医学-ngf与脑出血

NGF与脑出血

目录动物实验临床研究病例分享外源性NGF〔苏肽生〕对大鼠脑出血的有效性研究华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科

唐洲平教授主要内容研究背景与意义第一局部：脑出血模型的制作第二局部：NGF(苏肽生)治疗大鼠脑出血的研究研究背景及意义死亡率高达35%致残率达95%NGF的概述20世纪50年代初，Levi-MontalciniR在小鼠肉瘤细胞内发现的第一个神经营养因子--NGF〔nervegrowthfactor〕。它是一种由α、β及γ3亚基组成的活性蛋白质，主要是由神经元、神经支配的靶组织或胶质细胞表达产生的，具有促进中枢和外周神经分化、生长和存活的功能。NGF分子的四级结构示意图上图为NGF的四级结构，α亚基〔红色〕，γ亚基〔绿色〕具有蛋白酶活性，β亚基〔蓝色〕具有生物活性。NGF〔苏肽生〕的有效性研究目的：大鼠脑出血模型，实验组大鼠给予NGF处理，探讨外源性NGF对大鼠脑出血的作用机制。材料NGF〔苏肽生，北京舒泰神公司〕小鼠抗大鼠Nestin抗体〔英国Abcam公司〕小鼠抗大鼠VEGF抗体〔英国Abcam公司〕HRP〔辣根过氧化物酶，北京中杉金桥公司〕方法将总共48只SD大鼠随机分成三组，即实验组〔NGF组〕24只、对照组12只和假手术组12只，每组大鼠取三个时间点：第1、3以及7天。实验组大鼠造模后半小时通过颅内血肿处注入NGF混合液〔2μl，300U〕。对照组大鼠给予同样体积无菌生理盐水。假手术组翻开头皮只进针，不给药和盐水。数据分析对各组大鼠行神经功能缺损评分。将各组大鼠脑组织固定后脱水，制成石蜡切片，厚度约为4μm，行免疫组化染色，检测Nestin以及VEGF阳性细胞，计数。将三组大鼠的神经功能缺损评分、Nestin以及VEGF阳性细胞数行统计学分析。结果表2：第1天和第3天三组评分几乎相同，第7天实验组神经功能缺损评分要显著低于对照组〔P＜0.05〕，两组与假手术组比较均有显著差异。表2：三组不同时间点ZeaLong评分免疫组化检测表3：①实验组和对照组有显著性差异〔P＜0.05〕。②实验组间第7天和第3天与第1天比照有统计学意义〔P＜0.05〕。实验组和假手术组有显著性差异〔P＜0.01〕。只数第1天第3天第7天实验组67.9±1.8①9.5±2.4①11.6±2.7①②对照组35.8±2.06.5±1.58.0±1.6假手术组31.1±0.21.0±0.81.4±0.6表3：三组于第1、3、7天的Nestin单标阳性细胞计数〔均数±标准差〕免疫组化检测表4:①实验组和对照组有显著性差异〔P＜0.05〕。②实验组间第7天和第3天与第1天比照有统计学意义〔P＜0.05〕。实验组和假手术组有显著性差异〔P＜0.01〕。只数第1天第3天第7天实验组65.5±1.7①7.3±1.9①9.4±2.0①②对照组34.3±1.45.6±2.16.1±1.3假手术组30.6±0.40.8±0.30.7±0.1表4：三组于第1、3、7天的VEGF单标阳性细胞计数〔均数±标准差〕免疫组化染色图片图A、B、C为三组术后第1天比较Nestin阳性细胞无明显差异〔×400〕。ABC免疫组化染色图片图A、B、C为三组术后第3天比较，图C(实验组)的Nestin阳性细胞增多〔P＜0.05〕，图B(对照组)也可见少量阳性细胞〔×400〕。ABC免疫组化染色图片图A、B、C为三组术后第7天比较，图C(实验组)的Nestin阳性细胞明显增多〔P＜0.01〕〔×400〕。ABC免疫组化染色图片图A、B、C为三组术后第1天比较VEGF阳性细胞无明显差异〔×400〕。ABC免疫组化染色图片图A、B、C为三组第3天比较，图C〔实验组〕的VEGF阳性细胞增多〔P＜0.05〕〔×400〕。ABC免疫组化染色图片图A、B、C为三组第7天比较，图C〔实验组)的VEGF阳性细胞明显增多〔P＜0.01〕〔×400〕。ABC结果将三组大鼠脑切片行统计学分析，显示①Nestin与VEGF阳性细胞数，实验组与对照组有显著差异〔p＜0.05〕；②实验组间第7天和第3天与第1天比照有统计学意义〔P＜0.05〕；③实验组和假手术组有显著性差异〔P＜0.01〕。讨论通过对大鼠脑出血模型实验研究，显示外源性NGF可以促进内源性NSCs激活、增殖、迁移以及分化；同时促进神经细胞表达VEGF，新生血管形成。最终使颅内受损的神经细胞得到有效的修复，促进机体的神经功能恢复。其机制为外源性NGF通过与NSCs上特异受体〔如TrkA及p75〕结合，激活细胞内第二信使体系，产生级联反响，促使细胞核表达细胞分化。NGF的信号传导通路示意图JunyingYuan,BruceA.Yankner.Apoptosisinthenervoussystem:NeuronalsurvivalpathwaysinducedbythebindingofNGFtoitsreceptorTrkA.Nature,2000,10(407):802-809.脑出血临床观察报告天津市环湖医院王新平教授试验简介试验目的：评价苏肽生〔注射用鼠神经生长因子〕治疗急性脑出血损伤后功能恢复的有效性及平安性。试验单位天津市环湖医院天津第五中心医院天津泰达医院年龄：18-75岁，性别不限；愿意服从本研究方案；脑出血患者〔均符合全国第四届脑血管病学术会议制订的诊断标准)经头颅CT确诊，出血位置基底节区、脑叶、丘脑等，起病在48小时内。入组标准排除标准对神经生长因子有过敏史者。收缩压>220mmHg或舒张压>130mmHg，伴有严重的心血管、肝、肾或造血系统病变者可能因精神障碍或其他精神系统疾病影响完成试验者在3个月内参加过临床试验者妊娠或哺乳期妇女试验分组试验组：苏肽生组，52例。对照组：胞二磷胆碱组，63例。两组患者性别构成、年龄、出血量、出血部位、神经功能缺损程度〔NIHSS评分〕、伴发疾病、既往史等比较差异均无统计学意义，具有可比性。研究方法给药方法对照组：胞二磷胆碱0.5g,生理盐水250ml,静脉注射，每日1次，治疗2周。试验组：苏肽生，30μg/次，肌肉注射，每日1次，治疗2周。各组均不使用其他脑保护剂如VitE、大剂量VitC、脑复康、L-叶皂苷钠等。研究结果﹡*P<0.05治疗前后NIHSS评分比较治疗前后ADL评分比较﹡*P<0.05治疗前后总有效率比较试验过程中未发生严重不良反响事件对照组与治疗组无显著性差异说明苏肽生治疗脑出血方案平安性良好平安性评价讨论神经元的再生过程受众多因素的影响。其中内环境中的神经营养因子〔如NGF〕能够激活来自中枢神经系统不同区域的神经元前体细胞潜在的再生能力。但内源性NGF在脑内含量卑微，及时补充外源性NGF，能有效促进神经元再生，从而促进神经系统功能的修复。本试验仅仅是初步研究结果，样本数偏小〔120例〕，需要进一步大规模试验的验证。需要进一步细化苏肽生对于不同原因引起的脑出血的平安性和有效性。对于苏肽生在脑出血、脑缺血、脑堵塞等其他中枢系统疾病的作用机理及临床应用需要进一步探讨。鼠神经生长因子治疗急性脑梗死的临床对照研究浙江鄞州人民医院神经内科范晨蕾实验方法患者入院后即开始常规治疗，给予生命体征监护、予以吸氧、抗生素预防肺部感染及其它并发症。根据病情给予脱水降低颅内压，控制血糖、血压、改善脑细胞代谢、抗凝及抗血小板凝集。随时纠正水电解质平衡及酸碱失调。治疗组在常规治疗的根底上给予苏肽生，肌肉注射，共维持２８ｄ。对照组那么仅按常规治疗，不应用鼠神经生长因子。治疗组好转的６０例中，于０～２周、２～４周、４～６周内获得临床好转的例数分别为20、39、1例，绝大多素患者在４周内均能获得较好的临床疗效。病历分享苏肽生治疗丘脑、基底节脑堵塞1例病历资料：患者，女性，67岁，因“左侧肢体瘫痪1月余〞入院。患者于一月前出现左侧肢体瘫痪，无肢体麻木，意识状态稍差，嗜睡，伴有吐词不清，可听懂别人说话，恶心欲吐，眼裂呈进行性减小及右侧头痛，无发热等不适，视物及听力尚可。病后以脑卒中收入我院，先后2次住院治疗后好转。为求进一步诊治来我院。病后患者精神差，小便同常，大便近日干结，体力下降。既往有肾性高血压，规律用药，控制可；肾积水；颈椎病；萎缩性胃炎。入院查体：BP:142/88mmHgR:22次/分P:80次/分T:36.8℃神志清楚，吐词欠清，双侧瞳孔等大等圆，直径约3mm，对光反射灵敏，双侧右侧凝视麻痹，眼裂正常，睁眼稍无力，双侧鼻唇沟等称，伸舌稍左偏；心肺腹〔－〕；左侧肢体肌力2级，肌张力增高，右侧肌力可，肌张力正常，腱反射等称引出；感觉共济运动不配合，左侧Babinski征〔＋〕、Gordon征〔＋〕，右侧病理反射未引出；脑膜刺激征〔－〕。门诊资料：头部MRI示右侧颞额顶叶、丘脑及基底节急性脑堵塞；颈部血管彩超示左侧椎动脉偏窄并血流阻力指数增高，右侧颈内动脉血流速度降低并血流阻力指数增高；头颅MRA示右侧大脑中动脉M1段闭塞；泌尿系B超示左肾局限性积水，右肾轻度积水；左下肢静脉B超示左下肢静脉栓塞，左下肢静脉血栓性静脉炎。诊断结果：1、脑堵塞2、肾性高血压3、左下肢深静脉血栓形成4、肾积水治疗方案：入院后完善相头检查、监控血压，治疗上予以扩管改善循环、营养神经、脑保护、康复治疗及其他对症支持治疗。应用