培养基管理规程

目的建立培养基的管理规程，确保产品的无菌及微生物程度检查成果真实可靠。范畴合用于实验室使用的培养基的管理。职责实验员及实验室管理员负责对本制度实施。QA负责监测本规程的执行。规程种类和规定：本实验室无菌检查和微生物程度检查所使用的培养基均为脱水、干燥的商品培养基，商品培养基应有处方、使用阐明和质量报告书。培养基涉及硫乙醇酸盐流体培养基、胰酪大豆胨液体培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基等培养基，规定来源于正规的生产厂家。培养基的购置:岗位实验员要根据培养基使用状况及剩余量及时向部门领导提出申购，经部门领导审批后方可购置。应当从可靠的供应商处采购，生产厂家应尽量稳定，必要时应当对供应商进行评定；一次购入量不适宜过多。培养基的接受：培养基购进后，由岗位实验员负责接受，并及时填写《培养基接受记录表》（附件1），如培养基标签未标注效期，则应当在培养基的容器上标注接受日期。培养基的保管培养基性状均为粉末，有特殊气味，容易受潮。岗位实验员负责核对品名、数量后，按标签的规定于阴凉干燥处贮存，避免光照，潮湿。

储存期限:新购进未开瓶的干粉培养基按厂家阐明书上的储存期限储存。开口后的干粉培养基的储存条件和效期均按阐明书上的规定执行。开封后的干粉培养基使用后用3M封口膜缠绕密封。培养基的使用在制备培养基时，应按使用阐明上的规定操作配制，每次配制前应检查脱水培养基与否变质，如结块、变色、变味等，不得使用结块或颜色发生变化的脱水培养基。每次使用需在需登记《培养基领用统计》（附件2）。培养基配制时应精确称量脱水培养基，并做好统计，配制培养基所用容器和配套器具应干净，配制培养基的溶剂为去离子水或纯化水。脱水培养基应完全溶解于水中，再进行分装与灭菌。配制时若需要加热助溶，应注意不要过分加热，以避免培养基炭化颜色变深。培养基配制时，应在溶解后灭菌前将pH值调节至适宜范畴，调节pH值用1mol/L的氢氧化钠溶液或1mol/L盐酸溶液。如灭菌后培养基的pH值不符合规定，则该配制批号的培养基不能使用，应废弃。pH值测定应在25±2℃下测定。培养基配制编号的编写按配制日期（年＋月＋日）编写。如3月1日配制的胰酪大豆胨琼脂培养基的编号为0301，犹如一天配制同种培养基，则第二次配制的胰酪大豆胨琼脂培养基的编号为0301A，则第三次配制的胰酪大豆胨琼脂培养基的编号为0301B，其它依次类推。每次配制数量、灭菌起始时间、pH值及使用状况(统计使用量，使用产品名称、批号等信息)均应具体统计，统计于《培养基配制、使用统计》（附件3）。培养基的贮藏培养基灭菌后不得贮藏在高压灭菌器中，琼脂培养基不得在0℃或0℃下列寄存，由于冷冻可能破坏凝胶特性。培养基保存应避免水份流失，避光保存。琼脂平板最佳现配现用，如置冰箱保存，，普通不超出1周，且应密封包装，若延长保存效期，保存期需通过验证拟定。培养基取用人员在取用时应核对培养基的使用期并检查培养基的外观，如培养基变质或颜色发生变化，应废弃不用。固体培养基灭菌后的再融化只允许一次，以避免因过分受热造成培养基质量下降或微生物污染。培养基的再融化普通采用水浴或流通蒸汽。若使用微波炉，应避免培养基过分受热及水分的蒸发，更要注意安全。融化的培养基置于45-50℃的水浴中，不得超出8小时。倾注培养基时，应擦干培养基容器外表面的水分，避免容器外壁的水滴进入培养基中造成污染。质量控制实验

每一批脱水培养基均需做合用性检查。培养基的合用性检查实验若不符合规定，应对各环节进行调查，寻找不合格的因素，以避免问题重复出现，任何不符合规定的培养基均不能使用。涉及菌种及菌悬液制备4.7.3.1涉及菌种A.大肠埃希菌EscherichiacoliB.金黄色葡萄球菌StaphylococcusaureusC.铜绿假单胞菌PseudomonasaeruginosaD.枯草芽孢杆菌BacillussubtilisE.白色念珠菌CandidaalbicansF.黑曲霉Aspergillusniger注：培养基的合用性检查所用的菌种传代次数不得超出5代，使用CMCC的菌种。4.7.3.2菌悬液制备取规格为102cfu/瓶，菌含量为10~99cfu/0.1ml的定量质控菌株，使用前注入对应的复溶液使其充足溶解，普通在涡旋仪上震荡混匀30S，得到10~99cfu/0.1mL的菌悬液，备用。注意每次取样前再次将菌悬液混合均匀。微生物计数用培养基接种A.取实验菌各0.1ml（含菌数＜100CFU）用涂布棒均匀的涂布到待检培养基和对照培养基上，每株实验菌平行制备两个皿。同时制备两个空白平皿作为阴性对照。B.将接种后的培养基按药典规定在规定条件下培养。C.计算：将培养皿内每种微生物的测试平板平均值与参考平板平均值相比，计算回收率，并统计于《微生物计数用培养基合用性检查统计》（附件4）。D.检定鉴定：若被检培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5〜2范畴内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致，且阴性对照无菌生长，判该培养基的合用性检查符合规定。液体培养基接种A.取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基7支，分别接种不大于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照，规定温度下培养3天；B.取每管装量为9ml的胰酪大豆胨液体培养基7支，分别接种不大于100cfu的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，规定温度下培养5天。定时观察成果并统计于《液体培养基敏捷度检查统计》（附件5）。C.成果鉴定空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判该培养基的敏捷度检查符合规定。统计培养基接受记录表培养基领用统计培养基配制、使用统计微生物计数用培养基合用性检查统计液体培养基敏捷度检查统计培养基启用标签、培养基配制标签有关文献实验室管理规程HYT/SMP-QA-ZB-004偏差调查与解决管理规程HYT/SMP-QA-ZB-008检查异常管理规程HYT/SMP-QA-ZB-010参考文献无菌医疗器具生产管理规范YY0033-中国药典修订历史序号生效日期文献编号及版本号修订性质及因素修订内容及具体条款附件1：实验室培养基接受统计编号：HYT/SMP-QA-ZB-026培养基名称接受日期批号规格生产厂家生产日期使用期接受数量接受人附件2：培养基领用统计编号：HYT/SMP-QA-ZB-026培养基名称批号规格生产厂家生产日期使用期开封日期开封人储存条件领用统计领用日期干粉确认领用人领用数量（克）剩余数量（克）备注注：每次使用时领用人需检查脱水培养基与否变质，如结块、变色、变味等，若无，就在干粉确认一栏中打“√”，若有变质，写明变质现象附件3：培养基配制、使用统计编号：HYT/SMP-QA-ZB-026培养基名称配制根据厂家批号规格使用期配制日期编号制备配制过程：称量设备名称及编号：培养基状态：□固体□液体称取本品g，加纯化水ml，加热搅拌，使溶液均匀。液体培养基与否分装：□分装（ml/□支或□瓶）,□不分装加盖方式：□牛皮纸□橡胶塞□胶塞灭菌时间：□121℃15分钟□121℃20分钟共配备□支或□瓶。固体培养基分装的空皿的型号及批次：共分装皿。灭菌后pH值规定规定：pH计编号：与否校准：□已校准□未校准灭菌前pH值：添加□1mol/LNaOH（编号：）的量或□1mol/LHcl（编号：）的量灭菌后pH值：结论：□符合规定□不符合规定操作人：复核人：灭菌灭菌压力：灭菌器编号：起始时间：从时分到时分操作人：复核人：日期数量使用状况使用人备注附件4：微生物计数用培养基合用性检查统计编号：HYT/SMP-QA-ZB-0261培养基信息实验培养基名称及批号实验培养基配制编号对照培养基名称及批号对照培养基配制编号检查根据检查日期2检查环节及成果2.1菌株的准备：取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉，规格为102cfu/瓶，菌含量为10~99cfu/0.1ml的定量质控菌株，使用前注入对应的复溶液使其充足溶解，普通在涡旋仪上震荡混匀30S，得到10~99cfu/0.1mL的菌悬液，备用。注意每次取样前再次将菌悬液混合均匀。2.2实验办法：用平皿倾注法或表面涂布法在对照培养基和实验培养基的每个平皿接种不大于100cfu实验菌，每种实验菌平行制备两个平皿，培养，点计菌落数。同时制备两个空白平皿作阴性对照。2.3成果判断：若被检培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5〜2范畴内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致，且阴性对照无菌生长，则成果符合规定。菌种名称菌种编号培养条件菌落数(菌落生长状况实验培养基对照培养基阴性对照实验培养基对照培养基平皿1平皿2平皿1平皿23结论□符合规定□不符合规定检查人：日期：复核人：日期：同意人：日期：附件5：液体培养基敏捷度检查统计编号：HYT/SMP-QA-ZB-026检查根据中国药典检查日期菌株的准备：取生孢梭菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉，规格为102cfu/瓶，菌含量为10~99cfu/0.1ml的定量质控菌株，使用前注入对应的复溶液使其充足溶解，普通在涡旋仪上震荡混匀30S，得到10~99cfu/0.1mL的菌悬液，备用。注意每次取样前再次将菌悬液混合均匀。取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基7支，分别接种不大于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天；取每管装量为9ml的胰酪大豆胨液体培养基7支，分别接种不大于100cfu的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，培养5天。定时观察成果。菌种定量菌株批号FTM培养基/培养温度30~35℃（天）（培养基批号：配制编号：）（培养箱编号：）123菌种定量菌株批号TSB培养基/培养温度20~25℃（天）（培养基批号：配制编号：）（培养箱编号：）12345白色