新药肝、肾毒性动物试验中常检测的蛋白质指标-蛋白质的理化性质与分类

蛋白质的变性在某些理化因素作用下，蛋白质的结构被破坏，引起蛋白质理化性质改变和生物活性丧失，这种现象称为蛋白质的变性。一、何为蛋白质的变性？二、致变因素

加热紫外光搅拌强酸强碱1.高级结构遭破坏,一级结构和分子量不变。三、变性蛋白质的特点

破坏不变变性2.生物功能丧失:蛋白质的生物活性是指蛋白质所具有的酶、激素、毒素、抗原与抗体、血红蛋白的载氧能力等生物学功能。在变性时，这些生物功能丧失。三、变性蛋白质的特点

3.易形成沉淀析出，结晶能力丧失。

4.分子形状改变，肽链松散，易被酶消化。三、变性蛋白质的特点

蛋白质变性消毒疫苗血清等生物制品食物煮熟四、蛋白质变性的应用一：蛋白质的两性解离和等电点蛋白质在小于等电点偏酸溶液中带正电荷，在大于等电点偏碱溶液中带负电荷，在等电点pH时为两性离子。应用：电泳：带电颗粒在电场中移动的现象。分子大小不同、所带净电荷不同的蛋白质迁移率不同，在电泳时可以分开。1、醋酸纤维薄膜电泳：基本知识点三：蛋白质的理化性质与分类2、凝胶电泳：琼脂糖凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳基本知识点三：蛋白质的理化性质与分类3、等电聚焦电泳：利用蛋白质在其等电点时，净电荷为零，在电场中不移动的原理。基本知识点三：蛋白质的理化性质与分类二、蛋白质的胶体性质：蛋白质的分子量介于1-100nm之间，是胶体。蛋白质形成稳定的胶体溶液原因：

1）表面形成水膜（水化层）

2）带相同电荷（电荷层）具有布郎运动、丁道尔现象、电泳现象，不能透过半透膜，具有吸附能力。应用：尿常规检测。基本知识点三：蛋白质的理化性质与分类三：蛋白质的变性1、概念：在某些理化因素作用下，蛋白质的结构被破坏，引起蛋白质理化性质改变和生物活性丧失。这种现象称为蛋白质的变性。2、变性的蛋白质的特点：一级结构和分子量不变，高级结构遭破坏。生物功能丧失(疫苗失活)基本知识点三：蛋白质的理化性质与分类易形成沉淀析出，结晶能力丧失，分子形状改变，肽链松散，易被酶消化。3、引起变性的主要因素是热、紫外光、激烈的搅拌以及强酸和强碱等。4、变性的应用：消毒疫苗血清等生物制品食物煮熟基本知识点三：蛋白质的理化性质与分类四、蛋白质的沉淀：1、盐析：加高浓度中性盐（NH4)2SO4）使蛋白质沉淀析出的现象。应用：分离SOD。2、有机溶剂沉淀：乙醇、甲醇、丙酮等。应用：乙醇消毒、湿巾3、重金属盐沉淀：铜、汞、铅、银等。应用：重金属中毒。基本知识点三：蛋白质的理化性质与分类4、生物碱沉淀：单宁酸、苦味酸、三氯乙酸能沉淀蛋白质。应用：发芽的土豆中毒。5、加热沉淀：煮鸡蛋五、蛋白质的呈色反应。1、双缩脲反应：在强碱性溶液中，蛋白质和CuSO4反应，生成紫红色化合物，这个反应称为双缩脲反应。在碱性条件下，生成的颜色深浅与蛋白质的浓渡成正比，将样品同标准蛋白质同时试验，并于540--560nm波长下侧测吸光度值，通过公式可算出蛋白质的浓度。基本知识点三：蛋白质的理化性质与分类2、米伦反应：3、黄色反应：4、坂口反应：以α萘酚和次氯酸处理样品后，精氨酸出现的红色反应：基本知识点三：蛋白质的理化性质与分类含有酪氨酸的物质或其他酚类化合物样品与米伦试剂（硝酸汞和亚硝酸）一起加热出现红色反应的现象。用于酪氨酸以及含有酪氨酸的蛋白质定性测定。5、酚试剂反应：碱性铜试剂与蛋白质产生双缩脲反应，被作用的蛋白质中的酚基（酪氨酸），在碱性条件下很易将磷钼酸和磷钨酸还原为蓝色的钼蓝和钨蓝，所生成蓝色的深浅与蛋白质的含量成正比，因此，在650nm或660nm波长下测定吸光值，即可测定蛋白质含量。6、茚三酮反应:基本知识点三：蛋白质的理化性质与分类根据蛋白质分子外形的对称程度可将其分为两类。

1、球状蛋白质球状蛋白质:溶解度较好，能结晶。大多数蛋白质属于球状蛋白质，如血红蛋白、肌红蛋白、酶、抗体等。基本知识点三：蛋白质的理化性质与分类2、纤维蛋白质纤维蛋白质:类似于细棒状或纤维状，大多数不溶于水，如胶原蛋白、角蛋白等。有些则溶于水，如血纤维蛋白原等基本知识点三：蛋白质的理化性质与分类二、根据化学组成分类根据化学组成可将蛋白质分为两类。（一）简单蛋白质简单蛋白质:分子中只含有氨基酸，没有其它成分。1、清蛋白

清蛋白又称白蛋白，分子量较小，溶于水、中性盐类、稀酸和稀碱，可被饱和硫酸铵沉淀。清蛋白在自然界分布广泛，如小麦种子中的麦清蛋白、血液中的血清清蛋白和鸡蛋中的卵清蛋白等都属于清蛋白。基本知识点三：蛋白质的理化性质与分类2、球蛋白球蛋白:一般不溶于水而溶于稀盐溶液、稀酸或稀碱溶液，可被半饱和的硫酸铵沉淀。大豆种子中的豆球蛋白、血液中的血清球蛋白、肌肉中的肌球蛋白以及免疫球蛋白都属于这一类。基本知识点三：蛋白质的理化性质与分类3、组蛋白组蛋白:可溶于水或稀酸。组蛋白是染色体的结构蛋白，含有丰富的精氨酸和赖氨酸，所以是一类碱性蛋白质。预测前列腺癌和生物钟的调控.基本知识点三：蛋白质的理化性质与分类4、(鱼)精蛋白:把鱼的精子的头部分破碎离出来的一种碱性蛋白，具有一定生物活性。从技术方面来讲，只能从鱼的精子中提取，不能化学合成，就限制了产量。具有抗凝血作用。自2011年7月底开始，南京、武汉、南通等地鱼精蛋白纷纷告急，很多心脏病手术被迫停止。广州、上海等大城市的主要医院，暂时还可供应现有的心外科手术用量。基本知识点三：蛋白质的理化性质与分类5、醇溶蛋白醇溶蛋白:不溶于水和盐溶液，溶于70%～80%的乙醇，多存在于禾本科作物的种子中，如玉米醇溶蛋白、小麦醇溶蛋白。6、谷蛋白类谷蛋白:不溶于水、稀盐溶液，溶于稀酸和稀碱。谷蛋白存在于植物种子中，如水稻种子中的稻谷蛋白和小麦种子中的麦谷蛋白等。基本知识点三：蛋白质的理化性质与分类7、硬蛋白类硬蛋白（scleroproteins）不溶于水、盐溶液、稀酸、稀碱，主要存在于皮肤、毛发、指甲中，起支持和保护作用，如角蛋白、胶原蛋白、弹性蛋白、丝蛋白等。基本知识点三：蛋白质的理化性质与分类（二）结合蛋白质（conjugatedproteins）结合蛋白质（conjugatedproteins）是由蛋白质部分和非蛋白质部分结合而成。主要的结合蛋白有六种：1、核蛋白非蛋白部分为核酸称核蛋白（nucleoprotein）。核蛋白分布广泛，存在于所有生物细胞中。基本知识点三：蛋白质的理化性质与分类2、糖蛋白非蛋白部分为糖类称糖蛋白（glycoprotein）。糖蛋白广泛存在于动物、植物、真菌、细菌及病毒中。基本知识点三：蛋白质的理化性质与分类3、脂蛋白蛋白质和脂类结合构成脂蛋白（lipoprotein）。在脂蛋白中，脂类和蛋白质之间以非共价键结合。脂蛋白广泛分布于细胞和血液中。血浆脂蛋白分为高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）、极低密度脂蛋白（VLDL）及乳糜微粒（CM）。脂蛋白是血脂在血液中存在、转运及代谢的形式，检查脂蛋白不仅可以了解血脂的质与量，也能对其生物功能进行分析。基本知识点三：蛋白质的理化性质与分类1.乳糜微粒（CM）是最大的脂蛋白，主要功能是运输外源性甘油三酯。正常空腹12h后不应该有CM。基本知识点三：蛋白质的理化性质与分类2.高密度脂蛋白（HDL）是血清中颗粒密度最大的一组脂蛋白。主要作用是将肝脏以外组织中的胆固醇转运到肝脏进行分解代谢。HDL被认为是抗动脉粥样硬化因子。，是冠心病的保护因子。俗称“血管清道夫”。参考值1.03-2.07mmol/L3.低密度脂蛋白（LDL）是富含胆固醇的脂蛋白，主要作用是将胆固醇运送到外周血液。是动脉粥样硬化的危险因素之一，被认为是致动脉粥样硬化的因子。参考值≤3.12mmol/L基本知识点三：蛋白质的理化性质与分类4、极低密度脂蛋白VLDL是运输内源性甘油三酯的主要形式。极低密度脂蛋白增高主要原因是甘油三酯增高，常伴有高密度脂蛋白—胆固醇降低和糖耐量降低，血尿酸过多等;还可见于酗酒、胰腺炎、肥胖、糖尿病、低甲状腺素症、肾病综合症、尿毒症及禁食、妊娠等。基本知识点三：蛋白质的理化性质与分类4、色蛋白蛋白质和某些色素物质结合形成色蛋白。非蛋白质部分多为血红素，所以又称为血红素蛋白。基本知识点三：蛋白质的理化性质与分类5、金属