啤酒生产中常见厌氧菌的检测与分析

啤酒生产中常见厌氧菌的检测与分析

1分析厌氧菌的潜在活动,培养农村菌培养基1、细菌；2、特殊厌氧菌；3、选择性好氧菌或选择性厌氧菌。目前我们所进行的试验菌是专性厌氧菌或兼性厌氧菌。在啤酒生产中常见的污染细菌有:乳酸菌、足球菌、醋酸杆菌、醋酸单胞菌、发酵单胞菌、多变黄杆菌、大肠菌群等。其中厌氧或兼性厌氧的细菌有巴氏乳酸杆菌、足球菌、发酵单胞菌、大肠菌群……。啤酒中的大多数厌氧菌是潜在危害菌,使啤酒产生双乙酰,变酸,引起酒液浑浊、失光、变味以及发酵变性等等。我们要检查出这些有害厌氧菌,寻找有害厌氧菌的最适培养基。按微生物培养基的用途,培养基可分为四类:1、基础培养基;2、鉴别培养基;3、增殖培养基;4选择培养基。我们所用的既是增殖培养基,又是选择性培养基。2ph值和氧化还原电位对菌体生长的影响2.1营养成分的恰当配比:一般微生物的碳∶氮=5∶1,厌氧菌必须有充足碳源,才能良好生长,还要有适当的生长素。2.2渗透压:培养基内各种元素离子的比例需要平衡,浓度过高,渗透压大,抑制微生物的生长;浓度偏低,生长就缓慢,世代时间长。2.3pH值:每种菌体均有各自的最适pH值范围,而厌氧菌的最适pH值约4～6。pH值太高或太都不利于细菌的生长。为此在配制培养基时加入缓冲溶液或调节pH值。2.4氧化还原电位:一般的好氧细菌或兼性好氧菌氧化还原电位对它们影响不大,但对专性厌氧菌有较大的毒害作用。因此在培养厌氧菌时,制造无氧环境是非常重要的。3材料2.3次1、高压锅1台2、干燥箱1台3、培养箱1台4、厌氧罐1只5、厌氧药1袋6、厌氧催化剂1包7、厌氧指示剂1根8、1ml移液管数根9、1000ml烧杯1个10、1000ml容量瓶1个11、500ml三角瓶数个12、棉塞数团13、培养基5种14、培养血数个4培养基的配制4.1MH1培养基配方:酵母膏10g放线菌酮20g(进口)葡萄糖10g清酒900ml(原浓10°P)醋酸钠24g琼脂20g抗坏血酸加至2g去离子水加至1000mlpH5.0MH1培养基配制方法:将酵母膏、葡萄糖、醋酸钠、抗坏血酸、放线菌酮按配方量称准后放入1000ml烧杯中,加入适量清酒,搅拌使之溶解。待全部溶解后,加入剩余清酒,再用HCL调节pH值至5.0,最后用蒸馏水定容1000ml。分装三角瓶,按2%比例加入琼脂,用高压锅在121°C高压杀菌30min,冷却备用。4.2MH2培养基配方:酵母膏5g麦芽汁100ml(11%Bx)KH2PO40.5gCaCl20.15gKCL0.4gFeCl0.05g放线菌酮20mg琼脂20g加水至1000mlpH5.0MH2培养基的配制方法,将以上各配料称好收入1000ml烧杯中,边加热边搅拌,待全部溶解,冷至室温,调节pH5.0,定容1L,分装三角瓶。按2%比例加入琼脂,包扎好,用高压锅在121°C高压下杀菌30min,冷却备用。4.3MH3培养基配方:番茄汁100ml蛋白胨20g酵母膏10g泛酸钙2.0g柠檬酸1.1gMgSO040.2gMnSO40.01gFeSO40.5g吐温800.5g溴甲酚绿0.022gK2HPO40.5gKH2PO40.5g加水至1000mlpH5.0琼脂20g放线菌酮20mg(进口)MH3培养基的配制方法:在适量的热水中溶解K2HPO4和KH2PO4。随后逐一按顺序溶解番茄汁,蛋白胨、酵母膏、泛酸钙、柠檬酸,边加热边搅拌,溶解最后加入微量元素,调节pH值5.0,定容1L。分装三角瓶后,按2%比例加入琼脂,用高压锅在121°C高压杀菌30min,冷却备用。4.4MH4培养基配方:牛肉膏5g蛋白胨10gNaCl5g放线菌酮20mg琼脂20g加水至1000mlpH7.2MH4培养基的配制方法:将牛肉膏、蛋白胨、NaCl、放线菌酮按配方称量,放入烧杯中加入适量的热水,边加热边搅拌溶解,待全部溶解后冷却至室温,调节pH7.2,定容1L。分装三角瓶后,按2%比例加入琼脂,用高压锅在121°C高压杀菌30min,冷却备用。4.5MH5培养基配方:酵母膏5.0g葡萄糖20g琼脂20g放线菌酮20mg(进口)加水至1000mlpH4.8MH5培养基的配制方法:按配方量准确称取酵母膏、葡萄糖、放线菌酮,用适量水溶解,调节pH4.8,定容1L,分装三角瓶后,按2%比例加入琼脂,用牛皮纸包扎,用高压锅在121°C高压杀菌30min,冷却备用。5专性厌氧/兼性厌氧微生物培养5.1原理:利用选择性培养基,将待测样品接入制成平板的培养基中,将培养皿放入厌氧罐内,割开厌氧药按指定位置放入罐内,放入一支厌氧指示剂、一包厌氧催化剂。当罐内加入10ml水时,使罐内产生氢气,在催化剂作用下发生化学反应,生成水,而使罐内形成无氧状态,满足专性厌氧或兼性厌氧微生物生长条件,在27～30°C培养箱培养5～7d。5.2操作步骤:5.2.1对所需仪器及培养基进行灭菌。5.2.2取污染杀菌的发酵液作为试验样液5.2.3取培养皿若干个,分别做好编号,用1ml的移液管吸取待测样于培养皿中。5.2.4将已熔化的培养基(温度约为45±2°C)倒入已有样液的培养皿中,立即摇匀。5.2.5将凝固后的培养皿倒扣于厌氧罐中,取一袋厌氧药(BBLGaspakAnaerobicSystemEnvelopes)和一支厌氧指示剂、厌氧催化剂,剪开厌氧药袋,加入10ml水,立即盖上盖子,在27°C培养箱中培养6d。6见表17培养基的乳酸菌选择7.1从以上5种培养基试验结果情况看,除MH4没有厌氧菌落外,其余均有数量不等的菌落,说明MH4培养基不适合厌氧菌生长。主要原因是MH4培养基碳源不足。7.2虽然MH3长得菌落数多而大,但仅能检出乳酸菌,足球菌未能检出。原因是足球菌世代时间长,需更长时间培养。7.3MH1培养基和MH2培养基的乳酸菌落基本相同。说明这两种乳酸菌的选择性培养基所选择的乳