三种酵母生长曲线的测定

三种酵母生长曲线的测定

母细胞是一个真正的微生物，在生活中非常有用，比如馒头、馒头和酒精饮料的生产。在酿酒工业中,如白酒、果酒、啤酒的生产,都需要酵母。在生产中如何选择菌种,何时增加营养物质非常关键。通过酵母菌生长曲线的测定,了解其生长规律有着非常重要的意义。本文通过对比研究啤酒酵母、果酒酵母、活性化干酵母三种酵母菌的生长曲线,找出其生长规律,以期为生产中有效地应用酵母菌奠定理论基础。1材料和方法1.1材料和试剂1.1.1病毒进口啤酒酵母,实验室转种保藏;果酒酵母,实验室转种保藏;高活性干酵母,安琪酵母股份有限公司。1.1.2培养基豆芽汁培养基:豆芽(10%)煮沸30min,过滤加糖(5%葡萄糖),自然pH。1.1.3仪器、试药和仪器752紫外可见分光光度计,上海青华科技仪器有限公司;电热恒温鼓风干燥箱,上海三发科技有限公司;恒温培养箱,上海智城分析仪器;恒温培养震荡器,上海智城分析仪器;压力蒸汽灭菌锅,上海申安医疗械器厂;超净化工作台,吴江市净化设备厂,LG电冰箱,LG电子冷机公司。1.2实验方法1.2.1活化称取5g干酵母,加入到50mL已灭菌的4%葡萄糖液中,轻轻晃动,并于35℃恒温水浴锅中保温20min,至有大量气泡产生时,活化完成。1.2.2培养液体培养基用无菌方法将3种菌种分别经培养器分离纯化,取单菌落接种于豆芽汁斜面培养基上,置28℃恒温培养箱中培养48h后,保存于4℃冰箱备用。1.2.3菌种的培养从啤酒酵母、果酒酵母、活性干酵母三种斜面酵母菌中分别取1环,对应接种于3瓶100mL液体豆芽汁培养基中,于28℃150r/min的摇床中培养18h后,保存于4℃冰箱备用。1.2.4酵母菌耐水剂的制备取装有50mL液体豆芽汁培养基的250mL三角瓶3个,标号为1、2、3,作为空白对照组,放入4℃冰箱中保存。另取装有50mL液体豆芽汁培养基的250mL三角瓶39个,并将其分为3组,每组13个。向以上3组培养基中对应加入3种酵母菌的种子培养液2mL,贴好标签,置于280℃150r/min的恒温培养震荡器中培养,从0h开始,每隔4h取出每组中的一个三角瓶,收集培养液,以未接种酵母菌的液体培养基为空白对照,在560nm处测定其吸光度A。如果菌悬液太浓,可适当稀释,测定值控制在0.1-0.8之间。1.2.5生长曲线的绘制以时间(t/h)为横坐标,A×稀释倍数的值为纵坐标,绘制3种酵母菌的生长曲线。2结果与分析2.1进口啤酒发酵母生长规律2.1.1不同时期内，培养液的吸收a被测定为对进口啤酒酵母不同时间培养液吸光度A结果见表1。2.1.2再造后的数分长啤酒酵母的生长曲线图见图1。由图1可知,啤酒酵母的对数生长期在8-30h,且在30h时生长最为旺盛,A值达到9以上。此时期的菌株活力最强,个体形态及生理指标都较为稳定,是菌种采样留种的好时期。2.2果实、鸡和螺母的生长规律2.2.1不同时期果酒培养基的吸收测定对果酒酵母不同时间培养液吸光度测定结果见表2。2.2.2果酒酵母的生长果酒酵母的生长曲线图见图2。从图2可以看出,果酒酵母的对数生长期为4-24h,稳定期为24-32h。果酒酵母的对数期及稳定期都较长,有利于菌株产生代谢物质和发酵果酒。2.3高活性干分解母生长规律2.3.1不同时期高活性干酪母溶液的吸收测定对高活性干酵母不同时间培养液吸光度测定结果见表3。2.3.2h级酵母生长高活性干酵母的生长曲线图见图3。由图3可知,活性干酵母的对数生长期为4-20h,此时期酵母生长迅速,在20h时其A×稀释倍数的值已达到10以上。此外,活性干酵母的稳定期为20-32h,达到了12h,较长的稳定期使得生产上能收获较多的代谢物质。2.4啤酒酵母菌的生长特性三种酵母在酒品生产中发挥重要的作用,但三种酵母的生长规律并不完全相同(见表4)。由表4可知,三种酵母菌均在32h后进入衰亡期,果酒酵母和活性干酵母的迟缓期较短,而对数期和稳定期相对较长,即这两种酵母菌在生产应用中更利于生产取菌及收集代谢产物。啤酒酵母的迟缓期和对数期较长而稳定期较短,即啤酒酵母生长较快,但不利于代谢产物的积累。三种菌种各有优缺点,在实际生产中应结合实际情况进行选择。3不同菌种的生长规律酿酒酵母是近40年来作为生物技术用于生产最广泛的微生物菌种,是影响乙醛、乙酸乙酯、双乙酰等生成的重要因素,选用合适的酿酒酵母对生产酒制品具有重要意义。目前果酒酵母仍以葡萄酒酵母及果酒干酵母为主,缺乏各种果酒的专用酵母,而新筛选的果酒酵母则很少对其生长规律进行研究。各种酵母的生长规律存在差异性,研究不同酵母的生长规律仍具有必要性。啤酒酵母对啤酒的风味产生起着关键作用,但目前使用的啤酒酵母仍存在生产性能不佳的弊端,今后仍需筛选优质啤酒酵母及通过改良的方式获得优质啤酒酵母。酿酒的活性干酵母是一种生物活性制品,具有比普通酵母菌更优良的品质,其应用前景广阔。在生产实际中,应根据不同菌种的生长规律及其发酵特性,