三种提取方法对生物检材dna检出率的影响

三种提取方法对生物检材dna检出率的影响

清洁证书是生物证书中的一种。由于其微观性和完整性，很容易被嫌疑人忽视。如果对现场调查的检测和正确提取，可以显著提高现场调查的质量。本次研究以现场勘查中最常见的手指擦拭痕迹为研究对象,以光滑非渗透性客体为承痕客体,采用纱布擦拭法、棉签二步法和脱落细胞提取器法提取,比较三种提取方法在接触类生物检材提取效果上的优劣。一、材料和方法(一)多次多次解剖所使用的网格化表面痕迹赤手擦拭痕迹60处。承痕客体均选择光滑非渗透性客体(办公桌桌面),每次制样前均使用一次性毛巾将表面反复擦拭干净。所有样本的制样人为同一人,一处擦拭痕迹由制样人的一只手指在客体上擦拭,每处痕迹均反复擦拭四次。每20处擦拭痕迹为一组,每组用一种方法提取。所有参与实验人员均佩戴手套、口罩、头套等防护用具。(二)给你看看1.培养成棉布的黏合剂用洁净剪刀剪取0.3cm×0.3cm面积大小洁净纱布,镊子夹住蘸取少量纯净水,用定性滤纸吸附掉多余水分,使纱布具有粘附力。用该纱布在遗留有擦拭痕迹处反复擦拭后装入1.5ml离心管内备检。2.棉花棉纱的施工将一支干净棉签用纯净水浸润,用镊子夹取棉签上少量棉纱,采用另一支干燥、洁净的棉签上吸附掉多余水分,使棉纱具有粘附力。用该棉纱在遗留有擦拭痕迹处反复擦拭,放入1.5ml离心管内。再用镊子夹取少量干燥棉纱,在已经擦拭过的地方再次进行反复擦拭,再将该棉纱放入同一离心管内备检。3.提取机构提取远离细胞(三)提取和检测dna1.chelex-100/l的溶液采用CheleX-100进行DNA提取。将擦拭物置于1.5ml离心管中,加入5%CheleX-10060μl和10g/L蛋白酶K5μl,加样枪头混匀,置于56℃1h,期间震荡1次;100℃放置10min,10000g离心3min,上清4℃保存备用。2.pcr扩增实验采用对PowerPlex16HS(Promega公司)试剂盒进行PCR扩增。扩增反应体系为10μl体系(Sample4μl、MasterMix2μl、PrimerPairMix1μl、H2O3μl)。采用GeneAmp?PCRSystem9700热循环仪进行PCR扩增,共32个循环。扩增产物4℃保存备用。3.电泳(四)统计方法采用SPSS19.0软件进行统计学分析,Kruskal-Wallis秩和检验进行多组间非参数比较。二、种提取方法的显著性比较办公桌桌面上擦拭性生物检材三种提取方法DNA检测结果主要表现为出现完整DNA分型、部分STR分型、混合STR分型以及无效图谱几种类型(图1-3)。kruskal-Wallis秩和检验显示三种提取方法具有显著性差异(P=0.009),棉签二步法效果最好。三种提取方法的结果见表1。三、现场检材标准的修订随着DNA技术的不断完善,生物物证在刑侦破案中认定犯罪、分析作案过程、指明侦查方向和划定侦查范围等方面的作用越来越显得重要。在现场勘查中,指纹、足迹等传统痕迹物证已经越来越不容易提取到,并且随着犯罪分子对DNA检验技术有了一定了解,一些肉眼可见的血迹、烟头等物证可能会被破坏。在案件的现场勘查中,常常会发现犯罪嫌疑人遗留下一些攀爬、擦划、擦拭等痕迹,在这些痕迹中往往都会含有犯罪分子的脱落细胞,成功提取这些痕迹里的犯罪分子脱落细胞可以为提高现场勘查质量以及为侦查、破案增添一个重要途径。此类物证的特点是:1.承痕客体往往较大或比较固定,难以直接原物提取到实验室进行检验;2.受现场条件和现场保护措施等因素制约,检材容易受到污染;3.受犯罪分子触碰时间、接触力度和皮肤特质等因素影响,物证中含有DNA物质的数量差别也会很大;4.时间越长,接触类痕迹中的DNA物质会部分降解导致提取量减少。所以,如何在现场勘查过程中,第一时间对承痕客体上的DNA物质进行最大限度的有效富集并获得有价值的DNA图谱,是接触类生物物证在案侦工作中发挥作用的关键所在。本实验中接触性生物检材经过三种不同的提取方法提取,在检出完整STR分型方面,使用棉签二步法和脱落细胞提取器的检验效果优于纱布擦拭法;在检出部分STR分型及混合STR分型方面,使用棉签二步法的效果明显优于其他两种方法。在实际案侦工作中,能够检出部分STR分型及混合STR分型,也能为侦查破案,特别是划定或缩小侦查范围提供很大的支撑。在本次实验中,使用棉签二步法在第一次擦拭后,在短暂的时间范围内(约10秒),肉眼可见承痕客体表面仍旧残留有液体,此时客体表面仍残留有生物物证没有被提取到,棉签二步法的第二次提取可以将该残留物质粘附提取。而使用脱落细胞提取器,由于本次实验采用的擦拭痕迹面积比提取仪的粘面面积大,在粘取多次以后,胶面不再具有粘性,影响了提取检验的效果。但是,如果胶面恰好粘附到比较集中的DNA物质,则在检验效果上有非常好的表现。使用脱落细胞提取仪的优点在于提取材料规范成熟,操作简单易学,提取后保护到位,缺点是使用成本较高,提取范围较小。在本次实验中,针对光滑非渗透性客体上的接触类生物物证,使用棉签二步法提取优势比较明显。该方法的优点在于提取材料容易获得,成本低,选择提取的范围容易掌握,操作步骤比较简单,检出率较高。但该法对操作手法有一定要求,如棉纱量、沾水量以及擦拭时的力量大小等。鉴于本次实验样本量的限制,对于实验的结