基因工程试题内容

基因工程试题一、选择题（每题1分，共15分）1、下列有关基因的叙述，错误的是【A】A蛋白质是基因表达的唯一产物B基因是DNA链上具有编码功能的片段C基因也可以是RNAD基因突变不一定导致其表达产物改变结构2、基因工程的单元操作顺序是【B】A增，转，检，切，接 B切，接，转，增，检C接，转，增，检，切 D切，接，增，转，检3、生物工程的上游技术是【A】A基因工程及分离工程B基因工程及发酵工程C基因工程及酶工程D基因工程及细胞工程4、下列各组专业术语中，含义最为接近的是【C】A终止子与终止密码子B基因表达与基因转译CDNA退火与DNA复性D重组子与转化子5、根据酶切活性对盐浓度的要求，限制性核酸内切酶可分成【B】A2大类B3大类C4大类D5大类6、T4-DNA连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段DNA片段连接在一起，其底物的关键基团是【D】A2'-OH和5'–PB2'-OH和3'-PC3'-OH和2'–PD5'-OH和3'-P7、下列有关连接反应的叙述，错误的是【A】A连接反应的最佳温度为37℃B连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于10%C连接反应缓冲体系的ATP浓度不能高于1mMD连接酶通常应过量2-5倍8、原生质体转化方法不大适用于【A】A大肠杆菌B枯草杆菌C酵母菌D链霉菌9、下列各常用载体的装载量排列顺序，正确的是【A】ACosmid>λ-DNA>PlasmidBλ-DNA>Cosmid>PlasmidCPlasmid>λ-DNA>CosmidDCosmid>Plasmid>λ-DNA10、若某质粒带有lacZ标记基因，那么与之相匹配的筛选方法是在筛选培养基中加入【D】A半乳糖B异丙基巯基-β-半乳糖苷（IPTG）C蔗糖D5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-D-半乳糖苷（X-gal）11、下列各组用于外源基因表达的受体细胞及其特点的对应关系中，错误的是【C】A大肠杆菌－繁殖迅速B枯草杆菌－分泌机制健全C链霉菌－遗传稳定D酵母菌－表达产物具有真核性12、分子杂交的化学原理是形成【D】A共价键B离子键C疏水键D氢键13、某一重组DNA（6.2kb）的载体部分有两个SmaI酶切位点。用SmaI酶切后凝胶电泳上出现四条长度不同的带子，其长度总和与已知数据吻合，该重组分子插入片段上的SmaI酶切位点共有【D】A4个B3个C2个D至少2个14、下列设计的探针中，最佳的是【D】AACATTAAATTATTBGGGCACACCTTGATAAGGTDCGGACTTGACCATC15、cDNA法获得目的基因的优点是【A】A成功率高B不含内含子C操作简便D表达产物可以分泌二、名词解释（每题2分，共20分）1、Southernblotting:Southern印迹：Southern发明的一种影印转移物质的方法。2、Cosmidvector:黏粒载体：含有cos位点的质粒载体。3、cDNAlibrary:cDNA文库：是指某生物某一发育时期所转录形成的cDNA片段与某种载体连接而成的克隆的集合。4、RACE:是一种通过PCR进行cDNA末端快速克隆的技术，是以mRNA为模板反转录成cDNA第一链后用PCR技术扩增出某个特异位点到3，或5，端之间未知序列的方法。5、Probe:探针：指被标记物质标记了的核酸。6、RT-PCR：逆转录PCR：先用逆转录酶作用于mRNA，以寡聚dT为引物合成cDNA第一链，然后用已知一对引物，扩增嵌合分子，这种方法称为逆转录PCR。7、Insertinactivation:插入失活，基因工程载体上的某些选择标记基因常常含某种或某几种限制性内切酶的单一酶切位点，在该位点用相应的限制性内切酶处理，并将外源DNA片段插入该位点，则插入的外源DNA片段将破坏原有基因的读码框，往往导致原有的选择标记基因无法翻译表达，或即使翻译表达，形成的也是丧失了原有生物活性的蛋白质，这一现象称为插入失活。。8、S-DSequence:S-D序列：在大肠杆菌mRNA的核糖体结合位点上，含有一个转译起始密码子及同16S核糖体RNA3，末端碱基互补的序列，该序列最初由Shine、Dalgarno发现，故后来命名为Shine—Dalgarno序列，简称S-D序列。9、Shuttleplasmidvector:穿梭质粒载体：指一类由人工构建的具有两种不同复制起点的选择标记，因而可在两种不同宿主细胞中存活和复制的质粒载体。10、MCS:指载体上人工合成的含有紧密排列的多种限制核酸内切酶的酶切位点的DNA片段。三、简答题（每题5分，共25分）1、理想质粒载体的必备条件？答：⑴具有较小的分子质量和较高的拷贝数。⑵具有若干限制性核酸内切酶的单一酶切位点。⑶具有两种以上的选择标记基因。⑷缺失mob基因。⑸插入外源基因的重组质粒较易导入宿主细胞并自制和表达。2、核酸操作的基本技术有哪些？S-D序列：在大肠杆菌mRNA的核糖体结合位点上，含有一个转译起始密码子及同16S核糖体RNA3，末端碱基互补的序列，该序列最初由Shine、Dalgarno发现，故后来命名为Shine—Dalgarno序列，简称S-D序列。1、什么是包涵体？重组蛋白在胞内表达时，常常以不溶性蛋白聚集成的晶状物形式存在，这种晶状体即包涵体。包涵体的形成是外源蛋白的高效表达时的普遍现象，这是由于肽链折叠过程中部分折叠的中间态发生了错误聚合，而不是形成成熟的天然态或完全解链的蛋白。2、什么是α-互补筛选？质粒载体具有β-半乳糖苷酶基因（lacZ），当外源DNA插入到它的lacZ，可造成表达后的β-半乳糖苷酶失活，利用这一点就可以通过大肠杆菌转化子菌落在添加有X-gal-IPTG培养基中的颜色变化鉴别出重组子和非重组子。有些大肠杆菌上带有lacZ基因的部分编码序列，质粒载体中含有别一部分编码序列，当质粒转入载体后，可形成具有酶活性的蛋白质。这种lacZ基因上缺失了一部分编码序列的突变体与带有这一部分编码序列的突变体之间实现互补的现象叫α互补。3、限制性核酸内切酶的活性受哪些因素影响？⑴酶的纯度。⑵DNA样品的纯度。⑶DNA的甲基化程度。⑷酶切反应的温度与时间。⑸DNA分子的构型。⑹限制性核酸内切酶的反应缓冲液。5、基因工程诞生的理论基础是什么？是现代分子生物学领域理论上的三大发现和技术上的三大发明。理论上的三大发现：①证实了DNA是遗传物质②揭示了DNA分子的双螺旋结构模型和半保留复制机理③遗传密码的破译和遗传信息传递方式的确定技术上的三大发明：①限制核酸内切酶的发现与DNA切割②DNA连接酶的发现与DNA片段的连接③基因工程载体的研究与应用四、问答题（每题10分，共40分）1如何有效地提高外源基因的表达效率？⑴提高启动子强度⑵缩短启动子同克隆基因间距离⑶高效的翻译起始序列⑷高效的转录终止区⑸提高质粒拷贝数及稳定性⑹用以下方法提高翻译水平：①调整SD序列与AUG间的距离②用点突变的方法改变某些碱基③增加mRNA的稳定性的⑺减轻细胞的代谢负荷：①诱导表达②表达载体的诱导复制⑻提高表达蛋白的稳定性，防止其降解：①克隆一段原核序列，表达融合蛋白②采用某种突变菌株③表达分泌蛋白质2试述载体构建一般方法A目的基因分析（1）ORF分析（2）酶切位点分析B载体选择与分析（1）多克隆位点分析（2）抗性标记分析（3）启动子与其他筛选标记分析C连接体系与连接时间确定4大肠杆菌作为基因工程受体菌的优缺点是什么？优点：大肠杆菌培养方便、操作简单、成本低廉，基础生物学、分子遗传学等方面的背景知识清楚，对其基因表达调控的分子机理也比较了解，而且历经二十年的基因工程实践，大肠杆菌已发展成为一种安全的基因工程实验体系，有多种适用的寄主菌株和载体系列，大肠杆菌易于进行工业化批量生产。缺点：在通常情况下，细菌的RNA聚合酶不能识别真核的启动子；许多真核基因的蛋白质产物需要经过翻译后的加工修饰，如正确的折叠和组装，而细菌中通常并没有这样的修饰机制，从而可能导致真核基因在大肠杆菌中的翻译产物无法产生有活性的蛋白；外源真核基因所表达的蛋白质分子往往能够被细菌的蛋白酶识别，并被当做“异已分子”降解掉。二、选择题（每题1分，共15分）1(d)限制性核酸内切酶是由细菌产生的，其生理意义是A修复自身的遗传缺陷 B促进自身的基因重组C强化自身的核酸代谢 D提高自身的防御能力2(a)生物工程的下游技术是A基因工程及分离工程 B蛋白质工程及发酵工程C基因工程及蛋白质工程 D分离工程 及蛋白质工程3(a)基因工程操作常用的酶是:(I内切酶II连接酶III末端转移酶IV聚合酶A.I+IIB.I+III+IVC.II+III+IVD.I+II+IV+III4(d)限制性内切核酸酶的星活性是指：A在非常规条件下，识别和切割序列也不发生变化的活性。B活性大大提高C切割速度大大加快D识别序列与原来的完全不同5(d)下列五个DNA片段中含有回文结构的是A.GAAACTGCTTTGAC B.GAAACTGGAAACTGC.GAAACTGGTCAAAG D.GAAACTGCAGTTTC6(c)关于cDNA的不正确的提法是：A同mRNA互补的单链RNAB同mRNA互补的含有内含子的DNAC以mRNA为模板合成的双链RNAD以上都不正确7(a)下列有关连接反应的叙述，错误的是A.连接反应的最佳温度为37℃B.连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于10%C.连接反应缓冲体系的ATP浓度不能高于1mMD.连接酶通常应过量2-5倍8(c)T4-DNA连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段DNA片段连接在一起，其底物的关键基团是A.2'-OH和5'–P B.2'-OH和3'-PC.3'-OH和5'–P D.5'-OH和3'-P9(d)载体的功能是A.外源基因进入受体的搭载工具 B.不能为外源基因提供整合能力C.不能提供复制能力 D.不能为外源基因提供表达能力10(c)黏性末端连接法，不仅操作方便，而且A产生新切点B易于回收外源片段C载体不易环化D影响外源基因的表达11(c)下列哪种克隆载体对外源DNA的容载量最大?A质粒B黏粒C酵母人工染色体(YAC)Dλ噬菌体12(b)考斯质粒（cosmid）是一种A.容量最大一种载体B.由λ-DNA的cos区与一质粒重组而成的载体C.是一种单链DNA环状载体D.不能在受体细胞内复制，但可以表达13(d)某一重组DNA的载体部分有两个BamHI