，与权威可靠的医疗机构病理科合作，组建子病理实验室，进一步推动分子病理诊断的有效开展。3）应该在规范且干净的环境下开展分子病理检查，所以，需要设置各准备区、处理区、制备区还有扩增区及扩增产物的分析区。并应用切实可行的管理方式，进一步将分子病理检查准入制度加以完善，严格规范技术与市场准入条件，严格审查医疗单位开展病理诊断的条件和制度，大力支持和鼓励合格单位，对不合格单位进行惩治，并且对设备技术及诊断人员提高标准与要求，从而进一步完善系统建设。结束语：总的来说，中国的分子病理诊断水平已经可以与国外和国际的分子病理诊断水平相媲美，这是毫无疑问的，但从局部的角度来看，依然有很多的局限性及弊端存在，在面对这部分局限及弊端时，它也给自己带来了一些思考，唯有构建完善的分子