2023年-高二生物人教版一教学案：专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数版含答案生物

公众号：惟微小筑公众号：惟微小筑(阅读教材P21～23)1．筛选菌株微生物筛选的原理：人为供给有利于目的菌株生长的条件(包括养分、温度、pH等),同时抑制或阻挡其他微生物的生长,该类培育基是选择培育基.统计菌落数目统计菌落数目的常用方法：稀释涂布平板法.统计依据：当样品的稀释度足够高时,培育基外表生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌.通过统计平板上的菌落数,.设置比照：排解试验组中非测试因素对试验结果的影响,提高试验结果的可信度.(阅读教材P23～24)操作步骤：土壤取样→样品的稀释→微生物的培育与观看.1．土壤取样一般要铲去表层土,由于绝|大多数细菌分布于距地表约3～8_cm的土壤层.样品的稀释：不同的微生物需要稀释的倍数不同,请填写下表微生物微生物稀释倍数细菌104、105、106放线菌103、104、105真菌102、103、104微生物的培育与观看微生物的生长受温度的影响,菌落的数目和特征是观看的主要内容.(阅读教材P25～26)无菌操作：取土样用的小铁铲和盛土样的信封都要进展灭菌.称取土样要在火焰旁进展..做标记：对平板和试管进展标记,尤其进展系列稀释时要依据稀释度递增的挨次将.四、课题延长(阅读教材P26)1．分解尿素的细菌合成的脲酶将尿素分解成氨,使培育基的碱性增加.2假设指示剂变红,可确定该种细菌能够分解尿素.[共研探究]自然界中目的菌株的筛选如图是美|国黄石国|家公园的一个热泉,从耐热细菌中别离到耐高温的TaqDNA聚合酶.实例：DNA多聚酶链式反响(PCR)是一种在体外将少量DNA大量复制的技术,此项技术要求使用耐高温(93℃左右)的DNA.Taq细菌能从热泉中被筛选出来的缘由：热泉温度70～80℃,淘汰了绝|大多数微生物,Taq.,到相应.试验室中目的菌株的筛选(pH等),同时抑制或阻挡.方法：利用选择培育基别离.(3)选择培育基①概念：允许特定种类的微生物生长,同时阻挡或抑制其他种类微生物生长的培育基.②下面是本课题使用的培育基的配方,请分析：KHKH2PO4Na2HPO4MgSO4 7H2O·葡萄糖尿素琼脂将上述物质溶解后,用蒸1000mL1.4g2.1g0.2g10.0g1.0gg琼脂,从物理性质看此培育基属于固体培育基,从功能上看属于选择培育基.b,碳源是葡萄糖,氮源是尿素.c．绝|大多数微生物都能利用葡萄糖,只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素.以尿素为唯一氮源的培育基可以别离得到产生脲酶的微生物(即分解尿素的微生物).统计菌落数目常用来统计样品中活菌数目的方法是稀释涂布平板法.(1)统计菌落数目①稀释：当样品的稀释度足够高时,培育基外表生长的一个菌落,来源于样品稀释液中.②计数：一般选择菌落数在30～300的平板进展计数.③统计：通过统计平板上的菌落数,就能推想出样品中大约含有多少活菌.为使结果接近真实值,可将同一稀释度加到三个或三个以上的平板中,经涂布,培育计算出菌落平均数.(2)活菌数的计算方法(公式)：每克样品中的菌株数＝(C÷V)×M,C平板上生长的平均菌落数；V表示：涂布平板时所用的稀释液的体积；M表示稀释倍数.设置比照设置比照的主要目的是排解试验组中非测试因素对试验结果的影响,提高试验结果.设置比照的方法：①空白比照：不给比照组任何处理因素；②条件比照：给比照组施以局部试验因素,但不是所要争论的处理因素；③自身比照：比照组和试验组都在同一争论,.教材P22～23供给的案例中A同学的结果与其他同学不同,可能的解释有两种.一是由于土样不同,二是由于培育基污染或操作失误.如何设置比照试验来确定缘由?提示：方案一：其他同学用与A同学一样的土样进展试验,假设结果与A同学全都,那么证明A同学操作无误；假设结果不同,那么证明A同学存在操作失误或培育基的配制有问题.A同学配制的培育基在不加土样的状况下进展培育,作为空白比照,以证明培育基是否受到污染.【拓展】显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法,在显微镜下计算肯定容积的样品中微生物的数量,但不能区分细菌的死活.计数板是一块特制的载玻片,上面有一个特定的1mm20.1mm的计数室,1mm225个(16个)中格,每16个(25个)小格,400个小格组成.操作：盖上盖玻片,将稀释的样品滴在计数板上,然后在显微镜下计数4～5个中格中的细菌数,并求出每个小格所含细菌的平均数,再按公式求出每毫升样品中所含的细菌数.计数公式：每毫升原液所含细菌数＝每小格平均细菌数×400×10000×稀释倍数.(4)缺点：不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；需要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以观看.1．选择培育基

[总结升华](1)选择培育基的含义：在培育基中参与某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,.目的是从众多微生物中别离出所需要的微生物.(2)常见的选择培育基①参与青霉素可以别离出酵母菌和霉菌.②参与高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌.③无氮源培育基可以别离固氮微生物.④以石油为唯一碳源的培育基,可以别离能消退石油污染的微生物.⑤将培育基放在高温环境中培育,别离耐高温的微生物.2．用稀释涂布平板法对微生物进展计数时的本卷须知为了保证结果准确,一般设置3～5个平板,选择菌落数在30～300的平板进展计数,并取其平均值.统计的菌落数往往比活菌的实际数目低,缘由是当两个或多个细胞连在一起时,平板上观看到的只是一个菌落.因此,.[对点演练]1．要从多种细菌中别离某种细菌,培育基要用( A．参与青霉素的培育基B．固体培育基C．液体培育基D．参与高浓度食盐的培育基解析：选B 将聚拢的菌种逐步稀释分散到固体培育基的外表,经过培育,可以别离到由一个细胞生殖而来的肉眼可见的肯定形态的菌落,即别离出某种细菌.[共研探究]下面是土壤中分解尿素的细菌的别离与计数的试验流程示意图,请结合教材供给的资料分析：试验设计和操作提示步骤 试验操作从酸碱度接近中性的潮湿土壤土壤 中取样.先铲去表层土3～取样 8_cm,再取样,将样品装入事先预备好的信封中制备分别配制牛肉膏蛋白胨培育基培育和以尿素为唯一氮源的选择培基 养基10g90mL无菌水的锥形瓶中,充分摇匀②吸取上清液1mL,转移至|盛样品有9mL无菌水的无菌大试管的稀中,依据上图流程进展样品的释和 稀释103～107稀释度的挨次分别吸取mL进展平板涂布操作.依据浓度从低到高的挨次涂布平板,不必更换移液管30～37_℃温度下培育.随着培育时间的延长,会有不同的菌落产培育生.比较牛肉膏蛋白胨培育基和选择培育基中菌落的数量、形态等,并做好记录当菌落数目稳定时,选取菌落数30～300的平板进展计数.在同一稀释度下,至|少对计数3个平板进展重复计数,然后求出平均值,并依据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目

操作提示取样用的小铁铲和盛土样的信封都要经过灭菌牛肉膏蛋白胨培育基可以作为比照,用来推断选择培育基是否起到了选择作用①应在火焰旁称取土样②由于初次试验,对于稀释的范围没有把握,因此选择了一103～107倍的稀释液③试验时要对所用的平板、试管作好标记.如培育皿要注明培育基类型、培育时间、稀释度、培育物等在牛肉膏蛋白胨培育基上生长的菌落数目应明显多于选择培育基上的数目,才说明选择培育基有选择作用22个以上菌落数目符合要求的平板,那么说明稀释操作比较成功②假设同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大,说明试验不准确,需要重试验③在菌落计数时,24h统计一次菌落数目计一次菌落数目.选取菌落数目稳定时的记录作为结果,以防止因培育时间缺乏而导致遗漏一些菌落土壤中微生物的别离与计数的重点剖析(1)样品的稀释和涂布①观看流程示意图(P232－7),在样品稀释时每一次用吸管吸取土壤悬液前,都要吹吸三次后再吸取,目的：使土壤悬液中的菌种分布均匀,保证所吸取样液中的菌种均衡性,.②为什么别离不同的微生物要承受不同的稀释度?提示：a：土壤中各类微生物的数量(单位：株/kg)是不同的,因此为获得不同类型的微生物就需要按不同的稀释度进展别离.微生物稀释度细菌微生物稀释度细菌104、105、106放线菌103、104、105真菌102、103、104c.30～300间的平板进展计数.2230～300的平板,.(2)选择培育基①伊红-美蓝只能显示有无大肠杆菌,不能只允许一种微生物生存而抑制或影响其他微生物的生存,所以伊红-.②一种自养微生物与多种异养微生物混合在一起,如何将自养微生物选择出来?用不含有机碳源的培育基进展培育,由于自养微生物可以利用空气中的CO2而异养微生物不行以,所以能在培育基中生存的就是自养微生物.③某地发生石油泄漏大事,一些微生物可以有效地分解石油,如何配制选择培育基将这?提示：配制的选择培育基中 ,石油作为唯一的碳源 ,然后用这种培育基培育多种微生物,但凡能在该种培育基上生存的就是能分解石油的微生物.菌落特征：包括菌落的外形、大小、隆起程度和颜色等.菌种的鉴定选择选择培育基中不同形态的菌落接入含酚红培育基的斜面中,由于细菌合成的脲酶分解尿素产生了氨,使培育基的碱性增加,pH上升,使指示剂变色,菌落四周变红.[总结升华]1．别离分解尿素的细菌的试验设计设立重复组：统计某一稀释度下平板上的菌落数时,每一稀释倍数的菌液都至|少要涂布3个平板,作为试验重复,求其平均值,假设其中有菌落数与其他试验差距悬殊的,需.设立两种比照组①推断培育基中是否有杂菌污染,需将未接种的选择培育基同时进展培育.②推断选择培育基是否具有筛选作用,需设立牛肉膏蛋白胨培育基进展接种后培育,观看,.2．别离尿素分解菌操作的本卷须知在试验操作中,每个步骤都要留意无菌操作,以防培育基被污染,影响试验效果.样品稀释液的最|正确浓度为每个平板上有30～300个菌落,这个稀释度细菌一般为104、105、106倍液,103、104、105倍液,102、103、104倍液.为排解非测试因素(培育基)的干扰,试验需设置牛肉膏蛋白胨培育基进展空白比照.[对点演练]2人们在争论微生物时一般要将它们别离提纯,然后进展数量的测定.下面是对大肠杆菌进展数量测定的试验,请答复有关问题：试验步骤：(1)制备稀释倍数为102、103、104、105、106的系列稀释液.(2)选用 法接种样品.(3)适宜温度下培育.结果分析：测定的大肠杆菌数,在对应稀释倍数为106的培育基中,得到以下几种统计结果,正确可信的是( )一个平板,23两个平板,2226,24三个平板,21、552,26四个平板,21、30、2425,25一同学在稀释倍数为106,那么每毫升样品中的菌株数是(涂布平板时所用稀释液的体积为0.2mL) .用这种方法测定大肠杆菌数量 ,实际活菌数量要比测得的数量 .

,由于某同学在测定大肠杆菌的密度时觉察,在培育基上还有其他杂菌的菌落,能否确定该大肠杆菌的品系被污染了?为什么? .解析：试验步骤：(2)假设要对大肠杆菌进展计数,常用稀释涂布平板法接种样品.结果分析：(1)在选取样品时,应选取多个菌落数相差不大的平板计数,取其平均值.(2)平均菌落数每毫升样品中菌株数＝ ××106×108.(3)由于菌落可能由1个或多个细菌连在一稀释液体积起生长而成,所以实际活菌数量比测得的数量多.(4)污染的缘由可能是菌种不纯,也可能是培育基灭菌不彻底或接种过程操作不当.答案：试验步骤：(2)稀释涂布平板×108 (3)多当两个或多个细胞连在一起时,平板上观看到的是一个菌落(4)不能.由于不能排解杂菌来自培育基或培育过程在缺乏氮源的培育基上,大局部微生物无法生长；在培育基中参与青霉素可以抑制10%的酚可以抑制细菌和霉菌的生长.利用上述选择培育基依次能从混杂的微生物群体中别离出()A．乳酸菌、金黄色葡萄球菌、放线菌B．固氮细菌、大肠杆菌、放线菌C．固氮细菌、霉菌、放线菌D．固氮细菌、金黄色葡萄球菌、放线菌解析选C 固氮细菌可以在无氮培育基上生长青霉素可以抑制细菌和放线菌的生长,但不会抑制霉菌的生长参与10%的酚的培育基可以抑制细菌和霉菌的生长,但不会抑制放线菌的生长.用稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目.在某稀释浓度下某同学做了假设干个平板并统计每个平板的菌落数,最|接近样品中菌体数真实值的是( )菌落数量最|多的平板B．菌落数量最|少的平板C．菌落数量适中的平板D．假设干个平板菌落数量的平均值解析：选D 用稀释涂布平板法对样品中活菌数目进展统计,只是一种估测,依据此方法的试验过程可知,在某一稀释度下涂布的平板菌体数具有肯定的偶然性 ,并不是绝|对均匀,所以假设干个平板菌落数量的平均值比较接近样品中菌株数的真实值.以下是关于“检测土壤中细菌总数〞试验操作的表达,其中错误的选项是( A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培育基,经高温、高压灭菌后倒平板104、105、1060.1mL,分别涂布于各组平板上C．将试验组和比照组平板倒置,37℃恒温培育24～48小时D．确定比照组无菌后,300以