柴胡与醋柴胡对小鼠抑郁模型的疏肝解郁作用比较

柴胡与醋柴胡对小鼠抑郁模型的疏肝解郁作用比较

柴胡是波形科植物柴胡buurosescorzerinfoll，干燥的根，根据其属性，通常被称为“北柴胡”和“南柴胡”。性味辛、苦,微寒,归肝、胆、肺经。疏散退热,疏肝解郁,升举阳气。用于感冒发热,寒热往来,胸胁胀痛,月经不调,子宫脱垂,脱肛［1］。柴胡传统炮制方法有:醋柴胡、鳖血柴胡、酒柴胡、蜜炙柴胡,中国药典目前只收载醋柴胡。自古便有柴胡“入解表药生用,清肝炒熟用”的说法,在传统理论中,生柴胡的升散作用较强,多用于解表退热;醋柴胡可以缓和升散之性,降低解表退热作用,并可增强疏肝止痛作用,多用于肝郁气滞的胁痛、腹痛及月经不调等症。两者的疏肝解郁作用到底如何呢?故考察醋制前后柴胡疏肝解郁作用差异及其解郁作用机制,选用小鼠悬尾应激、小鼠强迫游泳、利血平所致眼睑下垂小鼠抑郁模型［2-6］,比较柴胡醋制前后疏肝解郁作用的差异。并通过测定小鼠全血胆碱酯酶活力对其疏肝解郁作用机制进行探究。1试剂、仪器和仪器1.1药材来源柴胡饮片购于辽宁正大祥和药业集团有限公司,批号201105245,产地辽宁。1.2试剂利血平注射液,天津金耀氨基酸有限公司公司,批号1203241;盐酸氯米帕明,江苏恩华药业,批号H32022974;甲硫酸新斯的明注射液,批号H110202;乙酰胆碱酯酶(TChE)测定试剂盒,购于南京建成生物工程研究所。1.3仪器日立U-3010型分光光度计,日立公司。1.4动物昆明种小鼠,雌雄兼用,体质量(18~22)g,由大连医科大学实验动物中心提供,清洁级(CL)。2小鼠全血胆碱酯酶活力测定2.1生、醋柴胡疏肝解郁作用差异比较2.1.1醋柴胡水煎液的制备分别将生柴胡及3种醋柴胡用水煎煮制成1∶2浓度水煎剂(相当于生药),备用。2.1.2小鼠悬尾试验按文献方法进行试验,取小鼠60只。随机分成6组,每组10只,分别为生柴胡组、醋柴胡1组(每100kg柴胡用米醋20kg)、醋柴胡2组(每100kg柴胡用米醋40kg)、醋柴胡3组(每100kg柴胡用米醋60kg)、生理盐水阴性对照组、氯米帕明阳性对照组。给药组分别给生柴胡及3种醋柴胡水煎剂,参照文献中给药方法及剂量,按30mL/kg灌胃给药,阴性对照组灌服等容量生理盐水,阳性对照组灌服氯米帕明20mg/kg。连续灌胃7d,于末次灌胃给药后1h后将小鼠尾端2cm处固定于水平面上,使其呈倒挂状态,头部离台面约30cm,四周以板隔离动物视线,记录小鼠在6min内的不动时间为失望时间。2.1.3小鼠强迫游泳试验按文献中方法,先做预试验,将小鼠放入水槽(2000mL烧杯,高20cm,直径14cm,水深10cm,置于水浴锅内)中,调节水温保持25℃左右,持续观察6min,累计6min内小鼠在水中停止挣扎、呈漂浮状态、仅有细小的肢体运动以保持头部浮在水面的持续时间(不动时间),将不动时间超过150s或低于60s者小鼠剔除。将合格老鼠随机分组(分组及处理同悬尾实验),连续灌胃7d,于末次灌胃1h后按预试验方法进行强迫游泳试验,记录小鼠6min内累计不动时间。2.1.4利血平拮抗试验按文献中方法,取实验动物随机分组(分组及处理较悬尾试验增加利血平模型组)连续灌胃给药7d,末次给药30min后每只小鼠按2.5mg/kg腹腔注射利血平(0.1mL/log)观察小鼠眼睑下垂情况,准确记录1h时的眼睑下垂度和体温,观察自发活动、耳尾颜色及腹泻等情况。按Rubin分级标准判断下垂度。0度为正常开目;1度为眼睑下垂1/4;2度为眼睑下垂1/2;3度为眼睑下垂3/4;4度为眼睑完全闭合。2.2醋柴胡疏肝解郁作用机制探究小鼠全血胆碱酯酶活力测定取小鼠50只。随机分为5组,每组10只,分别为醋柴胡1组(每100kg柴胡用米醋20kg)、醋柴胡2组(每100kg柴胡用米醋40kg)、醋柴胡3组(每100kg柴胡用米醋60kg)、生理盐水阴性对照组、甲硫酸新斯的明阳性对照组。给药组分别给3种醋柴胡水煎剂,按30mL/kg灌胃给药,阴性对照组灌服等容量生理盐水,阳性对照组灌服甲基硫酸新斯的明0.2mg/kg,给药后1h摘眼球取血,按照试剂盒说明书中步骤用化学比色法测定小鼠全血胆碱酯酶活力。2.3统计处理应用SPSS软件进行统计学处理。各给药组均与对照组进行比较,采用单因素方差分析比较。P<0.05时,两组间差异有显著性。3醋胡对小鼠全血胆碱酯酶活力的影响3.1生、醋柴胡对小鼠强迫悬尾、游泳不动时间、利血平引起小鼠体温下降、眼睑下垂的影响从实验结果可以看出,生、醋柴胡和氯米帕明均可缩短小鼠尾悬挂的失望时间和大鼠强迫游泳不动时间,并且可以对抗因利血平所致小鼠眼睑下垂和体温下降,且醋柴胡和氯米帕明的作用优于生柴胡。结果见表1~3。3.2醋柴胡中加醋量不同对于小鼠胆碱酯酶活力的影响从实验结果可以看出,醋柴胡能够抑制胆碱酯酶的活性,从而减少乙酰胆碱的水解,进而达到解郁的作用。而且与对照组比较,三组醋柴胡均能减低小鼠全血胆碱酯酶活力,其中醋柴胡2组能显著降低小鼠全血胆碱酯酶活力(P<0.01)。结果见表4。4抗抑郁药的筛选和使用抑郁症在中医理论中辩证为郁症,多由于肝郁气滞所致,而肝郁,多由情志抑郁,气机阻滞所致。是“肝气郁”,“肝气郁结”的简称。肝有疏泄的功能,可条畅气机,喜升发舒畅,疏泄有度,则气机畅达,气血调和,疏泄不足,则气机郁滞。如因情志不舒,恼怒伤肝,或因其他原因影响气机升发和疏泄,气郁日久,日久化火,就会引起肝郁的病症。治疗肝郁症可通过疏肝理气,即疏肝解郁［10-11］。柴胡为中医临床对抑郁症治疗应用广泛且疗效较好的药物之一。又《素问·宣明五气篇》中说:“酸入肝”,又酸味具有收敛,固涩的作用。所以醋柴胡相较之于生柴胡,可以缓和生品的升散之性,降低解表退热作用,却可增强其疏肝止痛作用［12］。文中选取小鼠悬尾、强迫游泳、利血平所致眼睑下垂体温下降等模型均为经典的情志和药物所致的抑郁模型,可用来筛选和观察抗抑郁药物。动物在一个局限环境中拼命挣扎试图逃跑而又无法逃脱后出现不动状态,此状态反映了绝望行为［13-15］。本实验选用氯米帕明为阳性对照,其为临床常用三环类抗抑郁药,用于治疗各种抑郁状态。主要通过抑制神经元对释放于突触间隙的NA和5-HT的再摄取、又以抑制5-HT的重摄取为主,有效治疗抑郁症［16］。但由于其相应的阻断了胆碱能受体,临床会常常表现出口干、便秘、排尿困难、视物模糊、头晕、嗜睡、体位性低血压、记忆影响和心动过速等多种不良反应［17］,副作用明显。所以应找出新型药效良好但副作用小的新型抗抑郁药。从实验结果可以看出生、醋柴胡和氯米帕明均可缩短小鼠尾悬挂的失望时间和大鼠强迫游泳不动时间,并可对抗因利血平所致小鼠眼睑下垂和体温下降,且醋柴胡和氯米帕明的作用优于生柴胡。结果显示柴胡具有疏肝解郁的作用,且醋柴胡的疏肝解郁作用明显优于生柴胡。这一结果验证了传统理论的科学性,也证明了中药炮制的重要性,为临床准确用药提供了依据。临床上,肝郁患者常表现为两胁苦满、腹胀、纳减及神志上的异常等,这除了由于个别脏器的病理性病变外,还与植物神经、中枢神经系统功能失调有很大关系。由于植物神经功能紊乱,可影响到人的情绪上的异常改变,亦可影响到消化系统。乙酰胆碱是中枢内广泛存在的一种神经介质,作为植物神经节前纤维和副交感神经节后纤维神经递质,可以兴奋胆碱能神经,起到调节神经、消化系统的功能,其可被乙酰胆碱酯酶所水解,胆碱酯酶的活力间接影响着中枢神经系统的功能［8］。从实验结果可以看出