生药学教学课件：第二章 生药的真实性鉴定

美国销售前20植物制剂

银杏、贯叶连翘、紫锥菊（狭叶紫锥花）、人参、大蒜、锯叶棕、北美黄连、卡瓦胡椒、积雪草、当归、缬草、水飞蓟、绿茶、月见草油、生姜、刺五加、葡萄籽、欧洲越桔、蔓越桔、猫爪草银杏科植物银杏

GinkgobilobaL．

银杏果（实际为种子）与银杏叶

中药？生药？天然药物？植物药?贯叶连翘：抗抑郁、抗焦虑

国际市场最大的抗抑郁植物药本草考证在欧洲广泛使用的植物药贯叶连翘其实是一味古老的中药！吴立宏,胡海燕,黄世亮,杨得坡.连翘和贯叶连翘的本草考证.中国中药杂志,2002,27(8):612-616.紫锥菊（Echinacea）是原产于北美和加拿大南部的一种菊科植物，曾是美国销售量最大的植物制剂，由于抗生素的出现而取代，用于消炎作用，如：减少感冒或流感，治疗鼻窦炎或支气管炎、伤口痊愈。中药植物药驴皮阿胶与鱼皮（胶元）蛋白？第二章生药的真实性鉴定

生药鉴定的必要性

我国中药种类繁多，应用历史悠久，由于各地用药习惯的不同，以及生药外形相似等因素，中药的同名异物、同物异名现象普遍存在。比如木通有三个不同的身份，木通科的木通（古称三叶木通）、毛茛科的川木通和马兜铃科的关木通都统称为木通。在我国上一世纪，除了云贵川以外，大部分地区人们使用的中药木通主要是指关木通，而据考证，如今市场常见、临床常用的关木通与《神农本草经》等古籍中所记载的木通虽同名为“木通”，但并非一物。关木通属马兜铃科，其所含马兜铃酸经研究证明可能引起人体肾脏损害，属“有毒”类中药而《神农本草经》中所记载的木通为木通科的木通，其性无毒，目前已改正。生药鉴定的必要性

又如“王不留行”有12种，“独活”有15种以上，“贯众”有50余种，“金银花”有20种，“沙参”有36种，“石斛”有48种植物来源。中药同物异名的现象也很常见,如大血藤科植物大血藤的茎，有的地方称“红藤”，有的称“鸡血藤”，而豆科植物鸡血藤在某些地区又称“大血藤”。另外，在生药商品流通中，以次充好、以假充真，特别是一些贵重生药，时有发现伪品或掺假现象。如麝香、血竭、熊胆、羚羊角、番红花、冬虫夏草等。故生药的鉴定是保证生药品种的真实性、疗效和用药安全的关键因素。生药鉴定依据所规定的生药标准，对商品生药或检品进行真实性与品质优良度的鉴定。生药鉴定的标准－《中国药典》(2010)、局颁标准及直辖市、自治区和省级中药材标准。生药的鉴定包括两个方面：生药的真实性鉴定与生药的品质鉴定。

生药的真实性鉴定(基源鉴定)

是依据该生药的性状、显微、理化等特征，鉴定其植（动）物的学名。包括原植（动）物鉴定、性状鉴定、显微鉴定、理化鉴定及生物检定等项。

生药品质鉴定包括：（1）纯度：杂质含量（2）优良度：水分、浸出物、有效成分含量等生药鉴定（也是真实性鉴定）的内容：（1）原植（动）的鉴定（分类学鉴定）（2）性状鉴定（3）显微鉴定（4）理化鉴定（5）生物检定（6）指纹图谱（7）DNA分子遗传标记鉴定传统四大鉴定方法第1节生药的分类、性状与显微鉴定

生药的原植（动）物鉴定（又称分类学鉴定、来源鉴定），是应用植（动）物分类学的知识，对生药的来源进行鉴定，确定其正确的学名、以确保应用品种的准确性。包括：（1）形态观察、记录（2）文献查阅、核对（3）标本核对

一、性状鉴定

Macroscopicalidentification

运用人体的感官看、摸、闻、尝及水试、火试等直观的方法，对生药的形状、大小、色泽、表面特征、质地、折断现象、断面特征以及气、味等性状的鉴定,又称传统经验鉴别。如党参“皮松肉紧有狮子盘头”三七“铜皮铁骨狮子头”性状鉴定的内容1.形状生药的形状特征，与药用部位有关。根类生药有圆柱形、圆锥形、纺锤形等；根茎类生药中块茎常呈长圆形或不规则形，球茎和鳞茎常呈球形、类球形或扁球形；皮类生药有卷筒状、板片状等；种子类生药有圆球形、扁球形等。如防风的根茎部分称“蚯蚓头”；海马的外形为“马头蛇尾瓦楞身”

2.大小

系指药材的长短、粗细（直径）和厚薄，可多次测量取平均值。

性状鉴定的内容3.色泽

药材的色泽，包括表面和断面的色泽，一般应在日光灯下观察，同一生药的色泽变化与生药质量有关。如玄参要黑、丹参要紫、茜草要红、黄连要黄。又如黄芩主要含黄芩苷、汉黄芩苷等，如保管或加工不当，黄芩苷在黄芩酶作用下水解成葡萄糖醛酸与黄芩素，黄芩素具3个邻位酚羟基，易氧化成醌类而显绿色，故黄芩变绿后质量降低。性状鉴定的内容4.表面

指药材的表面所能看到的特征，如光滑、粗糙、皱纹、皮孔或毛茸及其它附属物等，皮类生药的表面特征包括外表面和内表面，叶类生药包括上表面和下表面。

性状鉴定的内容5.质地

指折试药材所感知的特征，一般用软硬、坚韧、疏松、致密、粘性或粉性、轻重、油润、绵性、角质、柴性等术语形容。生药富含淀粉，折断时有粉尘散落，谓之“粉性”，如山药:质地柔软，含油而润泽，谓之“油润”，如当归；质地坚硬，断面半透明状或有光泽，谓之“角质”，如郁金等。性状鉴定的内容6.断面

对于根及根茎、茎和皮类生药的鉴别，折断面观察很重要。

如茅苍术易折断，断面放置能“起霜”（析出白毛状结晶），白术不易折断，断面放置不“起霜”；甘草折断时有粉尘散落（淀粉）；杜仲折断时有胶丝相连；黄柏折断面，呈纤维性；厚朴折断面可见亮星。

横切（削）面，注意观察皮部与木部的比例、维管束的排列方式、射线的分布、油点的多少等。常用的术语有黄芪“菊花心”，粉防己“车轮纹”，茅苍术“朱砂点”，大黄“星点”，何首乌“云锦纹”，商陆“罗盘纹”。

7.气

有些生药有特殊的香气或臭气，如檀香、阿魏、麝香、肉桂、牡丹皮。8.味

这里的“味”指口尝的实际滋味，是衡量生药品质的标准之一。乌梅、山楂以味酸为佳黄连、黄柏为味苦为优甘草、党参以味甜为好性状鉴定的内容9.水试：利用生药在水中或遇水发生沉浮、溶解、颜色变化、透明度、膨胀性、旋转性、粘性、酸碱性等特殊变化进行生药鉴定的方法，如西红花加水浸泡后，水染成金黄色；秦皮水浸出液日光下显碧蓝色荧光。10.火试：有些生药用火烧之，能产生特殊的气味、颜色、烟雾、闪光或响声等特殊现象，作为鉴别生药的方法，如麝香少许用火烧之有轻微的爆鸣声，起油点如珠，似烧毛发但无臭气，灰白色。马头蛇尾瓦楞身

掌叶大黄Rheumpalmatum星点：指大黄根茎横切面上暗红橙色的放射状小点，环列或散在，如星星点缀，由异型维管束所形成。

杜仲

要熟悉一些常用的术语：（1）根类外形：头、芦、身、梢、须、纹、皱、槽、沟、连珠等。（2）断面或饮片：菊花纹(黄芪）、车轮纹（粉防己）、云锦纹（何首乌）、网纹、朱砂点（朱砂）、粉尘、霜（茅苍术）等。（3）质地及折断：硬软、结松、轻重、韧脆、弹柔以及粉质、角质、油润、棉性、柴性、粘性等。总结归纳各类药材的性状鉴别要点P21:

重点放在根及根茎类，尤其是双子叶植物与单子叶植物的区别。注意一些术语：二、生药的显微鉴定

Microscopicalidentification

生药的显微鉴定是利用显微镜对生药及成方制剂中药的组织、细胞或内含物等特征进行鉴别的一种方法，该方法是生药鉴别的重要手段之一。常用方法

（1）横切片或纵切片 根、根茎、茎藤、皮、叶类，一般横切，必要时纵切片；果实、种子类，横及纵切；木类，横切、径向及切向纵切。（2）表面制片 鉴定叶、花、果实、种子、全草等类生药，可取叶片、萼片、花冠、果皮、种皮制表面片，加适宜试液，观察各部位的表面（皮）特征。（3）粉末制片粉末生药可选用甘油醋酸、水合氯醛等试液处理后观察。（4）解离组织片：如需观察细胞的完整形态，尤其是纤维、导管、管胞、石细胞等细胞彼此不易分离的组织，需利用化学试剂使组织中各细胞之间的细胞间质溶解，使细胞分离。 如KOH法、硝铬酸法或氯酸钾法。（5）细胞内含物鉴定：淀粉粒：遇碘显蓝色或蓝紫色，甘油醋酸或蒸馏水装片，利用偏振光显微镜观察糊化淀粉粒的偏光现象（呈黑十字）；糊粉粒：甘油装片，碘试液显棕色或黄棕色，硝酸汞试液显砖红色；菊糖：加10%的a-萘酚的乙醇溶液，再加硫酸，显紫红色并很快溶解；草酸钙结晶：装片中加入硫酸溶液逐渐溶解，并析出针状CaSO4结晶；碳酸钙：加入稀盐酸可溶解，同时放出气泡；硅质：加H2SO4不溶解；粘液：加钌红试液显红色；脂肪油、挥发油或树脂：加苏丹Ⅲ呈橘红色、红色或紫红色；加EtOH脂肪油不溶解，挥发油则溶解。（6）细胞壁性质鉴定：木质化：加间苯三酚及浓盐酸显红色或紫红色；木栓化或角质化：苏丹Ⅲ，呈橘红色至红色；纤维素：加ZnCl2—Ⅰ2试液显蓝色或紫色；硅质化：加H2SO4无变化。

（7）细胞及细胞内含物的测量： 测微技术，以μm计算，目镜测微尺，载物台测微尺（标化用）。蒙古黄芪(药材)菊花心：指药材横切面上，外围色较淡，呈白色或淡黄白色，中央色较深，呈黄色或深黄色，从中央至外圈有不甚直的致密的放射状纹理（主要是木射线和韧皮射线交错形成），形如开放的菊花。其他有桔梗、甘草、党参等。

注意区别根类、根茎类、皮类、木类、叶类、花类、果实类、种子类、全草类等生药的显微鉴别要点，尤其注意区分双子叶植物与单子叶植物显微结构的不同，在生药鉴定中的意义。

讨论第2节

生药的理化、生物检定与DNA分子鉴定一、理化鉴定

Physicalandchimecalidentification

对生药所含主要化学成分或有效成分进行定性和定量分析，来鉴定生药真实性及品质优良度的一种方法。 该种方法一般应用于含不同化学成分生药的鉴定，及生药同名异物的生药鉴定。 定性分析确定生药的真实性；定量分析确定生药的品质优良度。

1.显微化学反应Micro-chemicalreaction

是将生药的干粉、切片或浸出液少量，置于载玻片上，滴加某些化学试剂使产生沉淀或结晶，在显微镜下观察反应结果；或产生特殊颜色；或进行显微化学定位，从而进行鉴定。如黄连粉末滴加稀盐酸，可见针簇状结晶；丁香滴加3%氢氧化钠的饱和氯化钠溶液，油室内有针状丁香酚析出。2.物理常数相对密度、旋光性、折光率、凝点、熔点等，对于油脂类、挥发油及树脂类药材的真实性和纯度的鉴定具有特别重要的意义。如植物油，相对密度、酸值与碘值很重要。3.微量升华 从少量药材中获得升华物，然后在显微镜下观察其形状、颜色及化学反应作为鉴别特征。 如茶叶（白色针状咖啡碱）、薄荷（薄荷脑）、大黄、牡丹皮（丹皮酚）等均可用此法进行鉴定。

4.荧光分析 荧光分析仪（紫外光灯） 荧光显微镜5.分光光度法（1）紫外分光光度法：紫外分光光度计，200-400nm，该法没有红外光区的选择性强，目前主要用于定量分析及作为物理常数的测定。（2）比色法：可见分光光度计，可见光区，380-760nm，此法多用于生药的定量分析及作为物理常数的测定。（3）红外分光光度法：一般用2.5-15μm（或按波数4000-667cm-1），红外分光光度计，定性、定量分析。红外光谱的特征性很强，特别是在7-15μm，一段称为“指纹区”，吸收峰很多，而且尖锐，故主要用于物质的鉴别和结构分析。（4）原子吸收分光光度法：测定生药中的微量金属元素的含量。

紫外可见分光光度法(P38)紫外可见分光光度仪6.色谱法：生药鉴定中比较重要的色谱主要有：（1）色谱（PC）：展开剂、显色剂、Rf值。（2）薄层色谱（TLC）：吸附剂、展开剂、显色剂、Rf值。（3）柱色谱：吸附柱色谱，分配柱色谱。（4）气相色谱法（GC）：主要用于挥发性成分生药鉴定与含量分析。另外，农药残留也常用GC法分析。（5）HPLC：主要应用于生药及其制剂的质量分析。

薄层色谱法

ThinLayerChromatography（TLC）

薄层色谱参数比移值（Rf）试样经薄层层析原各组分在薄层上的色斑位置通常用比移植（Rf）来描述，由物质A、B组成的混合试样，经展开后所得物质A与B的Rf值为：

Rf=原点到斑点中心的距离(L)原点到溶剂前沿的距离（L0)比移值的计算HPLC,GC,GC-MS定性指标：tR定量指标：A(峰面积）利用A=a﹒C+b,求出C,继而得出含量。定量方法面积归一化法内标法外标法外标一点法标准曲线法外标两点法HPLCGC-MSGCGC-MS无需标准品即可定性鉴别往往采用面积归一化法测定含量GC-MS经计算机检索MS图库二、生物检定

生物检定：

又称生物测定，是利用药物对于生物(离体、离体组织、细胞、酶或分子等)所起的作用，以测定药物的效价或作用强度的一种方法，也就是利用药理作用强度来鉴定生药的真实性与优良度。基本原理：药物对于生物所起的作用，就是药理作用，所以生物检定是以药理学为基础。有的生药如马钱子、颠茄等，其主要有效成分的含量，可以用理化分析的方法加以测定，根据含量来决定其质量与剂量。但也有些生药，如含强心苷成分的洋地黄等，因缺乏适当准确的理化分析方法来决定其有效成分的含量或效价，因此必须通过药理作用的观察测定其效价单位的大小来评价其质量，即在一定条件下发生一定程度药理反应的药量(最小剂量)作为效价单位。

通常采用标准品和样品对照的方法来确定样品的效价单位。所谓标准品就是选定一批与样品成分相同的药物，并规定其中一定量作为一个效价单位，然后把样品和标准品在同一实验条件下进行比较，测出样品的作用与标准品多少单位的作用相同，即含有多少单位。例如：洋地黄标准品每克含10个效价单位，用鸽子试验致死量为90.5mg／kg，如样品洋地黄致死量为100mg／kg，两者相比标准品的强度是样品的1.1倍，即样品每g含9.05单位。

《中国药典》规定洋地黄叶(FoliumDigitalis)每1g效价不少于10个洋地黄单位。生药的生物检定法，药典中有规定，可参照执行。

中药或中药材是典型的复杂体系，多组分与多作用靶点，对药效了解较多，化学成分不十分清楚或不清楚，单独依靠一两个化合物含量的测定来评价中药是不全面的，综合运用指纹图谱，并结合计算机智能信息处理,来比较中药成分的异同和含量的差异，可以对中药有一个全面的评价。三、指纹图谱1.中药指纹图谱的来源与概念

中药指纹图谱是借用DNA指纹图谱发展而来的,最先发展起来的是中药化学成分谱指纹图谱,特别是高效液相(HPLC)色谱指纹图谱。中药材指纹图谱系指中药材经适当处理后,采用一定的分析手段,得到的能够标示该中药材特性的共有峰的图谱。

指纹图谱不强调个体的绝对唯一性，而强调同一类药材的相似性，或者中药及其制剂内在质量的均一性和稳定性，如银杏叶提取物EGb761。

色谱指纹图谱是SFDA进行中药材鉴定和成药质量控制的推荐技术之一。

美国FDA和欧洲CE允许草药及其制剂申报材料提供相应的指纹图谱资料。

中药注射剂要提供相应的指纹图谱资料。中药化学指纹图谱常用的研究方法

(1)色谱法:包括传统的薄层色谱法、液相色谱法、气相色谱法、高效毛细管电泳法等。(2)光谱法:包括紫外光谱法、红外光谱法、近红外光谱法等。(3)其它方法:如X射线衍射法、核磁共振法等。

中药指纹图谱研究方法虽然较多,但色谱法却是主流方法,尤其是TLC,HPLC和GC色谱技术,已经成为大家所公认的3种常规的分析手段,是目前我们研究中药指纹图谱应优先考虑的方法。贯叶连翘贯叶金丝桃（原药材）HPLC图谱提取物（贯叶金丝桃素）HPLC图谱提取物（黄酮类化合物）HPLC图谱

采

收

期

指

纹

图

谱

分

析3相色谱仪分析。

3月4日124568791011124月3日3月14日3月24日4月14日岩黄连脱氢卡维汀

采

收

部位

指

纹

图

谱

分

析根茎叶花产地干燥加工方法

－－指纹图谱分析根四、DNA分子遗传标记鉴定

DNAmoleculargeneticmarker

生药DNA分子遗传标记鉴定是指通过比较生药间DNA分子遗传多样性差异来鉴别生药基源，确定其学名的方法。其具有遗传稳定性、遗传多样性、化学稳定性三个特性。目前该技术多用于同属多来源药材的鉴别与道地药材的鉴别等。DNA分子遗传标记技术三特性

⑴遗传的稳定性：DNA不受外界因素和生物体发育阶段及器官差异的影响，每一个体的任一体细胞均含有相同的遗传信息。因此，用DNA分子特征作为遗传标记进行物种鉴别更为准确可靠。⑵遗传的多样性：DNA分子由G、A、C、T这4种碱基构成，不同物种遗传上的差异体现