结肠炎速效颗粒水煎工艺研究

结肠炎速效颗粒水煎工艺研究

蠕虫的奇效应是由骨碎补、生车前子和炒车前子组成的复方制剂。这是研究组开发的六种中药药物。具有温肾、调脾、祛瘀、导血、通便的功效，主要用于脾阳虚证和血瘀证的腹泻，如腹泻、腹痛、热压、脓血大便等。慢性非特异性溃疡性胃炎见上述症状。由于生车前子、车前子(炒)等3味药中所含有效成分易溶于热水,故拟将这3味药材与炒山楂一起采用水煎法进行提取。本文从煎煮方式、水煎因素水平的选择两个方面进行了试验。应用正交试验法,考察加水量、提取次数、提取时间对提取效果的影响,以京尼平苷酸的含量为考察指标,确定了结肠炎奇效颗粒水提取的最佳工艺条件。报道如下。1超声仪器与干燥箱岛津LC-10A高效液相色谱仪,SHIMADZUAUW120D电子分析天平(d=0.01mg,日本岛津),KQ3200型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司,120W,40KHz),ZK-82型电热真空干燥箱(上海实验仪器厂有限公司)。京尼平苷酸对照品(供含量测定用,批号:111828-201001)购于中国食品药品检定研究院;乙腈为色谱纯,其他试剂均为分析纯。所有药材均购于吉林省宏检药材公司,符合《中国药典》2010年版标准。车前子经本实验室王隶书研究员鉴定为车前科植物车前(PlantagoasiaticalL.)的干燥成熟种子,产于江西。2方法和结果2.1烹饪方法的选择2.1.1提取过程2.1.1.不同的加水量取生车前子400g、车前子(炒)400g、炒山楂300g、诃子肉100g,加水煎煮2次,每次2h,每次加水量为9600ml,结果在第一次煎煮时底部即出现糊化现象,故此方法不宜采用。2.1.1.浸提液浓缩取生车前子400g、车前子(炒)400g放入布袋中,与炒山楂300g、诃子肉100g一起加水煎煮2次,每次2h,每次加水量为9600ml,滤过,滤液浓缩至稠膏,减压干燥,结果未出现糊化现象。2.1.2京尼平苷酸含量的测定由于生车前子及车前子(炒)所含主要有效成分为京尼平苷酸,且该成分易溶于水,故用京尼平苷酸含量作为水煎工艺考察指标,采用下述方法进行测定。2.1.2.流动相0.3%-1-腈色谱柱为Alltima™C18(250mm×4.6mm,5μm);以乙腈-1%冰醋酸溶液(4:96)为流动相;检测波长为254nm;柱温30℃;流速1.0ml·min-1。理论板数按京尼平苷酸峰计算应不低于3000。2.1.2.流动相wsf分别取“2.1.1.2”、“2.1.1.3”项下制得的干膏粉(相当于1/750总干膏粉量),精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入流动相50ml,密塞,称定重量,超声处理(120W,40kHz)30min,放冷,再称定重量,加流动相补足减失的重量,摇匀,离心,取上清液,即得。按处方比例去掉生车前子及车前子(炒),制备成不含车前子的阴性样品,同法制备阴性样品溶液。2.1.2.3.对照溶液的制备精密称取京尼平苷酸对照品,加流动相制成每1ml含0.1mg的溶液,即得。2.1.2.4测量方法分别精密吸取阴性样品溶液,对照品溶液及供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,计算,即得。色谱图如图1。2.1.3京尼平苷酸溶液车前子后下方式,所得京尼平苷酸含量为3.40mg·g-1,车前子包煎方式,京尼平苷酸含量为2.12mg,g-1。车前子后下京尼平苷酸含量明显高于车前子包煎,故选择车前子后下方式进行提取。2.2因素水平安排经预试验筛查,影响结肠炎奇效颗粒水煎工艺的主要因素有:煎煮次数(A)、煎煮时间(B)和加水倍量(C),每个因素各取3个水平,以京尼平苷酸的含量为考察指标,采用正交表L9(34)进行试验,因素水平安排见表1。2.2.1车前子的提取取炒山楂300g、诃子肉100g,先加水煮至沸腾,再加生车前子400g、车前子(炒)400g共9份,分别按表1设计的条件进行各试验提取,合并煎液,滤过,滤液浓缩至稠膏,减压干燥,称重,即得。2.2.2正交试验中京尼平酸含量测定同“2.1.2”项下京尼平苷酸测定方法。2.2.3京尼平酸含量测定的结果表明以正交试验5号干膏粉作为样品进行方法学考察。2.2.3.对照品溶液的制备精密称取京尼平苷酸对照品(纯度93.2%)9.16mg,置10ml量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密吸取对照品溶液0.1,0.2,0.4,0.8,1.2,1.6ml,分别置5ml量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,作为系列对照品溶液。分别吸取上述对照品溶液各10μl,按选定色谱条件进样测定。以进样量(X,μg)为横坐标,峰面积积分值(Y)为纵坐标绘制标准曲线,回归方程为Y=12465+798952X,r=0.9997,线性范围在0.171～2.732μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。2.2.3.2.精密度测试取同一样品供试液,依前述京尼平苷酸含量测定项下方法重复进样测定6次,测定峰面积,RSD为0.50%(n=6)。2.2.3.重复性测定结果分别称取同一批次样品6份,依前述京尼平苷酸含量测定项下方法进行6次独立测定,以测定结果的相对标准偏差反映测定结果的重复性,京尼平苷酸平均含量3.32mg·g-1,RSD为1.44%(n=6)。2.2.3.京尼平苷酸用量取上述已知含量的样品粉末6份(含量3.32mg,g-1),称样量分别为0,3779,0.3712,0.3853,0.3868,0.3636,0.3687g,分别定量加入京尼平苷酸对照品5.15,5.34,4.95,5.00,5.23,4.93mg,依前述京尼平苷酸含量测定项下方法操作,进样测定,结果平均回收率为99.1%,RSD为1.61%(n=6)。2.2.4最佳提取工艺的确定表3结果可知,A、B因素对提取有明显影响,而C因素对结果影响不大,而由直观分析结果可知,最佳提取工艺为A2B2C3。为了节省成本,选择水煎最优提取工艺为A2B2C1,即将药材加水煎煮2次,每次2h,每次加水量为药材量的8倍。2.3最优工艺条件的确定为进一步考察优选工艺的可行性及稳定性,按上述优选工艺条件进行验证试验3次,按处方称取炒山楂、诃子肉先加水煮至沸腾,再加车前子、车前子(炒),以上述最优工艺进行提取,浓缩,干燥,测定京尼平苷酸含量,结果三次试验京尼平苷酸含量分别为3.32,3.24,3.27mg·g-1,京尼平苷酸的转移率分别95.0%,92.7%,93.6%,投料生车前子中京尼平苷酸含量为0.568%,炒车前子中京尼平苷酸含量为0.479%,平均含量0.524%。结果表明正交试验优选的工艺条件稳定、可靠。为从提取成本和有效成分含量两方面综合分析,确定所选定的提取工艺为最优选择。3讨论3.1他干扰组分峰完全分离曾经试用过文献报道中的流动相,均不能使样品中京尼平苷酸和其他干扰组分峰完全分离。经多次试验,以乙腈-1%冰醋酸溶液(4:96)为流动相的分离效果最好,不仅与其他干扰峰完全分离,而且保留时间适中,峰形对称且尖锐,故选择为含量测定的流动相。3.2不同煮方式下京尼平苷酸含量的变化结果本试验比较了车前子直接煎煮、后下、包煎三种不同的煎煮方式对成分的影响,结果发现车前子后下京尼平苷酸含量明显高于车前子包煎,故选择车前子后下方式进行提取。为结肠炎奇效颗粒水煎煮提取工艺的选择提供了参考。3.3缺陷水提取工艺的筛选本制剂的水煎部分由车前子、车前子(炒)、炒山楂、诃子肉四味药材组成,此煎煮工艺研究是保障结肠炎奇效颗粒安全有效,质量控制的重要环节,故本文以有效成分含量作为评价指标,通过正交设计法对结肠炎奇效颗粒的水提取工艺进行了优选。通过实验结果,本着节约能源、降低成本的原则,选A2B2C1为优选工